利用RNAi阻抑hTERT和Bi-1双基因表达的RNAi作用效果的研究

目的利用LipofectamineTM2000将针对靶向人类端粒酶末端逆转录酶(hTERT)和Bax inhibitor-1(Bi-1)基因设计并构建的质粒载体转染至CNE-2Z鼻咽癌细胞内,诱导序列特异性的基因沉默,研究其产生的shRNA阻抑hTERT和Bi-1基因表达的效果。方法收集CNE-2Z细胞,设未处理组、pEGFP-N1组、pEGFP-N1/Lip组,采用流式细胞术检测Lip对CNE-2Z细胞的转染能力,RT-PCR和Western blot法分析表达shRNA重组质粒载体对hTERT和Bi-1基因mRNA表达的抑制效应。结果转染CNE-2Z细胞的质粒和Lip最佳组合:质粒为2.5μg,Lip为6.25μL。结论成功构建的针对人hTERT和Bi-1基因的shRNA真核表达质粒能特异、有效地阻抑hTERT和Bi-1基因的表达。

靶向大鼠TGF-β1基因shRNA真核表达载体的构建及鉴定

构建并鉴定靶向大鼠TGF-β1基因的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达载体,为探索肝纤维化的基因治疗提供有力工具。根据大鼠TGF-β1基因的mRNA序列设计并合成2条编码shRNA的特异性寡核苷酸片段,另选通用阴性对照序列HK,将上述片段退火后分别克隆入线性化质粒载体PGenesil-1.1中,构建出含靶基因片段的shRNA真核表达载体PGenesil-TGF-β1-A、PGenesil-TGF-β1-B及PGenesil-HK,行酶切鉴定及测序分析,并采用脂质体介导法体外转染Hela细胞,荧光显微镜观察转染结果。经酶切和测序鉴定证实,构建的shRNA成功插入到载体,重组质粒的插入序列与设计的靶基因片段完全一致,3种重组质粒均能转染入Hela细胞表达绿色荧光。成功构建出靶向大鼠TGF-β1基因的shRNA真核表达载体,为后续研究抗肝纤维化的基因药物奠定了实验基础。

Prohibitin1基因沉默对人黑色素瘤细胞铺展、迁移及侵袭的影响

目的探讨RNA干扰(RNAi)沉默抗增殖蛋白Prohibitin1(PHB)基因对人恶性黑色素瘤A375细胞铺展、迁移和侵袭的影响。方法利用RNAi技术,将A375细胞分为对照组和观察组,对照组给予含10%FBS的DMEM培养,观察组加入脂质体Lipofectamine2000和PHB siRNA,均孵育24 h。采用RT-PCR法检测两组细胞中PHB mRNA的表达,Western blot法检测两组细胞中PHB蛋白的表达,铺展实验检测两组细胞在30、60、120 min铺展进程中的铺展情况,划痕实验检测两组细胞的迁移能力,Transwell侵袭实验检测两组细胞的侵袭能力。结果观察组细胞中PHB mRNA及蛋白相对表达量均低于对照组(P均<0.01)。铺展30、60及120 min时,观察组发生铺展的相对细胞数均均少于对照组(P均<0.01)。划痕后12、24 h,观察组细胞迁移面积均少于对照组(P均<0.01)。观察组细胞的侵袭能力小于对照组细胞(P<0.01)。结论 PHB基因沉默可有效抑制黑色素瘤细胞的铺展、迁移和侵袭进程。

中成药与西药治疗慢性宫颈炎的疗效比较分析

目的分析比较中成药与西药治疗慢性宫颈炎的临床疗效。方法随机将2013年10月至2014年10月我院收治的158例慢性宫颈炎患者分为中成药治疗组（妇科千金胶囊＋保妇康栓）与西药治疗组（罗红霉素缓释胶囊＋重组人α-2a干扰素栓），比较两组临床疗效。结果中成药治疗组总有效率显著高于西药治疗组（92．5％vs．78．2％）；中成药治疗组日常生活、生活感受、活动能力及健康感受方面明显改善，与西药治疗组相比，差异有统计学意义（P〈0．05）；两组均未发生严重不良反应。结论中成药较西药药性偏缓，起效慢，但可从根本上驱除病因，且较西药基本无毒副作用，治疗慢性宫颈炎疗效更切实。

地震映像技术在城市空区勘探中的应用

城市空区勘探存在噪声干扰大、地电干扰大、场地条件限制大等特点,文中论述了浅层地震映像技术的主要特点,通过排除一定的干扰因素,实现了在城市复杂环境下勘探地下空区的目的。