毕赤酵母Kar2p过表达对假黑盘菌素表达量的影响

Kar2p是一种分子伴侣蛋白,为研究其对外源蛋白在毕赤酵母中表达的影响,从毕赤酵母菌株GS115中克隆出编码该蛋白的基因,利用其对毕赤酵母转化子P-Ple进行二次转化,获得了能够同时过表达假黑盘菌素和Kar2p的二次转化子P-Ple Kar;采用荧光定量PCR方法,对P-Ple和P-Ple Kar两个转化子中的Kar2p转录水平进行了测定发现,在P-Ple Kar中Kar2p的转录水平比P-Ple上调了约18倍。对P-Ple和P-Ple Kar两个转化子的生长曲线进行比较,发现Kar2p过表达对宿主细胞的生长无明显影响,但对外源蛋白假黑盘菌素的表达确实产生了一定的抑制作用,受Kar2p的影响,在诱导培养48 h时,假黑盘菌素的最高抑菌活性明显降低。这种抑制表达不单针对假黑盘菌素,对毕赤酵母的蛋白酶表达和分泌也同样起到了一定的抑制作用,具体表现在分泌到培养液中的假黑盘菌素在发酵后期仍然能保持较高抑菌活性,没有被发酵液中的累积的蛋白酶快速降解。与P-Ple相比,P-Ple Kar假黑盘菌素的表达量虽略有降低,但可以维持更长时间的稳定表达。

敦煌文献PT.1287-1288中的“Nyen Kar”考

这一古地名“Nyen Kar”是敦煌文献写卷P.T.1288-1287中出现的一个古地名,而且出现的频率较高,但是该地名究竟在何处,藏学界说法不一。在敦煌文献P.T1287-1288中出现该地名21次,并云?吐蕃两代赞普都在此居住过,足以证明其重要性。文章以敦煌文献P.T1287-1288的“Nyen Kar”这一古地名为研究对象,通过文献阅读、实地调查,并比较敦煌文献和新疆出土的木简及吐蕃时期的碑文,采用民族志等研究方法对该其进行了田野调查和考释。“Nyen Kar”不仅仅是地方和宫殿的名称,也可能是赞普时期的一个军队名称。同时该地名作为重要的古地名,保护、复原以及开发尤为重要。

kar交配法转移YACs至新宿主的研究

利用改进的kar交配法,将一个含有340kb人基因组DNA的YAC片段的供体酵母菌株YAC23与受体菌株YLB504进行交配,以选择平板对所形成的候选YAC导入菌进行筛选。经PCR分析,候选YAC导入菌在404bp处有一个扩增带,即具有受体菌株的交配型(MAT α)。进一步用脉冲电泳进行核型鉴定,证实YACs己成功地进入受体,实现了YACs从一个宿主到另一个宿主之间的转移。

过表达KAR2基因对毕赤酵母产米黑根毛霉脂肪酶的影响

Kar2p是分子伴侣蛋白,可与新生肽结合,促进新生肽进入内质网。为研究其对米黑根毛霉脂肪酶(RML)在毕赤酵母中表达的影响,通过PCR方法从毕赤酵母菌株中克隆到KAR2基因,并用毕赤酵母胞内表达载体pPIC3.5K构建过表达质粒KAR2-pPIC3.5K。用电转化的方法,将KAR2-pPIC3.5K二次转化到含4-拷贝rml基因的毕赤酵母重组菌株4pRML-X33中,获得能同时过表达RML和KAR2p的二次转化子4pRML-X33-KAR2。摇瓶发酵发现,过表达KAR2基因对菌株生长无明显影响,但RML胞外酶活降低。采用RT-qPCR方法分析菌中rml及UPR相关基因的转录水平,发现KAR2基因转录水平上调了3.7倍,虽然仅引起与UPR相关的HAC1基因转录水平的下调,但却使rml的表达下调43%。说明KAR2过表达导致RML产量降低是降低了rml的mRNA量,而不是增加内质网中蛋白折叠的压力。

敦煌古藏文I.O.750所载吐蕃行宫“Nyen Kar”地望考辨

本文依据敦煌古藏文文献I.O.750等史料,对吐蕃早期政治经济文化中心之一“Nyen Kar”行宫进行了考察。据相关史料记载,此行宫始建于吐蕃赞普赤松赞时期,之后赤芒松芒赞(住锡三年)、赤都松(住锡十六年)、赤德祖赞(住锡一年)以及赤松德赞(住锡一年)等四位吐蕃赞普相继将其作为住锡地,时达二十一年之久。关于“Nyen Kar”的具体位置,笔者在以往学界提出的三种观点的基础上,从历史文献学、地名学角度,运用实地考察法进行深入考察,认为其具体位置在今拉萨市达孜区德庆乡“念喀村”附近的德庆宗日遗址。

敦煌古藏文文献I.0.750等所见吐蕃赞普行宫“Nyen kar”与其相关的若干地名考析

本文依据敦煌古藏文文献I.0.750等史料,对吐蕃早期政治经济文化中心之一“Nyen Kar”行宫的地望进行了考察。据相关史料记载,此行宫始建于吐蕃赞普赤松赞时期,之后赤芒松芒赞(住锡三年)、赤都松(住锡十六年)、赤德祖赞(住锡一年)以及赤松德赞(住锡一年)等四位吐蕃赞普相继作如住锡地,时达二^一年之久。关于“Nyen Kar”的具体位置,笔者在以往学界提出的三种观点的基础上,运用历史文献学、地名学和实地考察法进行深入考察,认为其具体位置在今拉萨市达孜区德庆乡“念喀村”附近的德庆宗日遗址。

女性生殖道中肾腺癌临床病理及分子特征分析

目的:探讨女性生殖道中肾腺癌的临床特点、组织病理学形态及免疫表型和分子特征。方法:收集2014年1月至2023年12月于首都医科大学附属北京妇产医院确诊的女性生殖道中肾腺癌5例(宫颈中肾腺癌4例及阴道中肾腺癌1例),回顾分析其临床病理资料。结果:5例患者平均年龄55岁(49~63岁)。主要临床表现为异常阴道出血。4例宫颈中肾腺癌均在术前行宫颈活检,但未明确诊断为中肾腺癌。患者均行根治性全子宫切除+双侧附件切除+盆腔淋巴结清扫±腹主动脉旁淋巴结切除术,术前和(或)术后行以铂类为基础的化疗±放疗±抗血管生成治疗。4例宫颈中肾腺癌诊断为FIGOⅠb1~Ⅱb期,1例阴道中肾腺癌诊断为Ⅲ期。宫颈中肾腺癌肿瘤主体位于宫颈管壁深层,肿瘤周边存在中肾管残余/中肾管增生。5例中肾腺癌的免疫组化染色结果基本一致,阳性表达PAX8、GATA3、CD10,并阴性表达TTF-1、ER及PR,且4例为TP53野生型。1例宫颈中肾腺癌和1例阴道中肾腺癌均存在KRAS基因突变,突变位点分别为p.G12D及p.G12A。平均随访51个月(18~115月),1例阴道中肾腺癌患者在随访13个月时发生肺转移。结论:女性生殖道中肾腺癌是起源于中肾管残留或增生的罕见恶性肿瘤。中肾腺癌极易误诊,结合PAX8、GATA-3、CD10、ER、PR及TTF-1等免疫组化特征有助于明确诊断。中肾腺癌常与KRAS/NRAS的分子改变有关,为疾病的分子靶向治疗提供了依据。

卵巢中肾样腺癌一例并文献复习

目的探讨卵巢中肾样腺癌的临床病理特点及诊断、鉴别诊断。方法回顾性分析1例卵巢中肾样腺癌的临床资料、病理学特征及免疫组化、分子检测,并复习相关文献。结果患者老年女性,组织学上肿瘤呈乳头状、腺管状及筛孔状、实性网状、囊状,腺管状区部分管腔内可见嗜伊红物质,细胞形态温和,核呈圆形或卵圆形,核染色质粗颗粒或空泡状,核仁不明显,部分见核沟。免疫组化:Vimintin、CK7、CD10、TTF1、PAX8、PAX2全部或部分阳性,GATA3、P16、CR、CEA、Inhibin-α局灶或散在阳性,P53野生型,Ki-67约30%,ER、PR、WT-1、SF-1阴性。RT-RCR检测显示KRAS突变。结论卵巢中肾样腺癌罕见,组织学形态多样,结合免疫组化及分子检测可明确诊断。术后需化疗,其预后尚需积累多中心大样本研究证实。

王家卫电影文本语言风格探析

王家卫电影的文本语言独树一帜,尤其注重表现主人公的情感流向,在诗意化叙事场景中具有独特的地位。其运用抽象的文字符号进行表意,使得数字与时空、意象与记忆、独白与情感产生互联;运用错位的技法进行编码,使得文本语言与外部声响、人物行为和镜头场景之间呈现出矛盾的表意结构,在冲突中增强了情感表现;运用诗性语言解蔽真善美,使得文本语言中潜在的“情景合一”“理性超脱”“把握此在”内涵在叙事空间中得以充分显现,带给观众丰赡的人生启示。

新疆雪莲组织培养体系的优化

以新疆雪莲无菌苗的根、茎、叶为外植体,对各种不同激素配比条件下新疆雪莲的再生体系进行了探讨,结果表明:培养基MS+6-BA 0.1 mg/L+NAA 2.0 mg/L对愈伤组织诱导效果较好;而再生芽的诱导培养基为MS+6-BA0.4mg/L+NAA0.05mg/L+水解乳蛋白500mg/L;生根培养基为1/4MS+NAA 0.3 mg/L。

应用层序地层学方法恢复加里东期古地貌——以济阳坳陷沾化地区为例

加里东期风化壳发育的程度直接影响了相关储层的发育 ,而古地貌对次生孔隙的发育起决定作用。针对加里东期古风化面的重要性 ,文中把古地貌分为岩溶高地、岩溶斜坡和岩溶洼地 3个古地貌单元 ,并分析了原有古地貌恢复方法 (残余厚度法、标准法等 )存在的 4个缺点 ,在此基础上提出了以具有等时性的区域性不整合面为核心内容的层序地层学恢复古地貌方法。作者应用该方法对济阳坳陷沾化地区加里东期古地貌进行了恢复 ,并分析了该地区处于岩溶高地的 991潜山和处于岩溶洼地的孤岛潜山两个不同古地貌单元的岩溶发育特征。结果表明 ,层序地层学方法能准确地恢复加里东期古地貌 ,进而能准确地预测次生孔隙发育带 ,并最终指导与岩溶有关的油气勘探。

灵芝菌发酵培养基的优化及灵芝胞外多糖的分离纯化

用正交法研究了不同条件对灵芝菌生长影响，从中选出了灵芝 菌液体深层发酵的优化 培养基：葡萄糖 3.6%，蛋白胨 0.4%，pH 6.0，酵母膏 0.2%，KH2PO40.1%，MgSO 4· 7H2O 0.05%，Vit B1 0.005%，每升发酵液产干菌丝体 15.6 g，粗多糖 0.72 g。 经葡 聚糖凝胶层析对灵芝胞外多糖进行了分离纯化，共有 5 个组分，并用红外光谱、紫外光谱 ，气相色谱等手段进一步分析了灵芝胞外多糖的组成，结果表明灵芝胞外多糖系由甘露糖、 果糖、葡萄糖通过糖 β-D 糖苷键构成。

天山雪莲HPLC指纹图谱研究

目的建立天山雪莲药材的HPLC指纹图谱，为雪莲药材的快速质量控制提供依据。方法以绿原酸、紫丁香苷、芦丁、木犀草素、芹菜素5种对照品为对照，采用HPLC法，测定了10批次不同产地天山雪莲的色谱图，确立参照指纹图谱。色谱条件：色谱柱Diamonsil^TM C18（250mm×4．6mm，5μm），甲醇-水（0．8％醋酸，0．2％三乙胺，pH3．5-4．0）线性梯度洗脱，柱温30℃，检测波长270nm，记录时间30min，体积流量1．0mL／min。结果标示出天山雪莲的13个特征指纹峰。结论该方法准确、重现性好，为天山雪莲的指纹图谱质量控制提供了参考。

沙戟化学成分的研究

目的研究新疆产沙戟全草的化学成分。方法反复硅胶柱色谱,薄层色谱,凝胶柱色谱,波谱分析技术和理化常数对照。结果分离得到12个化合物,分别鉴定为伞形花内酯(Ⅰ),七叶内酯(Ⅱ),东莨菪素(Ⅲ),秦皮素(Ⅳ),鼠李素(Ⅴ),槲皮苷(Ⅵ),芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅶ),秦皮苷(Ⅷ),木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅸ),山柰酚-3-O-β-D-芦丁糖苷(Ⅹ),芹菜素-7-O-β-D-芦丁糖苷(Ⅺ)和芦丁(Ⅻ)。结论上述化合物均首次从沙戟属中分离得到。

雪莲的研究进展

雪莲是我国珍稀名贵的中药材 ,具有很高的药用价值 ,应用前景广阔。雪莲生长环境恶劣 ,自然资源十分有限。由于近年来野生雪莲乱采滥挖现象严重 ,加之人工栽培困难 ,雪莲已被列为国家三级濒危物种而受到保护。综述雪莲的有效成分、药理作用、开发利用现状及解决雪莲资源短缺的途径 ,并对雪莲今后研究发展的方向进行了展望 ,以期更加有效地保护和合理开发利用雪莲资源、满足医药市场需求、保护西部生态环境和促进西部经济发展。

新疆雪莲多倍体的诱导初探

用秋水仙素和2%二甲基亚砜共同处理新疆雪莲种子、胚根和茎段,以诱导多倍体雪莲。结果表明,茎段经过100 mg.L-1秋水仙素处理3 d诱导效果最佳,同时,离体培养其嵌合体苗茎段及叶片,诱导不定芽生成,获得了四倍体细胞比例达到90%以上的植株。

新疆雪莲全长cDNA文库构建及表达序列标签(ESTs)特性分析

以野生新疆雪莲(Saussurea involucrata Kar.et Kit)为研究材料,利用Creator SMARTTMcDNA Library Construction技术构建了雪莲全长cDNA文库,从野生雪莲中提取总RNA和mRNA,用分离到的微量mRNA合成cDNA第1链。通过长距离PCR扩增得到足够量的双链cDNA。将SfiⅠ酶切后并纯化的cDNA片段连接到经SfiⅠ酶切的噬菌体λTripIEX2上,并对噬菌体进行包装,建成cDNA的全长库。经大肠杆菌XL1-Blue平板检测,原始文库滴度达4.03×107(pfu/mL)。随机挑选500个克隆进行序列测定,PCR鉴定结果显示多数插入片段均在500 bp以上。将所测序列经GenBank检索和生物信息学比较,共有56个序列为非冗余数据。其中有14个cDNA片段序列在GenBank上无明显的同源性,42个片段与已报道的基因有较高的同源性。这些EST数据为进一步筛选和克隆雪莲特异性表达基因提供了材料平台,为雪莲基因组数据增补了大量信息。

新疆雪莲化学成分的分离与鉴定

目的对新疆雪莲的化学成分进行研究。方法采用硅胶、凝胶柱色谱和重结晶等分离方法对体积分数为75%的新疆雪莲乙醇溶液提取物进行成分分离,通过谱学分析方法结合理化性质进行结构鉴定。结果共分离得到8个化合物,分别鉴定为大苞雪莲内酯(involucratolactone,1)、11α,13-dihydrozaluzanin-C(2)、dihydrozaluzanin-C(3)、7β-羟基谷甾醇(7β-hydroxysitosterol,4)、7β-羟基豆甾醇(stigmast-5,22-dien-3β,7β-diol,5)、山奈酚(kaempferol,6)、高车前素(hispidulin,7)、粗毛豚草素(jaceosidin,8)。结论化合物3、5为首次从风毛菊属植物中分离得到,化合物2、4为首次从新疆雪莲植物中分离得到。

转天山雪莲冷调节蛋白基因烟草的获得及其抗寒性鉴定

从已建立的天山雪莲cDNA文库中随机挑取单克隆,采用通用引物M13扩增出基因序列并测序,然后将该序列在GenBank中进行比对,根据该序列设计特异引物进行PCR,最终获得了冷调节蛋白基因siCOR的完整开放读码框(ORF);构建植物表达载体,通过农杆菌介导法获得转基因烟草,用RT-PCR对转化烟草进行鉴定,收取种子后筛选出纯合的T3株系,并通过冷冻胁迫进行抗寒性分析。结果表明:(1)siCOR大小661bp,与禾本科植物粳稻的冷调节蛋白基因一致性最高(65.04%)。(2)与野生型植株相比,转siCOR基因烟草均叶片浓绿、无分支侧芽,生长快;在冷冻胁迫条件下,转siCOR基因的烟草叶片相对含水量、PSⅡ相对量子产率降低幅度、相对电导率和丙二醛含量的升高幅度均低于野生型烟草植株,而且转siCOR基因烟草植株叶片出现萎蔫症状的时间较迟、程度较轻,受到的伤害也较轻。研究发现,在冷冻胁迫条件下,转siCOR基因烟草植株表现出良好的生理和生长优势,显示出了较强的抗寒特征。