A型猪塞内卡病毒TaqMan荧光定量PCR方法的建立

本研究针对A型猪塞内卡病毒(Senecavirus A, SVA)基因组保守区域设计了特异性引物及探针,建立了快速检测SVA的Taq Man荧光定量PCR方法。结果显示,以构建的重组质粒为标准品建立的Taq Man荧光定量PCR方法,标准曲线具有良好的线性关系,线性相关系数达0.9974;特异性良好,与口蹄疫病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒不存在交叉反应;对SVA核酸最低检测下限为3.75 copies/μL,而普通PCR最低检测下限为3.75×103 copies/μL;批内和批间的变异系数为均小于5%,重复性良好。本研究建立的SVA TaqMan荧光定量PCR方法为检测猪水疱性疾病病原提供了一种快速、灵敏的检测方法,为开展SVA流行病学调查提供了技术支持。

猪A型塞内卡毒株CH-01-2015的溶瘤效果

为探究猪A型塞内卡毒株(SVA)CH-01-2015的溶瘤效果,本试验以SVA CH-01-2015为研究对象,在体外通过显微镜观察和细胞活性测定检测该毒株对前列腺癌细胞(PC-3)、非小细胞肺癌细胞(H1299、A549)、子宫内膜癌细胞(Ishikawa)、胶质瘤细胞(U251)和宫颈癌细胞(Hela)共6种肿瘤细胞的杀伤情况,通过病毒复制动力学测定检测SVA CH-01-2015在不同肿瘤细胞中的复制情况;在体内,通过PC-3裸鼠荷瘤试验检测SVA CH-01-2015的溶瘤效果,通过免疫组化和组织病理学染色检测肿瘤组织中病毒的复制以及治疗后肿瘤组织的形态变化。体外试验结果显示,与对照组细胞相比,感染SVA CH-01-2015的PC-3、H1299和Ishikawa肿瘤细胞被显著裂解,而U251、A549和Hela肿瘤细胞形态无显著变化;且与对照组细胞相比,SVA CH-01-2015毒株能极显著杀伤PC-3、H1299和Ishikawa肿瘤细胞(P<0.01),对U251、A549和Hela肿瘤细胞几乎无杀伤作用(P>0.05);以感染复数(MOI)为1的SVA CH-01-2015分别感染6种肿瘤细胞,其在PC-3、H1299和Ishikawa中复制能力极强,在U251和A549中复制能力较弱,在Hela中基本不复制。体内试验结果显示,与对照组相比,静脉单针、瘤内单针和瘤内2针注射10^(8) TCID_(50)/针的SVA CH-01-2015均能极显著抑制PC-3裸鼠移植瘤的生长(P<0.01),且瘤内2针注射的抑制效果更为显著(P<0.01)。结果表明,SVA CH-01-2015能显著杀伤PC-3、H1299和Ishikawa肿瘤细胞,对U251、A549和Hela肿瘤细胞无杀伤作用,且该病毒能抑制体内PC-3裸鼠移植瘤的生长,瘤内2针注射的抑制效果更为显著。

猪A型塞内卡病毒研究进展

摘要:猪A型塞内卡病毒是一种新发现的猪传染病病毒,可以引起猪鼻镜及蹄冠处出现水疱、溃烂,从而导致跛足甚至死亡,其临床症状与口蹄疫、水泡性口炎和猪水泡病等我国规定的一类动物传染病相似。对猪A型塞内卡病毒的病原学、流行病学、临床症状、病理变化、诊断等方面进行了阐述,为猪A型塞内卡病毒的深入研究、防控及做好公共卫生安全提供参考。

猪塞内卡病毒A型间接ELISA抗体检测方法的建立

为了建立一种基于固相合成多肽技术的猪塞内卡病毒A型抗体血清学检测方法。本研究对猪塞内卡病毒A型VP1、VP2和VP3三种重要结构蛋白的B细胞表位进行设计并筛选到SVA1601、SVA1602、SVA1603和SVA1605共四条表位多肽,进而建立了一种用于检测猪塞内卡病毒A型抗体的间接ELISA方法,并验证该方法的检测敏感性、特异性、重复性以及与血清中和试验的符合率。试验结果显示,建立的间接ELISA方法对6份感染血清的最高稀释倍数为1:640,特异性为99.1%,批内和批间变异系数分别为2.4%~6.5%和4.4%~10.3%。与血清中和试验比较,符合率为97.7%。结果显示采用SVA1601、SVA1602、SVA1603和SVA1605建立的间接ELISA方法的敏感性较高,且重复性较好,可用于临床血清中猪塞内卡病毒A型特异性抗体的检测。