六味地黄丸介导RAGE抑制MMP-2/MMP-9对Aβ_(1-40)损伤bEnd.3细胞紧密连接蛋白的影响

目的探讨六味地黄丸对β淀粉样蛋白1-40(Aβ_(1-40))损伤的小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3)的保护作用及其机制。方法采用CCK8法检测Aβ_(1-40)和六味地黄丸含药血清(MSLDP)对细胞活性的影响,筛选合适的作用浓度。将bEnd.3细胞分为对照组、Aβ_(1-40)组、MSLDP+Aβ_(1-40)组和MSLDP组,采用Western blot检测低密度脂蛋白相关蛋白1(LRP1)、晚期糖基化终末产物受体(RAGE)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白表达,免疫荧光检测LRP1、RAGE、ZO-1表达;再将bEnd.3细胞分为对照组、Aβ_(1-40)组、FPS-ZM1(RAGE抑制剂)+Aβ_(1-40)组和FPS-ZM1+Aβ_(1-40)+MSLDP组,Western blot检测RAGE、MMP-9、MMP-2、ZO-1蛋白表达。结果Aβ_(1-40)呈剂量依赖性降低bEnd.3细胞活性(P<0.01),MSLDP对Aβ_(1-40)损伤的细胞活性具有保护作用(P<0.05,P<0.01),因此选择10μmol/L Aβ_(1-40)和10%MSLDP进行后续实验。与对照组比较,Aβ_(1-40)组RAGE、MMP-2、MMP-9蛋白表达升高(P<0.01),LRP1、ZO-1、BDNF蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),并且LRP1、ZO-1荧光强度降低(P<0.01),RAGE荧光增强(P<0.01);与Aβ_(1-40)组比较,MSLDP组RAGE、MMP-2、MMP-9蛋白表达和RAGE荧光强度降低(P<0.05,P<0.01),而LRP1、ZO-1、BDNF蛋白表达和LRP1、ZO-1荧光强度升高(P<0.05,P<0.01)。与Aβ_(1-40)组比较,Aβ_(1-40)+FPS-ZM1组MMP-2、MMP9、RAGE蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),ZO-1蛋白表达升高(P<0.05);Aβ_(1-40)+FPS-ZM1+MSLDP组MMP-2、MMP9、RAGE蛋白表达降低(P<0.01),ZO-1蛋白表达升高(P<0.01),FPS-ZM1和MSLDP联合使用的效果更佳。结论六味地黄丸能够保护Aβ_(1-40)损伤的脑微血管内皮的细胞紧密连接,减轻血脑屏障障碍,保护神经血管单元防治阿尔茨海默病,可能通过调节RAGE途径抑制MMP-2/MMP-9途径实现。

Aβ_(1-40)、S-100β与老年口腔颌面肿瘤患者术后认知功能障碍的相关性

目的:观察行口腔颌面肿瘤切除手术的老年患者血浆中Aβ_(1-40)及S-100β在围术期的浓度变化及与术后认知功能障碍的相关性。方法:选择2014年5月—10月择期接受全身麻醉下行口腔颌面肿瘤切除手术的老年患者(年龄≥60岁)115例,所有入选患者于术前1 d、术后7 d行神经心理测试,判定患者是否发生术后认知功能障碍。测定所有患者麻醉诱导前及术后24 h、7 d血浆中Aβ_(1-40)及S-100β蛋白的含量,根据术后7 d是否发生POCD分为POCD组及非POCD组,观察Aβ_(1-40)及S-100β蛋白的含量与POCD的关系。采用SPSS19.0软件包对数据进行统计学分析。结果:POCD组术后7 d POCD的发病例数为37例(32.2%)。与术前比较,POCD组患者术后24 h POCD组患者S-100β含量显著升高(P<0.05);术后24 h血浆中S-100β及Aβ_(1-40)含量显著升高(P<0.05)。与非POCD组相比,POCD组患者术后24 h血浆中S-100β含量显著升高(P<0.05);术后24 h、7 d血浆中Aβ_(1-40)含量显著升高(P<0.05)。结论:Aβ_(1-40)、S-100β在术后升高可能与口腔颌面外科肿瘤切除术后POCD发病密切相关,术后血浆Aβ_(1-40)和S-100β浓度较术前持久增高明显者,发生POCD的可能性增加。Aβ_(1-40)、S-100β或许可作为行口腔肿瘤切除术患者术后POCD发病的预测指标。

二精丸对去卵巢+D-半乳糖联合Aβ_(1-40)致肾阴虚AD大鼠海马多巴胺神经功能的影响

目的探讨二精丸对去卵巢+D-半乳糖联合β-淀粉样蛋白_(1-40)(Aβ_(_(1-40)))致肾阴虚阿尔茨海默病(AD)大鼠海马多巴胺神经功能的影响。方法将56只雌性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、二精丸高剂量组(9.0 g·kg^(-1))、二精丸中剂量组(4.5 g·kg^(-1))、二精丸低剂量组(2.25 g·kg^(-1))。造模大鼠在卵巢摘除手术1周后,腹腔注射D-半乳糖(100 mg·kg^(-1)),每日1次,持续7周;卵巢摘除手术4周后,双侧海马注射Aβ_(1-40)建立肾阴虚AD大鼠模型。卵巢摘除手术5周后,各组按照相应剂量开始灌胃给药,模型组与假手术组灌胃等量生理盐水,给药容量为10 mL·kg^(-1),每日1次,连续30d。末次给药1h后断头取海马组织,采用ELISA法检测大鼠海马组织多巴胺(DA)水平,采用免疫组化法检测大鼠海马CA1区多巴胺D1受体、酪氨酸羟化酶(TH)的表达情况。结果与假手术组比较,模型组大鼠的海马组织DA水平显著降低(P<0.01),海马CA1区多巴胺D1受体及TH表达明显下调(P<0.01)。与模型组比较,二精丸高剂量组大鼠的海马组织DA水平明显升高(P<0.01);二精丸各剂量组大鼠海马CA1区的D1受体表达明显上调(P<0.05,P<0.01);二精丸高、中剂量组大鼠海马CA1区的TH表达明显上调(P<0.05,P<0.01)。结论二精丸能够提高海马组织的DA水平,上调海马组织的多巴胺D1受体及TH表达,促进去卵巢+D-半乳糖联合Aβ_(1-40)致肾阴虚AD大鼠的海马多巴胺神经功能。

Cu(Ⅱ)Aβ_(1-40)复合物的制备及其神经毒性的初步研究

目的:探索Aβ神经毒性的来源和作用机制。方法:体外制备了Cu(Ⅱ)Aβ1-40复合物,并对该复合物体内外的生物学活性进行了分析。结果:Cu(Ⅱ)Aβ1-40复合物ESR波谱呈现蛋白束缚Cu(Ⅱ)的谱线特征,提示:Cu(Ⅱ)已以某种方式与Aβ结合。Cu(Ⅱ)Aβ1-40复合物可利用水溶液中分子氧以及XO X系统产生的超氧阴离子自由基形成过氧化氢;而单纯的Aβ1-40却无此作用。CD谱显示:与单纯的Aβ1-40比较,Cu(Ⅱ)Aβ1-40复合物的α-螺旋百分含量有所降低。Cu(Ⅱ)Aβ1-40复合物对原代培养海马神经元的生长抑制作用要比单纯Aβ1-40作用出现的早。大鼠脑海马微量注射Cu(Ⅱ)Aβ1-40复合物后行为学改变要比单纯Aβ1-40作用更为明显。结论:Aβ与Cu(Ⅱ)结合后启动活性氧系统进而造成神经细胞损伤,这可能是Aβ在AD脑内神经毒性的作用机制之一。

人参皂甙Rg1对抗Aβ_(1-40)诱导大鼠皮层神经元凋亡的实验研究

目的:观察人参皂甙 Rg1对 Aβ_(1-40)诱导大鼠皮层神经元凋亡的影响以及 Rg1对 Caspase-3活性的影响。方法:用吖啶橙-溴化乙锭(AO-EB)染色、TUNEL 染色、DNA 琼脂糖凝胶电泳方法观察神经元凋亡形态学和生态改变;荧光分光光度计法检测凋亡效应分子 Caspase-3活力的变化;RT-PCR 法检测 Cas-pase-3 mRNA 的表达水平。结果:人参皂甙 Rg1预处理可显著降低 Aβ_(1-40)诱导大鼠皮层神经元的凋亡率,凋亡细胞特有的 DNA 梯形条带消失,Caspase-3活力下降,Caspase-3 mRNA 表达下调。结论:人参皂甙 Rg1可通过抑制 Caspase-3的激活,使 Aβ_(1-40)诱导的大鼠皮层神经元减少凋亡。

红景天苷对Aβ_(1-40)诱导PC12细胞损伤的保护作用及机制

目的观察红景天苷对Aβ_(1-40)诱导PC12细胞损伤的保护作用,探讨改善能量代谢障碍对阿尔茨海默病发生发展的干预机制。方法利用Aβ_(1-40)诱导PC12细胞损伤模型,采用CCK-8法检测细胞活力,ATP试剂盒(比色法)检测ATP含量,免疫荧光法和Western blot法检测相关蛋白PGC-1α的表达。结果红景天苷能够抑制Aβ_(1-40)诱导的PC12细胞活力下降(P<0.05),增加ATP含量(P<0.01),免疫荧光和Western blot结果均显示红景天苷能够上调PC12细胞的PGC-1α蛋白表达(P<0.05)。结论红景天苷可能通过上调能量代谢相关蛋白PGC-1α的表达,从而提高ATP含量来抑制Aβ_(1-40)诱导PC12细胞的损伤,对阿尔茨海默病的治疗具有一定的应用价值。

脑健冲剂对AD大鼠5-HT和MAO影响的实验研究

目的采用脑健冲剂治疗AD,观察脑健冲剂对AD大鼠海马区5-羟色胺和MAO的影响。方法本实验采用D-半乳糖拟衰老,Aβ1-40损害联合所致AD模型,用脑健冲剂治疗。结果脑健冲剂可提高海马5-羟色胺含量和降低MAO的水平。结论脑健冲剂可治疗AD。