外阴鳞状细胞癌肿瘤干细胞的分选和鉴定

目的:分离外阴鳞状细胞癌A-431细胞系中CD44^+的细胞亚群,鉴定其具有肿瘤干细胞特性。方法:采用流式细胞术分选出CD44免疫荧光抗体标记的CD44^+细胞亚群,检测CD133、CD34蛋白在CD44^+和CD44^-中表达的差异,检测CD44^+及CD44^-细胞亚群的细胞周期。结果:A-431细胞系中CD44^+细胞亚群约占4%,胚胎干细胞因子CD133、CD34在CD44^+和CD44^-的VSCC中表达存在显著性差异,主要在细胞膜上表达,CD44^+的肿瘤细胞亚群97.69%处于G_1期,CD44^-的肿瘤细胞亚群61.12%处于S期。结论:在A-431细胞系中CD44可以作为分选肿瘤干细胞的特异性表面标志物,CD133、CD34在CD44^+的肿瘤细胞高表达,可能成为分选外阴鳞癌肿瘤干细胞的特异性表面标志物,CD44^+肿瘤细胞具有典型的干细胞增殖特点。

重组抗表皮生长因子受体单克隆抗体生物学活性检测方法的建立

目的建立重组抗表皮生长因子受体(epithelial growth factor receptor,EGFR)单克隆抗体生物学活性检测方法。方法利用A-431细胞,对系列梯度稀释的重组抗EGFR单克隆抗体参考品和供试品进行检测,通过四参数方程进行拟合,计算二者的半数有效浓度(EC50)及供试品的相对比活性,并对该方法进行专属性、精密度(重复性、中间精密度)和准确度验证。结果重组抗EGFR单克隆抗体供试品及参考品在该方法中均存在明显的量效关系,四参数拟合的曲线呈典型的反S型曲线。人Ig G1亚型免疫球蛋白(阴性对照)与A-431细胞无交叉反应,不呈现与重组抗EGFR单克隆抗体供试品相似的剂量-反应曲线;同一名试验人员重复6次检测结果的RSD为5%,同一名试验人员3个工作日检测结果的RSD为4%,3名试验人员3次检测结果的RSD为10%,不同浓度的3个供试品溶液生物学活性理论值和检测值的相对误差分别为10%、8%和12%,均满足方法验证的可接受标准。结论成功建立了重组抗EGFR单克隆抗体生物学活性检测方法,该方法专属性较强,精密度良好,准确度较高,可作为重组抗EGFR单克隆抗体生物学活性的常规检测方法。