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LINC00462通过MYC/ABCC3轴影响肾透明细胞癌细胞糖酵解进而调控其对顺铂的敏感性
1
作者
王晓玲
胡威威
孟莉丹
《中国肿瘤生物治疗杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第9期762-770,共9页
目的:探讨LINC00462招募转录因子MYC激活ABCC3对肾透明细胞癌(ccRCC)顺铂敏感性的影响及其机制。方法:数据库分析ccRCC组织中ABCC3、MYC和LINC00462的表达及其相关性,并分析ABCC3基因的富集通路。常规培养人肾小管上皮细胞(HK-2)和ccRC...
目的:探讨LINC00462招募转录因子MYC激活ABCC3对肾透明细胞癌(ccRCC)顺铂敏感性的影响及其机制。方法:数据库分析ccRCC组织中ABCC3、MYC和LINC00462的表达及其相关性,并分析ABCC3基因的富集通路。常规培养人肾小管上皮细胞(HK-2)和ccRCC细胞(A-498、786-O和Caki-2),将si-LINC00462、oe-ABCC3、si-ABCC3、si-MYC、si-LINC00462-NC、oe-ABCC3-NC、si-ABCC3-NC和si-MYC-NC核酸序列分别转染A-498或786-O细胞,分为si-LINC00462组、si-LINC00462-NC组、oe-ABCC3组、oe-ABCC3-NC组、si-ABCC3组、si-ABCC3-NC组、si-MYC组、si-MYC-NC组;用2-脱氧-D-葡萄糖(2-DG)进行回复实验,构建oe-NC+PBS组、oe-ABCC3+PBS组、oe-ABCC3+2-DG组;为探究ccRCC细胞LINC00462/MYC/ABCC3轴对顺铂敏感性的影响,构建si-NC+oe-NC组、si-LINC00462+oe-NC组、si-LINC00462+oe-ABCC3组。qPCR法检测ABCC3、MYC和LINC00462在ccRCC细胞中的表达,CCK-8法检测细胞增殖活力,CCK-8法分析梯度浓度顺铂处理ccRCC细胞后IC50值,WB法检测糖酵解代谢途径相关蛋白的表达,Seahorse XP96法检测各处理组细胞的胞外酸化率(ECAR)和耗氧率(OCR),试剂盒检测细胞中丙酮酸、乳酸、ATP水平。双荧光素酶报告基因和染色质免疫共沉淀(ChIP)实验验证ABCC3与MYC间的结合关系,RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)实验验证LINC00462和MYC的结合关系。结果:数据库分析和qPCR实验结果显示,ABCC3在ccRCC组织和细胞中呈高表达,差异基因富集在糖酵解通路上。敲减或过表达ABCC3能够增加A-498细胞或降低786-O细胞对顺铂的敏感性,ABCC3可通过促进有氧糖酵解抑制A-498细胞对顺铂的敏感性,2-DG处理可以逆转过表达ABCC3对ccRCC细胞对顺铂敏感性的抑制作用。MYC可直接和ABCC3结合,LINC00462可招募转录因子MYC;敲低LINC00462可抑制ABCC3的表达,敲低LINC00462可抑制ccRCC细胞的有氧糖酵解,并提高其对顺铂敏感性;而进一步过表达ABCC3可逆转敲低LINC00462对ccRCC细胞有氧糖酵解的抑制作用和顺铂敏感性的提高。结论:LINC00462通过招募转录因子MYC激活ABCC3的表达促进ccRCC细胞的糖酵解,进而促进ccRCC细胞对顺铂敏感性。
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关键词
LINC00462
MYC
ABCC3
肾透明
细胞
癌
a-498细胞
786-O
细胞
糖酵解
顺铂敏感性
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职称材料
题名
LINC00462通过MYC/ABCC3轴影响肾透明细胞癌细胞糖酵解进而调控其对顺铂的敏感性
1
作者
王晓玲
胡威威
孟莉丹
机构
衡水市人民医院肾内科
衡水市人民医院老年病一科
出处
《中国肿瘤生物治疗杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第9期762-770,共9页
基金
河北省医学科学研究课题(No.20220452)。
文摘
目的:探讨LINC00462招募转录因子MYC激活ABCC3对肾透明细胞癌(ccRCC)顺铂敏感性的影响及其机制。方法:数据库分析ccRCC组织中ABCC3、MYC和LINC00462的表达及其相关性,并分析ABCC3基因的富集通路。常规培养人肾小管上皮细胞(HK-2)和ccRCC细胞(A-498、786-O和Caki-2),将si-LINC00462、oe-ABCC3、si-ABCC3、si-MYC、si-LINC00462-NC、oe-ABCC3-NC、si-ABCC3-NC和si-MYC-NC核酸序列分别转染A-498或786-O细胞,分为si-LINC00462组、si-LINC00462-NC组、oe-ABCC3组、oe-ABCC3-NC组、si-ABCC3组、si-ABCC3-NC组、si-MYC组、si-MYC-NC组;用2-脱氧-D-葡萄糖(2-DG)进行回复实验,构建oe-NC+PBS组、oe-ABCC3+PBS组、oe-ABCC3+2-DG组;为探究ccRCC细胞LINC00462/MYC/ABCC3轴对顺铂敏感性的影响,构建si-NC+oe-NC组、si-LINC00462+oe-NC组、si-LINC00462+oe-ABCC3组。qPCR法检测ABCC3、MYC和LINC00462在ccRCC细胞中的表达,CCK-8法检测细胞增殖活力,CCK-8法分析梯度浓度顺铂处理ccRCC细胞后IC50值,WB法检测糖酵解代谢途径相关蛋白的表达,Seahorse XP96法检测各处理组细胞的胞外酸化率(ECAR)和耗氧率(OCR),试剂盒检测细胞中丙酮酸、乳酸、ATP水平。双荧光素酶报告基因和染色质免疫共沉淀(ChIP)实验验证ABCC3与MYC间的结合关系,RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)实验验证LINC00462和MYC的结合关系。结果:数据库分析和qPCR实验结果显示,ABCC3在ccRCC组织和细胞中呈高表达,差异基因富集在糖酵解通路上。敲减或过表达ABCC3能够增加A-498细胞或降低786-O细胞对顺铂的敏感性,ABCC3可通过促进有氧糖酵解抑制A-498细胞对顺铂的敏感性,2-DG处理可以逆转过表达ABCC3对ccRCC细胞对顺铂敏感性的抑制作用。MYC可直接和ABCC3结合,LINC00462可招募转录因子MYC;敲低LINC00462可抑制ABCC3的表达,敲低LINC00462可抑制ccRCC细胞的有氧糖酵解,并提高其对顺铂敏感性;而进一步过表达ABCC3可逆转敲低LINC00462对ccRCC细胞有氧糖酵解的抑制作用和顺铂敏感性的提高。结论:LINC00462通过招募转录因子MYC激活ABCC3的表达促进ccRCC细胞的糖酵解,进而促进ccRCC细胞对顺铂敏感性。
关键词
LINC00462
MYC
ABCC3
肾透明
细胞
癌
a-498细胞
786-O
细胞
糖酵解
顺铂敏感性
Keywords
LINC00462
MYC
ABCC3
clear cell renal cell carcinoma(ccRCC)
a-
498
cell
786-O cell
glycolysis
cisplatin sensitivity
分类号
R737.11 [医药卫生—肿瘤]
R730.53 [医药卫生—肿瘤]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
LINC00462通过MYC/ABCC3轴影响肾透明细胞癌细胞糖酵解进而调控其对顺铂的敏感性
王晓玲
胡威威
孟莉丹
《中国肿瘤生物治疗杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2023
0
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