动态浊度法与热原检查法检测A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗的比较

研究A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗生产过程中热原安全性问题,对动态浊度法与热原检查法检测A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗进行比较。方法 根据《中华人民共和国药典》2020版(三部) 规定的方法,随机抽取10批次A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗为研究样品,分别采用细菌内毒素动态浊度法和热原检查家兔法进行检定。结果 10批A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗热原检查法热原检查均符合规定,动态浊度法能定量检测A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗中细菌内毒素定量检测结果与热原检查家兔法一致。结论 细菌内毒素动态浊度法能定量检测A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗中细菌内毒素的含量,在快速检测中优于热原检查法,基于上述的比较研究,表明动态浊度法可作为A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗生产过程控制中热原检查的补充方法,更好地控制产品质量。

顶空气相色谱法测定A群脑膜炎球菌结合疫苗原液中乙腈及三乙胺的残留量

目的建立A群脑膜炎球菌结合疫苗原液中乙腈及三乙胺残留量的顶空气相色谱测定法,并进行验证。方法采用标准溶液加入法,以10%无水碳酸钠溶液为溶剂制备混合对照品及供试品溶液,采用顶空气相色谱法进行检测,色谱条件为：采用Agilent DB-1毛细管柱（30 m×0.53 mm×5.0μm）;柱流速：4 ml/min;载气：氮气,分流比：10：1;程序升温：柱温起始温度为40℃,保持5 min,以10℃/min的升温速率升至200℃,保持2 min;进样口温度：200℃;FID检测器温度：250℃;顶空瓶平衡温度：80℃,平衡时间30 min。对方法的系统适应性、线性范围、重复性、检测限和定量限、准确性进行验证。采用建立的方法检测4批A群脑膜炎球菌结合疫苗原液的乙腈及三乙胺残留量。结果各待测组分理论塔板数不低于5 000,分离度不低于1.5;乙腈和三乙胺的线性方程分别为y=3 730.2 x＋1.210 6和y=64 699 x＋11.772,r均为0.999 9,线性范围分别为2.002~100.1μg/ml和1.508~75.40μg/ml;同一混合对照品溶液重复检测5次乙腈和三乙胺残留量的RSD值分别为1.34%和3.10%;乙腈和三乙胺检测限分别为0.020 02和0.007 54μg/ml,定量限分别为0.066 72和0.030 16μg/ml;样品高、中、低3个浓度的乙腈和三乙胺平均加样回收率分别为102.60%和101.92%,RSD分别为1.76%和4.12%。4批A群脑膜炎球菌结合疫苗原液中均未检出乙腈及三乙胺。结论该方法具有良好的重复性、准确性,可用于A群脑膜炎球菌结合疫苗原液中乙腈及三乙胺残留量的检测。

A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的研制

目的 制备安全有效的Ａ群脑膜炎球菌多糖结合疫苗。方法 通过碳二亚胺（ＥＤＡＣ）将Ａ群脑膜 炎球菌多糖－ＡＨ衍生物与破伤风类毒素（ＴＴ）蛋白共价结合，制备Ａ群脑膜炎球菌多糖结合疫苗。结果 所结合 成的多糖－蛋白结合物，具有Ａ群脑膜炎球菌多糖和破伤风类毒素抗原特异性。单独用多糖免疫小鼠未能诱导出 高水平的血清Ｐｓ抗体，而用结合物免疫小鼠却诱导出高水平的血清Ｐｓ抗体及ＴＴ抗体，并有免疫记忆性。结论 为进一步临床评价该疫苗的人群免疫效果提供了实验基础。

A群奈瑟氏脑膜炎球菌荚膜多糖-破伤风类毒素结合疫苗的制备及其免疫原性研究

采用溴化氰(CNBr)活化多糖,以无水己二酸二肼(ADH)作为连接剂,1乙基13(3二甲基氨基丙基)碳化二亚胺(EDAC)为偶联剂制备A群奈瑟氏脑膜炎球菌荚膜多糖(GAMP)与破伤风类毒素(TT)的结合物,经皮下免疫NIH小鼠,用ELISA检测小鼠血清中抗GAMP及抗载体蛋白的IgG抗体水平。用补体介导的体外杀菌试验检测血清中GAMP抗体的杀菌活性。结果显示,实验中制备的多糖衍生物和多糖蛋白质结合物都具有GAMP抗原特异活性。结合物免疫小鼠后可诱生比多糖单独免疫更高水平的GAMP血清IgG抗体,并能形成免疫记忆,产生再次应答。结合物免疫小鼠所诱生的血清GAMP抗体较之多糖组具有更强的体外杀菌活性。表明此方法制备的结合物可获得优于多糖的、稳定的特异免疫原性。

C群脑膜炎球菌荚膜多糖结合疫苗的研制

目的对C群脑膜炎球菌多糖-破伤风类毒素结合疫苗进行研制。方法将C群脑膜炎球菌多糖在溴化氰(CNBr)的活化下,以1,6己二酰肼(ADH)作为连接子与精制破伤风类毒素(TT)在碳二亚胺(EDAC)作用下结合,制成C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗原液,加保护剂冻干后制成C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗。结果制备的冻干C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗各项指标均达到了质控标准。该疫苗安全性及免疫原性良好。结论已成功研制出冻干C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗,该制备工艺是可行的。

A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的稳定性

目的 观察A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的稳定性。方法 疫苗放不同温度和不同时间后 ,用乙醇沉淀法测定A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的游离多糖含量 ,SepharoseCL 4B凝胶层析法测定分子大小。结果液体疫苗放置 2～ 8℃ 9个月 ,游离多糖含量为 30 %以上 ;4℃放置 18个月 ,Kd <0 2的多糖回收率 <6 0 %。冻干疫苗放置 2 5℃和 37℃ 12个月 ,或放置 2～ 8℃ 18个月 ,游离多糖含量均不高于 2 5 % ,Kd <0 2的多糖回收率 >6 0 %。结论 冻干A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗具有良好的稳定性。

C群奈瑟氏脑膜炎球菌荚膜多糖-TT结合疫苗的制备及其在小鼠体内免疫原性的研究

将C群脑膜炎球菌荚膜多糖以ADH作为间隔剂与TT结合形成GCMP-TT结合疫苗,然后用此结合疫苗免疫NIH小鼠,结果显示使用GCMP免疫小鼠后仅能产生较低水平抗GCMP的IgG抗体,而用GCMP-TT免疫后小鼠血清中产生了较GCMP免疫显著增高抗GCMP的IgG抗体,并且GCMP-TT组第二次和第三次免疫后与初次免疫相比,IgG抗体水平均有显著升高(P<0.01),表明GCMP-TT结合疫苗具有免疫记忆和再次免疫加强应答效应。补体介导的血清抗体体外杀菌试验结果证明,GCMP-TT结合疫苗组免疫小鼠诱导的抗体IgG比GCMP组具有增强的体外杀菌活性。

A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗及b型流感嗜血杆菌结合疫苗中丙酮残留量检测方法的建立与验证

目的建立A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗和b型流感嗜血杆菌结合疫苗中丙酮残留量的检测方法并加以验证。方法参照《中华人民共和国药典》三部（2010年版）中＂毛细管柱顶空进样等温法＂,优化色谱条件,建立A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗和b型流感嗜血杆菌结合疫苗中丙酮残留量的检测方法并对该方法进行验证及初步应用。结果色谱条件为顶空平衡温度70℃,顶空平衡时间40 min,汽化室温度200℃,柱箱温度40℃,检测器温度250℃,进样量为1.0 m L,载气（高纯氮气）流量1.3 m L/min,尾吹气（高纯氮气）流量5 m L/min,分流比1∶1。丙酮质量分数在2×10^-6-5×10^-5范围内具有良好的线性关系（r〉0.99）。丙酮的平均回收率及相对标准偏差（RSD）分别为86.05%-105.11%及2.1%-9.5%,检测限为2×10^-6,定量限为3×10^-6。结论本方法的线性、特异性、准确性、重复性等均符合规定,方法准确、稳定,可用于A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗和b型流感嗜血杆菌结合疫苗中丙酮残留量的检测。

A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗临床试验——安全性观察报告

目的 :了解 A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的安全性。方法 :于 2 0 0 2年 10月～ 2 0 0 3年 1月 ,在江苏省射阳县对 3～ 4月龄的健康婴幼儿接种 3针 A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗 ,以多糖疫苗为对照组 ,进行安全性观察 , 期临床观察4 7人、 ～ 期临床观察 2 36人。结果 :接种 A脑膜炎球菌多糖结合疫苗各针次的副反应均以弱发热反应为主 ,发生率最高为 7.33%、最低为 0 .80 % ,对照组的弱发热反应发生率最高为 1.72 % ,最低为 0 .86 %。结论

A群脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗衍化工艺的研究

目的:筛选和优化A群脑膜炎多糖的衍化工艺。方法:将A群奈瑟氏脑膜炎球菌多糖经溴化氰活化后通过己二酰肼衍生后制备出适宜的多糖衍生物。对衍化条件进行摸索和优化后通过衍化率及衍生物的可溶性来考察衍化效果,同时通过生化指标来考察该衍生工艺制备的结合疫苗的质量和收率。结果:在pH 11.0±0.2、活化30 min以及溴化氰与多糖比值(w/w)=0.5时,衍生物制备的结合疫苗各项生化指标在所筛选的条件中最优。结论:经过筛选优化的衍生工艺提高了多糖的衍化率,适宜结合疫苗的研制,保证了其结合疫苗的免疫原性。

不同稀释液对冻干A、C群脑膜炎球菌结合疫苗质量的影响

为选择合适的的冻干A、C群脑膜炎球菌结合疫苗的稀释液,以注射用水(H2O)、生理盐水(NS)、磷酸盐缓冲液(PBSpH6.8～7.2)作为候选稀释液,进行了相关溶解度、pH、渗透压、异常毒性、免疫原性的检测比较。溶解度、pH、免疫原性结果显示三种稀释液无差异;H2O作为稀释液的渗透压不符合人用制剂渗透压的要求,另两者则符合要求;三种稀释液溶解制品后的pH检测数据均符合要求,但PBS的缓冲能力更强。故认为PBS更适合作为冻干A、C群脑膜炎球菌结合疫苗的稀释液。

关于1例接种冻干A、C群脑膜炎球菌-多糖结合疫苗发生过敏性紫癜反应的调查处理报告

2011年12月19日东丰县疾病预防控制中心接到东丰县二龙山乡永合卫生院防保站报告，1例儿童接种冻干A、C群脑膜炎球菌-多糖结合疫苗后，第2天针眼处出现红斑，发热。3天后出现全身斑点，疑似接种疫苗后异常反应。现将调查结果报告如下。

安丘市2016—2021年A群脑膜炎球菌多糖疫苗疑似预防接种异常反应监测结果分析

目的 了解安丘市2016-2021年A群脑膜炎球菌多糖疫苗(MPSV-A)疑似预防接种异常反应(AEFI)的流行病学特征,评价MPSV-A预防接种的安全性及监测情况。方法 通过全民健康保障疾控信息系统(免疫规划信息系统)收集安丘市2016-2021年MPSV-A疑似预防接种异常反应报告个案数据,采用描述性方法进行分析。结果 安丘市2016-2021年共报告MPSV-A疑似预防接种异常反应个案109例,年均报告发生率为95.7/10万剂(χ^(2)=15.04,P <0.05),均为一般反应;1岁以下年龄组儿童报告剂次数最多,占74.3%(81/109),6~7月龄儿童发生事件数最多,占总事件数的21.1%(23/109),占1岁以下儿童报告事件数的28.4%(23/81);男女比例为1.66∶1(χ^(2)=13.38,P <0.01)。绝大多数AEFI事件发生于接种后2天内;第1剂次MPSV-A预防接种异常反应有64剂次,报告发生率为113.2/10万剂;第2剂次MPSV-A疑似预防接种异常反应有45例,报告发生率为78.5/10万剂(χ^(2)=3.57,P> 0.05)。结论 安丘市MPSV-A疑似预防接种异常反应监测敏感性和质量较高,MPSV-A具有良好的安全性。

高效阴离子交换色谱-脉冲安培法对A群脑膜炎球菌结合疫苗中游离多糖的检测

目的 采用高效阴离子交换色谱-脉冲安培法（high-performance anion-exchange chromatography with pulsed amperometric detection,HPAEC-PAD）检测A群脑膜炎球菌多糖-破伤风类毒素结合疫苗（group A meningococcal polysaccharide-tetanus toxoid conjugate vaccine,MenA-PS-TT）中的游离多糖含量.方法 采用1％脱氧胆酸钠（sodium deoxycholate,DOC）处理MenA-PS-TT分离游离PS.游离和结合PS经三氟乙酸水解后,用HPAEC-PAD检测水解产物,并将检测结果与改良钼酸铵分光光度法的检测结果进行比较.结果 1％DOC处理的样品的PS回收率为90％～104％,TT沉淀率为99％以上,说明1％DOC处理不会对游离和结合PS产生影响.HPAEC-PAD检测MenA-PS的重复性良好,3次MenA-PS标准品定位结果和3次MenA-PS-TT成品检测结果的相对标准偏差分别为1.7％和6.4％.HPAEC-PAD与改良钼酸铵分光光度法的检测结果相当.结论 HPAEC-PAD可用于MenA-PS-TT中的游离PS含量检测.

A+C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的研制

目的研制A+C群脑膜炎球菌多糖-破伤风类毒素结合疫苗。方法A群和C群脑膜炎球菌多糖在溴化氰(CNBr)的活化下,以1,6己二酰肼(ADH)作为连接子,与精制破伤风类毒素(TT)在碳二亚胺(EDAC)作用下结合,再按一定的比例将两者混合,制成A+C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗原液,加保护剂冻干后,制成A+C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗。结果经检定,A+C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗各项指标均达到了质控标准。该疫苗安全性及免疫原性良好。结论已成功研制出冻干A+C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗,该制备工艺是可行的。

接种冻干A、C群脑膜炎球菌结合疫苗偶合肠套叠1例报告

患儿,男,2009年8月8日出生。2010年6月24日09：10在市疾病预防控制中心预防接种门诊,于右上臂外侧三角肌肌内注射冻干A、C群脑膜炎球菌结合疫苗0.5 ml[罗益（无锡）生物制药有限公司,批号20091101-4,有效期至2011-11-19]。

CDAP活化制备C群脑膜炎球菌结合疫苗原液的稳定性试验

目的：评价以1－氰基－4－二甲氨基－吡啶四氟硼酸（ CDAP ）活化制备的C群脑膜炎球菌结合疫苗原液的稳定性。方法以变通的现有工艺为基础，选取C群脑膜炎球菌结合疫苗原液连续3批样品，分别放置于（37＆#177;2）℃、（25＆#177;2）℃，和2～8℃三种温度下，根据稳定性试验原则定期取样并进行主要指标的检测，评估原液的稳定性。结果 C群脑膜炎球菌结合疫苗原液于2～8℃保存18个月，（25＆#177;2）℃保存20周，37℃保存7天，各项检测指标均符合质量标准的要求。结论在2～8℃之下，施行变通的工艺， C群脑膜炎球菌结合疫苗原液可稳定存放18个月。

C群脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗衍化工艺研究

目的筛选和优化C群脑膜炎多糖的衍化工艺。方法将C群奈瑟脑膜炎球菌多糖经溴化氰活化后通过己二酰肼衍生后制备出适宜的多糖衍生物。对衍化条件进行摸索和优化后通过衍化率及衍生物的可溶性来考察衍化效果,同时通过生化指标来考察该衍生工艺制备的结合疫苗的质量和收率。结果在pH11.0±0.2、活化30min以及溴化氰与多糖比值(W/W)=0.5时,所获衍生物制备的结合疫苗各项生化指标在所筛选的条件中最优。结论经过筛选优化的衍生工艺提高了多糖的衍化率,适于结合疫苗的研制,保证了结合疫苗的免疫原性。

冻干A、C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的稳定性

目的 观察冻干A、C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗在2～8℃条件下的稳定性.方法 将冻干A、C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗放置在2～8℃条件下,定期取样,检查其物理外观,检测多糖含量、水分含量和分子大小,并进行鉴别试验以及异常毒性和免疫原性试验,考察其稳定性.结果 冻干A、C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗于2～8℃保存30个月,各项质量控制指标仍符合该疫苗企业注册标准.结论 冻干A、C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗在2～8℃条件下,其质量稳定.

WONCA研究论文摘要汇编——单针剂C群脑膜炎球菌结合疫苗在婴儿12月龄接种加强剂量疫苗后的免疫原性:开放标签随机对照试验

目的：确定单针剂 C 群脑膜炎球菌（MenC）结合疫苗在婴儿12月龄接种加强剂量疫苗后的免疫原性是否不比双针剂疫苗免疫原性差。设计2010年7月-2013年8月进行第Ⅳ阶段的开放标签随机对照试验。试验地点4个试验中心位于英国，1个试验中心位于马耳他。参与者对年龄在6~12周的健康婴儿进行随访，直到年龄满24个月为止。干预在试验的启动阶段，509例婴儿按照10：10：7：4的比例，随机分为4组：第1组（单针剂MenC - CRM组）在3个月时接种单针剂MenC - CRM；第2组（双针剂MenC - CRM组）在3个月和4个月时接种MenC - CRM，共接种2针剂；第3组在3个月时接种单针剂 MenC -多糖-破伤风类毒素（TT）；第4组不接种 MenC。所有婴儿12月龄时，接种 b 型流感嗜血杆菌（Hib）- MenC - TT 疫苗。所有婴儿接种全国范围内常规推荐的疫苗。分别在5、12、13、24月龄时留取血样。主要测量指标接种Hib - MenC - TT疫苗后1个月，利用家兔补体进行 MenC血清抗体杀菌活性的检测（rSBA）。如果单针剂MenC - CRM组和双针剂MenC - CRM组的平均 log10 MenC rSBA 之差的95%可信区间（95% CI）下限〉-0.35，则符合非劣效性。结果单针剂MenC - CRM组婴儿12月龄接种加强剂量的Hib - MenC - TT疫苗后，其 MenC rSBA 几何平均滴度并不次于双针剂MenC - CRM组婴儿〔660，95% CI（498，876）与295，95% CI（220，398）〕，单针剂MenC - CRM组和双针剂MenC - CRM组的平均 log10 MenC rSBA 之差为0.35，95% CI（0.17，0.53），显示了单针剂接种相对于双针剂接种的优越性。对两组存在的差异进行探索显示，在接种Hib - MenC - TT疫苗1个月后，〉96%的之前接种过 MenC 的参加者 MenC rSBA≥1：8，而之前没有接种过 MenC 的参加者，MenC rSBA≥1：8的比例只有83%。在接种单针剂MenC - CRM后，再接种Hib - MenC - TT疫苗的儿童，其 MenC rSBA 几何平均滴度要显著高于接种双针剂 MenC - CRM 儿童。然而，只有采用 MenC - TT 进行首次接种， Hib - MenC - TT疫苗加强剂量诱导的 MenC 杀菌抗体才能保持到24月龄。结论双针剂 MenC 的接种规划可以减少到单针剂，而不影响抗体滴度。之前接种过单针剂 MenC - TT 疫苗的婴儿，在接种加强剂量Hib - MenC - TT疫苗后，与仅接种单针剂MenC - CRM或双针剂MenC - CRM的婴儿相比，可产生更稳健的抗体反应。由于 MenC 抗体滴度的快速下降，那些只在学步期接种疫苗的儿童，将来仍然需要依赖群体接种，以保护婴幼儿不受脑膜炎影响。