氧化低密度脂蛋白对人肾小球系膜细胞A型清道夫受体表达的调节作用

目的研究氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)对人肾小球系膜细胞(HMC)A型清道夫受体(SR-A)表达的调节作用,探讨在慢性肾脏疾病中Ox-LDL加重肾病进展的作用机制。方法脂质体转染含SR-AcDNA的表达质粒,建立稳定高表达SR-A的人肾小球系膜细胞株(HMCL),油红“O”染色检测HMCL对Ox-LDL的摄取;RT-PCR法检测Ox-LDL和LDL对HMCSR-AmRNA表达的作用。结果稳定高水平表达SR-A的HMCL对Ox-LDL的摄取明显强于未转染细胞;Ox-LDL上调HMCSR-AmRNA的表达,作用于24h达到高峰;Ox-LDL(10～100μg/ml)作用24h对HMCSR-AmRNA的上调作用呈剂量依赖性;天然LDL对SR-A的表达无明显影响。结论在HMC,SR-A是Ox-LDL进入细胞内的主要受体之一,Ox-LDL具有上调HMCSR-AmRNA表达的作用,推测在慢性肾脏疾病进展中,局部沉积的LDL经氧化修饰后可能通过刺激SR-A的表达进入细胞内增强其对HMC的毒性作用,进而加重肾小球硬化的进展。

稳定高表达A型清道夫受体的人肾小球系膜细胞系的建立及其受体功能

目的探讨A型清道夫受体(SR-A)在人肾小球系膜细胞中的表达功能和受体特异性。方法采用脂质体转染法,将人SR-A cDNA转染入人肾小球系膜细胞,建立稳定高水平表达SR-A的人肾小球系膜细胞系(HMC-SCR)。RT-PCR法检测SR-A mRNA的表达,使用免疫荧光法、油红“O”细胞化学染色及激光共聚焦显微镜检测HMC-SCR对配体氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)和乙酰化低密度脂蛋白(Ac-LDL)的摄取及配体间的竞争作用。结果与未转染细胞相比,转染SR-A的HMCL对修饰低密度脂蛋白的摄取功能明显增强;40倍过量未标记的Ox-LDL、Ac-LDL竞争荧光D il标记的Ac-LDL的摄取,但未修饰的LDL对该受体无明显竞争抑制作用。结论Ox-LDL和Ac-LDL通过同一SR-A进入系膜细胞内,SR-A对修饰的低密度脂蛋白具有较高的亲和力和特异性。

斯伐他汀对佛波酯诱导的人肾小球系膜细胞A型清道夫受体表达的作用

目的观察斯伐他汀(Simv)对佛波酯(PMA)诱导的人肾小球系膜细胞(HMC)A 型清道夫受体(SR-A)表达的作用。方法激光共聚焦显微镜检测HMC对荧光Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白(Ac-LDL)的摄取。RT-PCR法检测HMC SR-A mRNA表达。瞬时转染带有SR-A 启动子片段的荧光素报告质粒,观察斯伐他汀对HMC SR-A启动子活性的影响。结果 (1)斯伐他汀(10μmol／L)明显抑制PMA(16．2 nmol／L)诱导的HMC对Dil-ac-LDL的摄取,100μmol／L 甲羟戊酸(Mev)基本阻断斯伐他汀的抑制作用。(2)斯伐他汀作用48 h,剂量依赖性(1-10 μmol／L)抑制PMA诱导的HMC SR-A mRNA表达,10 μmol／L组HMC SR-A mRNA表达量为对照组的54．7％;Mev可部分逆转斯伐他汀对SR-A mRNA的作用。(3)斯伐他汀抑制PMA诱导的 HMC SR-A启动子活性,处理组与对照组荧光素酶活性相比,差异具有统计学意义(P<0．01); 斯伐他汀加甲羟戊酸组荧光酶活性与对照组相比,无显著性差异。(4)斯伐他汀直接抑制转染 SR-A cDNA的人肾小球系膜细胞系SR-A mRNA表达。结论 (1)斯伐他汀抑制HMC SR-A 基因表达和活性可能为其延缓慢性肾小球疾病进展的机制之一;(2)斯伐他汀通过抑制甲羟戊酸代谢途径而抑制HMC SR-A的表达。

A型清道夫受体在口蹄疫病毒VP1-VP4蛋白诱导小鼠免疫应答中的作用

为研究A型清道夫受体(SR-A)在重组口蹄疫病毒(FMDV)VP1-VP4蛋白诱导小鼠产生抗免疫应答中的作用,通过构建Pet32a-VP1-VP4原核表达系统制备VP1-VP4蛋白,用纯化的VP1-VP4蛋白分别免疫预先注射SR-A抑制剂的BALB/c小鼠和未作处理的BALB/c小鼠,用ELISA检测免疫7d后小鼠血清中IFN-γ和IL-4的含量,用琼脂扩散法测血清的抗体效价,用ELISA检测血清抗体亚类的含量。结果发现,经SR-A抑制剂处理的小鼠血清IFN-γ含量和IL-4含量均降低,血清总抗体效价也降低,但血清IgA水平显著升高,这表明SR-A在识别VP1-VP4蛋白进而启动免疫应答的过程中发挥广泛的调节作用。