两种A类氨基酸转运蛋白部分功能差异的研究

应用重组Vaccinia病毒表达系统在猴肾成纤维细胞CV-1中瞬时表达大鼠A类氨基酸转运蛋白GlnT和SAT-2,研究它们转运MeAIB、Ala和Gln的动力学和对多种氨基酸转运亲和性的差异,结合它们的氨基酸序列同源性比较表明:虽然GlnT和SAT-2蛋白的氨基酸序列有较高的同源性,但它们在转运功能上有较大的差异。

重组痘病毒表达系统测定A类氨基酸转运蛋白SAT-2的部分动力学特性

用编码T7RNA聚合酶的重组痘病毒感染CV - 1细胞 ,转染带T7启动子的A类氨基酸转运蛋白SAT- 2基因的表达质粒 ,使SAT - 2基因得到瞬时高表达 ,进而用各种放射性标记的底物直接测定SAT - 2蛋白的部分转运动力学特性 .结果表明 :SAT - 2蛋白对MeAIB ,Ala和Gln的转运呈可饱和的动力学曲线 ,转运丙氨酸和谷氨酰胺的Michaelis常数 (Km值 )分别为 :(0 5 2 9± 0 0 5 0 )mmol和 (1 6 5 4± 0 2 78)mmol.SAT - 2基因蛋白产物转运MeAIB的能力超过内源性氨基酸转运蛋白的转运能力 。