A群脑膜炎奈瑟菌多糖IgG抗体检测试剂研制

目的研制检测A群脑膜炎奈瑟菌荚膜多糖IgG抗体的酶联免疫吸附试验（ELISA）检测试剂。方法以CTAB、酚、乙醇从A群脑膜炎奈瑟菌培养上清中提取荚膜多糖（MenA PS）,将多糖与卵清蛋白（EA）以还原氨基法偶联,并以Sepharose CL-4B纯化。优化反应条件,建立以偶联物MenA PS-EA为包被抗原检测A群脑膜炎奈瑟菌多糖IgG抗体的间接ELISA法,并与血清杀菌力试验（SBA）比较。结果高效液相色谱检测MenA PS-EA结合物纯度为81.50%。试剂具有良好重复性（变异系数CV=4.26%～5.30%）;37℃放置7d、4℃放置12个月,试剂的灵敏度不变,具有优良的稳定性;分别用该试剂和SBA法检测192份血清,试剂相对于血清杀菌力试验的灵敏度为96.91%,特异度为90.00%,一致性为95.83%,统计学分析表明,2种检测方法之间差异无统计学意义。结论以纯化MenA PS-EA作为包被抗原建立的A群脑膜炎奈瑟菌多糖特异性IgG抗体间接ELISA检测试剂具有可行性,为进一步研究及开发细菌多糖类抗体诊断试剂提供了可借鉴的方法。

2017-2019年济宁市健康人群脑膜炎奈瑟菌流行病学和基因组学分析

目的了解济宁市健康人群脑膜炎奈瑟菌流行情况及其基因组特征。方法采集2017-2019年流行前期、流行期、流行后期不同年龄组健康人群的咽拭子标本,进行菌株分离培养、生化试验、血清凝集试验,分离到的菌株进行基因测序,利用PubMLST数据库进行多位点序列分型(MLST)、核心基因组多位点序列分型(cgMLST)、疫苗抗原分析,利用IQ-TREE和Splits Tree构建系统发育树。结果2017-2019年共检测1086份健康人群咽拭子标本,分离出21株脑膜炎奈瑟菌,健康人群平均带菌率为1.93%。其中流行前期带菌率为0.93%,流行期带菌率为2.30%,流行后期带菌率为1.83%。17~19岁人群带菌率较高,3~5岁儿童及≥20岁成人中未检出阳性菌株。检出的21株菌株中,B群15株,C群1株,不可分群5株。通过基因组分析,主要的ST型为ST-12301和ST-14655,ST-17464、ST-17465、ST-17466、ST-17467和ST-17468为本研究新发现的ST型。进行基因测序的19株菌株中,有8株属于4821克隆群,其余菌株不属于确定的克隆群,有3株血清型为不可分群的菌株但其基因型为B型。结论济宁市2017-2019年健康人群中脑膜炎奈瑟菌血清群以B群为主。本研究新发现5种MLST序列型,提示近几年菌株基因组存在微进化。MLST序列型的变迁有可能导致流行模式发生改变,有必要开展持续监测。17~20岁人群带菌率高,应密切关注菌株在人群中的扩散传播,以防引起流脑病例。

1例Y群脑膜炎奈瑟菌脑膜炎患儿皮肤坏疽的护理

目的:总结1例Y群脑膜炎奈瑟菌脑膜炎患儿皮肤及皮下组织坏疽护理经验。方法:根据伤口的不同恢复周期选择不同的护理方法,结合多学科的治疗和护理优势为患儿选择伤口护理技术、负压及植皮治疗,对患儿实行换药时预防性镇痛干预,并积极给予1年的延续性照护等。结果:住院时间2月余,双下肢伤口瘢痕愈合出院。随访1年,该患儿经过多次激光、瘢痕松解等康复训练,基本能够正常行走。结论:针对Y群脑膜炎奈瑟菌脑膜炎患儿的皮肤护理,利用多学科的治疗和护理,积极给予疼痛干预及康复指导,结合长期有效的延续性照护,对该患儿的预后起重要作用。

广州市番禺区健康人群脑膜炎奈瑟菌抗体水平调查

目的:了解广州市番禺区健康人群A群、C群脑膜炎奈瑟菌抗体水平状况。方法:采用抽样调查方法,于2005年3月在广州市番禺区采集不同年龄段人群血清,应用酶联免疫吸附试验,进行A群、C群脑膜炎奈瑟菌抗体检测。结果:调查的205名人员中,A群脑膜炎奈瑟菌抗体阳性率为81.95%,几何平均滴度(GMT)为1∶5.98,C群脑膜炎奈瑟菌抗体阳性率为8.78%,GMT为1∶1.52。结论:调查显示番禺区健康人群A群脑膜炎奈瑟菌抗体保护水平不高可能是导致该区流脑局部暴发的重要因素之一;调查同时显示了该区健康人群C群脑膜炎奈瑟菌抗体水平状况,为我市更好地制定相应的流脑防治措施提供数据资料。

应用单克隆抗体和免疫斑点试验对B群脑膜炎奈瑟氏菌脂寡糖分型

本研究使用４种抗Ｂ群脑膜炎奈瑟氏菌（Ｎｍ）脂寡糖的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）和免疫斑点试验（ｄｏｔ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ）首次对我国不同年代和地区收集的９１株Ｂ群Ｎｍ进行了脂寡糖（Ｌｉｐｏｏｌｉ－ｇｏ－ｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，ＬＯＳ）分型，总分型率为９０．１１％，其中Ｌ３．７．９复合型最多，占６３．７４％，其次为Ｌ１．３．７．９复合型，占１２．０９％。该结果为确定我国引起流脑发病的Ｂ群Ｎｍ主要ＬＯＳ型提供了依据，为筛选本国的Ｂ群Ｎｍ菌苗菌株及其作为菌苗成分的ＬＯＳ抗原奠定了基础。

2006年通辽市健康人群脑膜炎奈瑟菌带菌及抗体水平调查

[目的]了解通辽市市区健康人群脑膜炎奈瑟氏菌带菌情况及其免疫抗体水平。[方法]采集调查对象咽拭子，现场接种至羊血巧克力琼脂培养基，于5％的二氧化碳环境37℃培养24～72h，进行脑膜炎奈瑟菌分离和鉴定，血清抗体测定采用酶联免疫吸附试验法。[结果]210名健康人中，检出革兰氏染色阴性脑膜炎双球菌8株，经分离鉴定均为B群，总带菌率为3．81％；A群抗体阳性率为66．67％；C群抗体阳性率为45．71％。[结论]本地区流脑抗体水平较低．没有达到免疫屏障的作用，要加强流脑防控工作，提高人群免疫力。

单价B群脑膜炎奈瑟菌OMV疫苗免疫后的抗体亲和力及其IgG亚型

脑膜炎奈瑟菌(简称脑膜炎球菌)是导致全球范围脑膜炎和败血症的重要病原菌,B群脑膜炎球菌血清亚型P1.7-2.

健康人群流行性脑脊髓膜炎流行前期和流行期A、C群脑膜炎奈瑟菌抗体水平研究

目的掌握合肥市健康人群A、C群脑膜炎奈瑟菌(Nm)抗体水平现状。方法应用重复横断面监测研究模式,以合肥市辖3县4区划分为7个研究地区,在2005-2006,2006-2007年流行性脑脊髓膜炎(流脑)流行季节流行前期和流行期,采用整群重复抽样方法,应用酶联免疫吸附试验,对健康人群A、C群Nm抗体水平进行调查。结果连续监测健康人群2次流行前期和流行期,实际抽样范围672～690人。2次流行前期和流行期之间A群无差异,C群差异有统计学意义;2次流行期之间A、C群差异均有统计学意义。0～5岁和≥21岁组相对较低,11～15岁、16～20岁、≥21岁组流行期明显上升。同期不同地区之间差异均有统计学意义,肥西县、长丰县呈现明显低抗体水平。结论健康人群中存在一定A、C群Nm抗体水平,结合现状应确保儿童和青少年疫苗有效接种率,加强成人流脑预防控制工作。

潍坊市健康人群A、C群脑膜炎奈瑟菌抗体水平调查

目的了解潍坊市健康人群A、C群脑膜炎奈瑟菌(Nm)抗体水平,为制定预防控制流行性脑脊髓膜炎(流脑)措施提供依据。方法采用分层随机抽样方法,在5个县市区共采集1125名健康人群血清标本,应用酶联免疫吸附试验检测A、C群Nm抗体。结果调查的1125名健康人群中,A群Nm抗体阳性率22.58%(254/1125),几何平均滴度(GMP)为1∶1.70;C群Nm抗体阳性率11.73%(132/1125),GMP为1∶1.30。结论潍坊市健康人群A、C群Nm抗体水平均较低。

通辽市科左中旗健康人群脑膜炎奈瑟菌带菌及抗体水平监测报告

目的为了解通辽市科左中旗健康人群脑膜炎奈瑟氏菌带菌情况及其免疫抗体水平。方法采集调查对象咽拭子,现场接种至羊血巧克力琼脂培养基,于5%的二氧化碳环境37℃培养24～72h,进行脑膜炎奈瑟菌分离和鉴定;血清抗体测定采用酶联免疫吸附试验法。结果 221名健康人中,检出革兰氏染色阴性脑膜炎双球菌13株,总带菌率为3.81%。A群抗体阳性率为71.91%,C群抗体阳性率为47.51%。结论本地区流脑抗体水平较低,没有达到免疫屏障的作用,要加强流脑防控工作,提高人群免疫力。为了解通辽市科左中旗健康人群脑膜炎奈瑟氏菌(Nm)带菌情况及其免疫抗体水平,于2007年10月对我市科左中旗保康镇健康人群进行脑膜炎奈瑟菌带菌情况及其免疫抗体水平监测,为今后流脑预防与控制提供科学依据。

A、C、Y、W135群脑膜炎奈瑟菌抗体血清体外杀菌试验方法优化

目的进一步优化脑膜炎奈瑟菌的血清抗体特异性体外杀菌试验,建立更加标准的A、C、W135、Y群脑膜炎奈瑟菌血清杀菌试验(serum bactericidal assay,SBA)方法,并验证其可行性及稳定性。方法 (1)用经典溶血方法测定补体活性,并根据非特异性杀菌率(non-specific killing rates,NSK)筛选出最佳试验补体;(2)对影响最终菌落数的关键因素,如靶菌起始浓度、培养基、染色剂浓度等进行优化;(3)根据质控血清的测定结果,确定补体最佳稀释比例和孵育时间;(4)对优化后的方法进行准确性、线性和精密度验证。结果补体选用Pel-freez-11536,溶血活性约为400 U/m L,除C血清群靶菌孵育时间需在45 min以内,其余血清群靶菌NSK均≤25%;对数期A、C、W135、Y血清群脑膜炎奈瑟菌做靶菌的最佳起始浓度为A600 nm的菌液分别稀释10~5、10~5×2、10~5×4、10~5×4倍;4种血清群脑膜炎奈瑟菌在BHI+0.5%血平板培养基上生长正常,且培养基颜色较浅,染色效果较明显;4种血清群靶菌的染色剂TTC最佳添加量均为0.001%;补体最佳用量为1∶3稀释,活性单位约133 U/m L;最佳孵育时间除C血清群为45 min外,其余血清群均以60 min为宜;优化后的方法测定质控血清的稀释倍数与对应的SBA滴度呈显著负相关,斜率在-1.1^-0.9之间,Pearson相关系数在-1.0^-0.9之间,P<0.001,多次试验的CV均<15%。结论对传统的SBA方法进行了优化,建立了更具有可比性、重复性较好的简单、可行、稳定的SBA方法。

中山地区正常人群鼻咽部脑膜炎奈瑟菌的带菌率及血清分型调查

目的 :获取本地区正常人群鼻咽部脑膜炎奈瑟菌携带情况 ,为政府制定预防和控制流行性脑脊髓膜炎暴发流行提供科学决策依据。方法 :随机抽检正常人群 (按人群防疫监测共分四组 :2～ 4岁、6～ 8岁、9～ 12岁、2 5～ 39岁组 )鼻咽拭子进行培养、分离、鉴定及血清分型 ,按《全国临床检验操作规程》进行。结果 :4 0 3人共检出 2 2株脑膜炎奈瑟菌 ,总检出率为 5 .4 6 %。男性检出 9株 ,检出率 4 .4 6 % ,女性检出 13株 ,检出率为 6 .4 7%。其血清分型为 A群 3株 ,B群 14株 ,C群 2株 ,1892型 1株 ,未定型 2株。 2～ 4岁组检出 6株 ,检出率 8.5 7% (6 /70 ) ;6～ 8岁组检出 4株 ,检出率 7.4 1% (4/5 4 ) ;9～ 12岁组检出 6株 ,检出率8.0 0 % (6 /75 ) ;2 5～ 39岁组检出 6株 ,检出率 2 .94 % (6 /2 0 4 )。男女性别之间及少年不同组别正常人群鼻咽部脑膜炎奈菌携带率经 X2 检验差异均无显著性 ,而少年组与成人组比较相差有显著性意义。结论 :调查显示 ,本地区正常人群鼻咽部脑膜炎奈瑟菌携带率为 5 .4 6 % ,处于较低水平。血清分型以 B群为主 ,本地为非流行株。不同性别正常人群鼻咽部脑膜炎奈瑟菌的携带率无差别 ,儿童携带率较成人高。调查结果显示本地区目前不具备流行特点 ,A群脑膜炎奈瑟菌未造成本地流行性?

我国B群脑膜炎奈瑟氏菌单克隆抗体分型及其流行病学意义

为了阐明自七十年代以来在我国１１个省和２个直辖市流脑病人和带菌者中所分离的Ｂ群脑膜炎奈瑟氏菌（Ｎｍ）之间的流行病学关系，应用抗脑膜炎奈瑟氏菌１类和２／３类外膜蛋白的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）和全菌酶联免疫吸附试验（ＷｔｈｏｌｅＣｅｌｌ－ＥＬＩＳＡ）对１０９株Ｂ群Ｎｍ进行分型及分亚型检定。初步结果表明。上述菌株可分成６个型，分型率为３４．９％（３８／１０９），其中１５型较多，占１５．６％。６７株可分为１２个亚型及复合亚型，分亚型率为６１．５％，其中以Ｐ１．２亚型最为多见，占可分亚型菌株的４７．８％（３２／６７），其次为Ｐ１．１２亚型，占１３．４％（９／６７）。在比较病人菌株与带菌者菌株的型别时发现，前者存在明显的优势亚型，即Ｐ１．２亚型，占可分亚型病人菌株的６４．４％（２９／４５）。而后者中仅１株为Ｐ１．２亚型。该亚型主要发现于１９８４年以后，地区分布较为广泛，是目前引起我国Ｂ群流脑发病的主要亚型。分析结果还初步解释了我国Ｂ群流脑带菌率高发病率较低的原因。

湖南省首起由C群脑膜炎奈瑟菌引起流脑局部流行的调查

目的了解湖南省首起由C群脑膜炎奈瑟菌引起的流脑局部流行疫情特征。方法依据《全国流行性脑脊髓膜炎防治指南(试行)》和GB16884—1997进行调查和实验室检测。结果从患者的脑脊液中分离到奈瑟菌。经湖南省CDC实验室复核鉴定为C群脑膜炎球菌。结论此次疫情为湖南省首起由C群脑膜炎奈瑟菌引起的流脑疫情。隔离治疗病人、在疫区易感人群中紧急接种流脑(A+C)疫苗是控制疫情扩散的有效方法。

脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白NMB0315作为B群流脑疫苗候选抗原的免疫效果

目的研究原核重组表达的B群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白0315(rNMB0315)在诱导小鼠产生特异性免疫应答中的作用、免疫血清抗体体外杀菌活性和重组蛋白的免疫保护效果,初步评价rNMB0315作为B群流脑疫苗候选抗原的潜力。方法将构建的原核表达载体p ET30a-NMB0315转化大肠杆菌BL21表达重组蛋白,纯化鉴定后的重组蛋白免疫雌性BALB/c小鼠,检测体液免疫和细胞免疫水平;测定血清抗体在补体介导下的体外杀菌活性,观察rNMB0315蛋白疫苗对实验小鼠的免疫保护效果。结果 rNMB0315具有良好的免疫原性,能诱导产生较高水平的体液免疫应答:包括血清特异性IgG、IgG1、IgG2a、IgG3、IgG2b和生殖道黏膜特异性分泌型IgA(s IgA),免疫后第6周抗体效价分别为1∶150 000、1∶85 000、1∶60 000、1∶35 000、1∶30 000和1∶30 000;也能激发较高水平的细胞免疫应答,免疫小鼠脾淋巴细胞增殖反应的刺激指数(SI)值明显高于PBS、Freund佐剂对照组。在免疫的2、4、6周,血清IgG2a/IgG1比值均小于1,提示rNMB0315疫苗以诱导Th2细胞性体液免疫应答为主。rNMB0315疫苗免疫血清在补体介导下的体外杀菌抗体效价为1∶128;72 h内,对实验小鼠的免疫保护率为90%。结论原核表达的rNMB0315具有良好的免疫活性和免疫保护效果,NMB0315外膜蛋白具有作为预防B群流脑蛋白疫苗候选抗原的潜力。

北京市昌平区2016年健康人群脑膜炎奈瑟菌携带状况、血清群及药物敏感性

目的了解2016年北京市昌平区健康人群中脑膜炎奈瑟菌的携带率和血清群分布,以及对抗生素的敏感性。方法参照《流行性脑脑膜炎奈瑟菌诊断标准》WS 295—2008进行菌株分离及鉴定,用PCR法对菌株进行血清分群,用K-B纸片法对菌株进行抗生素药物敏感性实验,对分离的其他口腔细菌进行16SrRNA测序鉴定。结果收集2016年昌平区2016年9—10月健康人群咽拭子共计252份,分离得到11株(4.37%)脑膜炎奈瑟菌(Nm):属于4个血清群,依次为B群(6株),W135群(3株),C群(1株),X群(1株);抗生素药敏试验结果表明,对头孢噻肟,头孢曲松,美罗培南,利福平完全敏感(100.00%),对环丙沙星,复方新诺明完全耐药(100.00%);27.27%的菌株对四环素耐药,54.55%的菌株对头孢西丁耐药,36.36%的菌株对阿奇霉素不敏感。结论昌平区健康人群携带脑膜炎奈瑟菌以B群为主,对头孢类,碳青霉烯类,安莎霉素类药物敏感,对氟喹诺酮类,磺胺类耐药,并出现对大环内酯类药物不敏感菌株。

从流脑病人血液检出C群脑膜炎奈瑟菌

2002年1-3月份,广西壮族自治区来宾县良塘乡发生流脑流行,共发现流脑病人15例,死亡3例.从暴发点患者血液中分离出一株病原菌.

PCR结合酶切-序列比对法鉴定B群脑膜炎奈瑟菌菌株

目的用PCR结合酶切-序列比对法对B群脑膜炎奈瑟菌菌株进行鉴定。方法用玻片凝集法对不同来源的15株B群脑膜炎奈瑟菌菌株进行初步检定,再用PCR结合酶切-序列比对法对上述15株菌株进行进一步鉴定,即用PCR结合酶切法扩增菌株的唾液酸转移酶sia D基因并对PCR产物进行酶切后,用BLAST软件将PCR产物测序结果与Gene Bank中原始sia D序列比对。结果 15株菌株玻片凝集结果均为阳性;15株菌株的PCR产物片段大小均为460 bp;TaqⅠ酶切后,13株菌株的酶切产物片段大小仍为460 bp,其PCR产物测序比对结果与B群脑膜炎奈瑟菌原始sia D序列同源性均达到99%;其余2株酶切产物片段大小约200 bp,与C群脑膜炎奈瑟菌sia D原始基因序列同源性分别为98%和99%。结论 15株菌株经PCR结合酶切-序列比对法鉴定,13株为B群脑膜炎奈瑟菌菌株,2株为C群脑膜炎奈瑟菌菌株;该方法可准确鉴定B群脑膜炎奈瑟菌菌株。