高尔基运输1A蛋白促进甲状腺癌细胞的增殖和转移

【目的】探讨高尔基运输1A蛋白(GOLT1A)在甲状腺癌细胞中的表达水平及其对甲状腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮-间充质转化(EMT)的影响。【方法】利用在线数据库肿瘤免疫评估资源(TIMER)、阿拉巴马大学伯明翰分校癌症数据分析(UALCAN)和表达谱交互分析2(GEPIA2)在线分析GOLT1A在甲状腺癌织中的表达。采用实时荧光定量PCR方法和Western blot检测人甲状腺癌细胞中GOLT1A的表达水平,CCK-8实验、集落形成实验和Transwell实验检测GOLT1A表达对人甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,Western blot检测EMT相关基因E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)和N-钙黏蛋白(N-cadherin)表达的影响。【结果】TIMER、UAL⁃CAN及GEPIA2在线数据库分析显示,与甲状腺癌癌旁正常组织相比,GOLT1A在甲状腺癌组织中表达升高;qPCR和Western blot结果显示,与正常对照细胞相比,GOLT1A在甲状腺癌细胞系中的表达显著上调。敲低人甲状腺乳头状癌细胞TCP1细胞GOLT1A表达后,抑制细胞增殖、细胞迁移侵袭。敲低GOLT1A后TCP1细胞E-cadherin表达升高,N-cadherin和vimentin表达降低。过表达人甲状腺乳头状癌细胞BCPAP细胞GOLT1A,促进细胞增殖、迁移和侵袭。过表达GOLT1A后BCPAP细胞E-cadherin表达降低,N-cadherin和vimentin表达增加。【结论】GOLT1A在甲状腺癌中高表达,可促进甲状腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

miRNA-27a与TOP2A蛋白在乳腺癌化疗中的表达水平及效能评估

目的探析微核糖核酸-27a(microRNA-27a,miRNA-27a)与DNA拓扑异构酶Ⅱα(TopoisomeraseⅡ-Alpha,TOP2A)蛋白在乳腺癌化疗中的表达水平及预测效能。方法回顾性分析2020年1月至2022年1月聊城市人民医院乳甲外科收治的47例乳腺癌患者的病案资料,均接受化疗治疗。用实时荧光定量PCR法进行血浆miRNA-27a表达水平的检测,用免疫组织化学法进行TOP2A蛋白表达情况的检测。比较乳腺癌患者化疗前后的miRNA-27a、TOP2A蛋白表达水平差异,采用Logistic回归分析法探析miRNA-27a、TOP2A蛋白与乳腺癌化疗预后不良的关系,绘制受试者工作特征(Receiver Operating Characteristic,ROC)曲线分析miRNA-27a、TOP2A蛋白在乳腺癌化疗疗效预测中的应用价值。结果47例患者开始化疗后第4个月的miRNA-27a、TOP2A蛋白检测值显著低于化疗前(入院时)(P<0.05)。开始化疗后第4个月,预后良好35例(74.47%),预后不良12例(25.53%),预后良好组的miRNA-27a、TOP2A蛋白检测值低于预后不良组。Logistic分析结果显示,miRNA-27a、TOP2A蛋白高表达是乳腺癌化疗预后不良的危险因素(P<0.05)。ROC曲线结果显示,miRNA-27a、TOP2A蛋白联合预测乳腺癌化疗预后不良的曲线下面积(0.875,95%CI:0.798~0.952)最大,敏感度、特异性分别为91.67%、94.29%(P<0.05)。结论miRNA-27a、TOP2A蛋白在乳腺癌化疗预后不良中呈高表达,若乳腺癌化疗患者miRNA-27a、TOP2A蛋白表达水平显著上升,侧面说明患者病情可能有恶化风险,化疗疗效有限。

S100A蛋白家族在恶性肿瘤中的研究进展

恶性肿瘤是严重威胁人类健康的重大疾病之一,且以促肿瘤血管生成或肿瘤免疫微环境等恶性生物学行为作为主要的驱动事件。近年S100A蛋白家族被作为生物标志物在多种肿瘤的诊断中广泛应用,参与细胞内外的生理和病理过程,S100A蛋白可与细胞表面的受体相结合,而这些受体可触发炎症信号通路。S100A蛋白家族与恶性肿瘤细胞的异常表达及肿瘤的发展、侵袭密切相关,可作为新型抗肿瘤靶向药物的作用靶点。因此,深入研究S100A蛋白家族在恶性肿瘤中的作用机制,可以为疾病的治疗提供新思路。

LwaCas13a蛋白的表达纯化与活性分析

【目的】获得高纯度、高浓度、优良反式切割活性的韦德纤毛菌(Leptotrichia wadei)的Cas13a(LwaCas13a)蛋白,为研发基于CRISPR-LwaCas13a系统的动物病毒RNA检测新方法提供重要的生物学工具。【方法】通过PCR、双酶切与连接反应构建pET15b-SUMO-LwaCas13a重组质粒,并进行原核诱导表达与条件优化;发酵100 mL大肠杆菌BL21(DE3)菌诱导表达LwaCas13a蛋白后进行纯化,纯化后利用超滤法浓缩蛋白,使用BCA法检测蛋白浓度。将LwaCas13a蛋白、CRISPR RNA(CrRNA)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)靶标RNA及荧光标记单链RNA(ssRNA)探针共孵育,利用全波长荧光分析仪检测CRISPR-LwaCas13a反式切割活性,与商业化Cas13a蛋白进行活性对比,并优化LwaCas13a与CrRNA最佳结合比例。【结果】成功构建重组质粒pET15b-SUMO-LwaCas13a;LwaCas13a重组蛋白的最佳诱导表达条件为0.4 mmol/L IPTG、18℃诱导16 h;经过纯化最终获得95%纯度、7.5 mg/mL浓度的LwaCas13a蛋白。荧光检测结果显示,LwaCas13a蛋白具有明显的反式切割活性,为商业化Cas13a蛋白活性的1.25倍,且LwaCas13a蛋白与CrRNA的最佳结合比例为1∶2。【结论】试验成功表达纯化出高纯度、高浓度的LwaCas13a重组蛋白,其反式切割活性优于商业化Cas13a蛋白,并明确了该蛋白与CrRNA的最佳配比,为利用LwaCas13a进行动物病毒RNA检测新技术的研发提供了依据。

牛病毒性腹泻病毒NS5A蛋白纳米抗体的筛选与鉴定

为防控牛病毒性腹泻的流行,淘选得到抗BVDV-NS5A的纳米抗体序列,并探究其结合活性。通过重组质粒pET30a-NS5A诱导表达并纯化蛋白,免疫羊驼,获得重组质粒pCANTAB 5E-VHH,构建了一个初始的抗BVDV-NS5A纳米抗体展示文库。利用3轮固相亲和筛选,对筛选后的单克隆抗体通过ELISA验证其特异性与结合力并测序、分析。构建出具有较好多样性的噬菌体展示文库,测得库容为5.3×10^(7) CFU/mL,插入率73.9%。通过评价和分析显示,得到20株不同氨基酸序列的纳米抗体,其中7株与NS5A蛋白具有较好反应性。针对抗BVDV-NS5A蛋白淘选纳米抗体,并证明得到的纳米抗体有较好的结合力。研究结果有望用于研发BVDV诊断试剂盒、抗BVDV的候选药物,同时也为后续BVDV的致病机制研究奠定了基础。

3A蛋白间接ELISA试验检测猪口蹄疫感染抗体的研究

用表达的口蹄疫3A蛋白作为包被抗原,建立了间接ELISA试验,对口蹄疫病毒感染血清、免疫血清 和其它非口蹄疫病毒血清进行了检测研究。结果表明,3A蛋白间接ELISA试验对口蹄疫具有较好的特异性,可 以区分感染口蹄疫病毒的猪血清和疫苗免疫猪血清。

A蛋白基因在枯草杆菌R25及地衣芽孢杆菌NM105中的表达

目的：测定Ａ蛋白基因在Ｒ２５及ＮＭ１０５中的表达情况。方法：根据Ａ蛋白基因产物———Ａ蛋白能特异地与许多动物的免疫球蛋白的Ｆｃ段结合这一特性，采用ＥＬＩＳＡ检测法测定。结果：在细菌生长对数期，表达量与酶活性都在快速上升，在细菌生长平台期，表达量呈下降趋势。加中性蛋白酶抑制剂，使表达量提高了４６％，低酶活性培养基的表达量是ＬＢ培养基的７．４倍，在碱性蛋白酶缺失的Ｒ２５中的表达量是ＮＭ１０５的１．６倍。结论：Ａ蛋白基因表达量与胞外蛋白酶活性关系极为密切。

筛选与克隆丙型肝炎病毒NS5A蛋白结合蛋白的基因

细胞内蛋白 蛋白的结合是丙型肝炎病毒 (HCV)与宿主肝细胞相互作用的分子生物学基础。HCV的非结构蛋白 5A(NS5A)被认为是一种HCV基因组编码的重要调节蛋白因子 ,参与HCV的复制、转录和信号传导等过程 ,但是它在HCV的致病及耐药等方面的作用还存有争议。为了进一步阐明这个多功能蛋白质与宿主蛋白的关系 ,作者采用酵母双杂交系统 3,在酵母细胞融合蛋白表达型人肝cDNA文库中进行筛选 ,得到 35个与NS5A特异性结合的阳性克隆 ,包括载脂蛋白、线粒体单体型基因、磷脂酸酸性磷酸酶等 11种已知功能蛋白质基因和 3个未知功能基因。

应用A蛋白亲和层析法纯化单克隆抗体

应用Protein A亲和层析法,从采集的小鼠腹水中纯化出了抗凝血因子Ⅶ单克隆抗体,用SDS-PAGE和ELISA法分别检测了纯化后单克隆抗体的纯度及效价,结果显示,电泳为两条带,分别为免疫球蛋白G(IgG)的重链和轻链,纯化后的单克隆抗体纯度达到电泳纯,应用间接ELISA法测定腹水效价为1×10-7左右,与未纯化前无差异。结果表明,应用A蛋白亲和层析法能够得到纯度较高的单克隆抗体,适用于高纯度单克隆抗体的制备。

葡萄球菌A蛋白协同凝集试验快速检测草鱼出血病病毒

本文报道葡萄球菌 A蛋白协同凝集(SPA COA)快速检测草鱼出血病病毒的方法以及对提纯病毒、染毒细胞内病毒和病鱼组织检测的初步结果。并对该方法进行了特异性和敏感性考核以及凝集物的电镜观察。该方法快速、特异、设备简单,适合基层单位检测草鱼出血病病毒,并有可能作为草鱼出血病疫苗质量鉴定的指标之一。

Rho A蛋白通路在DLC-1基因调控人结肠癌HT29细胞周期中的作用及其机制

目的:探讨Rho A蛋白通路在DLC-1(frequently deleted in liver cancer-1)基因调控人结肠癌HT29细胞周期中的作用及其机制。方法:构建pcDNA3.1-DLC1质粒载体,脂质体法转染HT29细胞,筛选稳定细胞系;pull-down方法分析Rho A蛋白活性;实时定量PCR检测细胞周期相关蛋白Cyclin D1、p21的表达变化;流式细胞仪检测细胞周期分布。结果:野生型人结肠癌HT29细胞DLC-1基因表达呈阴性,经转染获得DLC-1稳定表达细胞系。与野生型及空载组HT29细胞相比,转染组细胞RhoA蛋白活性下降;Cyclin D1表达下调,p21表达上调;G1期及凋亡细胞数增加,而G2期细胞数下降。结论:转染DLC-1基因引起人结肠癌HT29细胞Rho A蛋白活性下调,进而可能通过对Cyclin D1、p21表达的调控使细胞周期G1期阻滞并诱导凋亡,同时分裂前期细胞数减少,细胞增殖受抑。

神经节苷脂对重型颅脑创伤患者血清Nogo-A蛋白水平的影响

目的观察神经节苷脂对重型颅脑创伤(sTBI)患者血清Nogo-A蛋白水平的影响及临床意义。方法将41例sTBI患者随机分为观察组20例和对照组21例,均行颅脑损伤常规治疗,观察组在此基础上静滴神经节苷脂100 mg,1次/d、共14 d。分别于治疗后第3、5、7、14天检测患者血清Nogo-A蛋白水平,3个月后行格拉斯哥预后评分(GOS)。结果观察组各时间点血清Nogo-A蛋白水平均明显低于对照组,GOS明显高于对照组,P均<0.05。结论神经节苷脂具有较好的神经保护作用,其作用机制可能是抑制Nogo-A蛋白表达。

p16INK4a蛋白在蒙古族患者宫颈病变组织中的表达及其意义

目的:检测p16INK4a蛋白在蒙古族患者宫颈病变组织中的表达,探讨其与蒙古族患者宫颈癌发生发展的关系。方法:选取100例蒙古族患者宫颈癌、宫颈上皮内瘤变(CIN)、慢性宫颈炎和子宫平滑肌瘤病变组织石蜡切片,分为宫颈癌组25例、CIN组35例、慢性宫颈炎组20例和子宫平滑肌瘤组20例,利用免疫组织化学SP法检测各组石蜡切片组织中p16INK4a蛋白表达。结果:蒙古族患者宫颈癌、CIN、慢性宫颈炎、子宫平滑肌瘤组织中p16INK4a蛋白阳性表达率分别为100.0%、74.3%、25.0%和10.0%。多个样本比较的K-W H秩和检验,宫颈癌组p16INK4a蛋白阳性表达率高于CIN组、慢性宫颈炎组和子宫平滑肌瘤组(P<0.05)。结论:p16INK4a蛋白可以作为筛选蒙古族早期宫颈癌患者的一种检测指标。

胃癌组织中RAB5A蛋白的表达及其与转移的关系

［目的］检测RABSA蛋白在胃癌组织中的表达及其与转移的关系。[方法]应用免疫组化SP方法检测47例胃癌石蜡包埋标本及7例正常胃组织中RAB5A蛋白的表达情况。［结果］正常胃组织中RAB5A蛋白表达的阳性率为0（0／7）；胃癌组织中RAB5A蛋白表达的阳性率为91．49％（43／47），两者的阳性率有显著性差异（P＜0．005）。有无淋巴结转移者的RAB5A蛋白表达的阳性率分别为91．89％（34／37）和90％（9／10），无显著性差异（P＞0．05），但两者RAB5A蛋白的表达程度有显著性差异（P＜0．05）。［结论］RAB5A蛋白的胃癌组织中高表达，且RAB5A蛋白的表达程度与胃癌转移有关。提示RAB5A可能是一个转移相关基因。

Ki67、PCNA蛋白在犬乳腺肿瘤中的表达

乳腺肿瘤细胞的增殖及其预后具有一定相关性。Ki67、PCNA是最常用的衡量肿瘤增殖指数（Proliferation Index）的标记物。Ki67是一种非组蛋白核蛋白质，分子质量在345～395kD之间，表达于细胞周期的G1、S、G2和M期，但在静止期不存在.

P16 INK4a蛋白及人乳头瘤病毒检测对宫颈癌前病变的预测价值

目的探讨P16 INK4a蛋白及人乳头瘤病毒(HPV)DNA对检测宫颈癌前病变的预测价值。方法收集2008年11月—2011年10月在上海交通大学医学院附属第一人民医院松江分院经细胞学筛查、阴道镜活检、组织病理学诊断为宫颈上皮内瘤变(CIN),并根据病变程度和患者意愿行宫颈锥切治疗的705例患者作为研究对象。分析P16 INK4a蛋白及HPV DNA检测对疾病的预测价值。结果 P16 INK4a蛋白阳性率在CINⅢ中高于HPV DNA阳性率(χ2=8.78,P<0.05),且P16 INK4a蛋白的阳性率与病变程度呈正相关(r=0.258,P<0.05),而HPV病毒阳性率与病变程度呈负相关(r=0.530,P<0.05)。结论 P16 INK4a蛋白比HPV DNA对检测CINⅢ具有更高的敏感性,所以HPV DNA联合P16 INK4a蛋白检测对CIN有更高的预测价值。

血浆血清淀粉样A蛋白、超敏C反应蛋白、纤维蛋白原与血脂关系及与冠心病心绞痛中医证候相关性研究

目的探讨冠心病心绞痛患者血浆血清淀粉样A蛋白(SAA)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、纤维蛋白原(FIB)等急性时相蛋白与血脂的关系及与冠心病心绞痛证候的相关性。方法根据冠脉造影结果,分为冠心病组和非冠心病组,检测空腹血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平;统一检测血浆载脂蛋白A1(Apoa1)、载脂蛋白B100(Apob100)、SAA、hs-CRP、FIB。冠心病心绞痛患者根据中医证候分为血瘀证、气虚证、痰浊证、阴虚证、阳虚证、气滞证6组。结果 (1)冠心病组SAA、hs-CRP、FIB高于非冠心病组;(2)SAA、hs-CRP、FIB与及Apoa1成负相关;(3)SAA、hs-CRP、FIB与阳虚、气虚、气滞3个证候相关。结论冠心病与脂代谢和炎症相关,不同中医证候与脂代谢、炎症有一定关系。

A蛋白亲和层析法纯化动物血清抗体的效果比较

比较ＨｉｔｒａｐＰｒｏｔｅｉｎ－ＡＳｅｐｈａｒｏｓｅ亲和层析系统，对不同动物血清或抗血清的纯化效率，提供抗体纯化提供依据。结果显示该方法简便快速，纯化的抗体纯度高，并能较好地保持免疫学活性。层析柱反复使用４０多次，纯化效率不变。但Ｐｒｏｔｅｉｎ－Ａ对不同动物血清的ＩｇＧ吸附能力不同。提示，应根据动物品种，选择合适的纯化方法。

MRSA-PBP2a蛋白的体外诱导、抗体制备及鉴定

目的:探讨耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin resistantstaphylococcusaureus,MRSA)蛋白的体外诱导;抗MRSA PBP2a(pencillinbindingprotein2a,PBP2a)蛋白抗体的制备及效价鉴定.方法:采用NCCLS推荐的琼脂板稀释法和PCR法筛选MRSA,以β内酰胺抗生素作为诱导剂,进行体外诱导产生PBP2a蛋白.免疫家兔后产生抗MRSA PBP2a蛋白抗体,采全血分离血清,用改良双向免疫扩散法进行抗体滴度测定.结果:11株临床分离的金葡菌采用二种方法均检测出2株MRSA,SDS PAGE和Westernblot结果均显示从MRSA菌株中均能诱导出了PBP2a蛋白;免疫后均能产生较高的效价抗体,分别为1∶32和1∶64.结论:成功诱导出产生耐甲氧西林金黄色葡萄球菌PBP2a蛋白菌株,并制备获得PBP2a蛋白,以及制备抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌PBP2a蛋白抗体,为研究MRSA PBP2a蛋白活性、MRSA的免疫治疗和MRSA快速鉴定方法学的建立奠定基础.

葡萄球菌A蛋白体内治疗方式对疗效的影响

本文以肉瘤S^(180)、艾氏腹水癌为模型,研究了SPA、SAC和SAW体内注射的治疗方式对疗效的影响。结果表明,纯品SPA对腹水型肿瘤无效,菌体SAC和SAW则效果显著,三者的治疗途径与肿瘤生长部位接近或相同时效果较好,SAC的治疗剂量与疗效有关。