A-NK细胞促口腔鳞状细胞癌凋亡效应的研究

目的通过观察A-NK细胞对裸鼠舌鳞状细胞癌移植瘤模型的体外生长特点以及口腔鳞状细胞癌(OSCC)凋亡指数的检测,探讨A-NK细胞对OSCC的免疫治疗机制。方法建立裸鼠舌鳞癌皮下移植瘤模型,随机分为对照组、A-NK细胞组和NA-NK细胞组,观察33天后瘤重,绘制肿瘤生长曲线;OSCC组织标本经末端脱氧核苷酸转移酶介导的UTP缺口标记(TUNEL)染色以鉴定凋亡细胞,并由阳性细胞百分比表示细胞凋亡指数(AI)。结果 ANK细胞组第15天开始肿瘤体积显著小于对照组(P<0.05);NA-NK细胞组第27天后肿瘤体积显著小于对照组(P<0.05);A-NK细胞组第30天肿瘤体积显著小于NA-NK细胞组(P<0.05),且三组荷瘤裸鼠肿瘤生长重量均有明显差异,差异有统计学意义(P<0.05)。NK组病例活检癌组织AI为(0.71±0.66)%,A-NK组织AI为(1.76±0.83)%,二者间有显著性差异(P<0.01);对照组癌组织AI为(0.34±0.69)%,与前二者间有显著性差异(P<0.01)。结论 A-NK细胞和NA-NK细胞均可在裸鼠体内诱导明显的抗肿瘤效应,且A-NK的抑瘤作用大于NA-NK细胞。NK细胞对口腔鳞状细胞癌具有免疫杀伤效应,该作用是通过诱导靶细胞凋亡实现的。

A-NK细胞抗口腔舌鳞状细胞癌的实验研究

目的观察黏附性自然杀伤(A-NK)细胞体外生长与增殖能力,探讨其治疗裸鼠舌鳞状细胞癌移植瘤的效果及其作用机制,为临床治疗鳞癌提供理论依据。方法抽取健康人外周血,分选出A-NK细胞和非黏附性自然杀伤(NA-NK)细胞体外培养,镜下观察细胞生长情况。建立裸鼠舌鳞癌皮下移植瘤模型,随机分成3组,每组7只小鼠,分别瘤旁注射生理盐水、A-NK细胞和NA-NK细胞,观察肿瘤体积变化,33 d后,处死裸鼠,剥离移植瘤,称瘤质量,绘制肿瘤生长曲线。结果镜下观察,A-NK细胞在第15天达到增殖高峰,NA-NK细胞于第12天达到增殖高峰。培养3周后,A-NK细胞共增加39.33倍,NA-NK细胞仅增加16.33倍。生理盐水组裸鼠口腔舌鳞癌移植瘤体积大于NA-NK细胞组和A-NK细胞组,NA-NK细胞组大于A-NK细胞组,3组裸鼠肿瘤体积在组间、时间和交互效应上差异均有统计学意义(P<0.01)。第33天,生理盐水组裸鼠瘤质量大于NA-NK细胞组和A-NK细胞组,NA-NK细胞组大于A-NK细胞组(P<0.05)。结论 A-NK细胞和NA-NK细胞均可在裸鼠体内诱导明显的抗肿瘤效应,且A-NK的抑瘤作用大于NA-NK细胞。

IL-2联合IL-12激活A-NK细胞治疗人肝癌HepG-2

目的:研究A-NK细胞体外抗肿瘤作用及小鼠体内抗肿瘤作用. 方法:用淋巴细胞分离液分离健康人外周血中的血单个核细胞,PME(5 mmoL/L)室温处理40 min,PME处理后的人外周血单个核细胞重悬于AIMV中.分为四组分别为:IL-2 (6 MU/L)组,IL-2(1MU/L)组,IL-12(5 ug/L)组,IL-2 (1 MU/L)+IL-12(5 ug/L)组;每瓶细胞浓度为5×109/L,于37℃,50 mL/L CO2饱和湿化空气的培养箱中水平培养4- 5h,移去含未黏附于塑料表面的细胞悬液,收集黏附于塑料表面的细胞(即A-NK细胞),MTT比色法检测A-NK细胞体外细胞毒作用;然后建立肝癌细胞株裸鼠皮下移植瘤模型,以肿瘤体积、抑瘤率、生存期等指标观察A-NK对移植瘤的抑制作用. 结果:A-NK+IL-2+IL-12组细胞毒活性明显高于其他三组(aP<0.05),体内实验表明A-NK+IL-2+EL-4/IL-12治疗组的移植瘤生长速度缓慢,体积明显小于生理盐水对照组(bP<0.05),生存期显著延长(cP<0.05). 结论:IL-12辅助IL-2激活的A-NK细胞的体外杀伤活性较单独用IL-2或IL-12强,体内实验显示具有明显的抗肿瘤作用.

IL-4增强IL-2活化的A-NK细胞对人直肠癌CC95的抗肿瘤作用

目的:用IL—4联合IL—2共同诱导A-NK细胞,研究A-NK细胞体外细胞毒性及对直肠肿瘤生长的抑制作用.方法:用基因重组的IL-2和IL-4联合活化A-NK细胞,用LDH-L释放法测定效应细胞的细胞活性,同时观察A—NK细胞对人直肠癌细胞在裸鼠体内的生长抑制作用.结果:IL-2单独或IL—2联合IL-4均可以诱导A-NK细胞,但二者联合效果更好,通过LDH—L测定活化的A—NK细胞可在体外杀伤K562,Anip973和CC95细胞(39.00±9.16 vs77.68±12.80,43.10 ±10.05 vs 80.02±13.74,42.14±9.72vs 79.10±2.65,P<0.01),抑制人直肠癌肿瘤在裸鼠体内的生长(1.04±0.15 vs 0.62±0.16,P<0.01),提示A-NK细胞膜表面存在IL—4受体的表达.结论:IL—4能够增强IL-2诱发的A—NK细胞抗肿瘤活性,此方法在将来肿瘤临床治疗中具有潜在的应用价值.

A-NK细胞联合IL-2,IL-12在肿瘤免疫治疗中的作用

本文对A-NK细胞联合IL-2和IL-12在抗肿瘤免疫治疗中的作用进行了论述。强调联合应用可高效激活A-NK细胞,提高对肿瘤细胞的杀伤活性。减少IL-2和IL-12的用量及副作用,提高疗效。

A-NK细胞的抗肿瘤作用

过继免疫治疗（AIT）是肿瘤生物治疗中的主要疗法。20世纪80年代起，LAK、TIL、CIL、CD3AK等效应细胞陆续被研究，国内外基础研究和临床应用报道层出不穷。1988年Vujanovic首次从LAK细胞中分离纯化了一种具有高效杀伤活性的LAK亚群，因其具有黏附在塑料表面的特征，故命名为A-LAK（adherent LAK）。20世纪90年代后以A—NK（IL-2 activated NK cell）代替了A-LAK。本实验参照文献简便快速地制备A-NK细胞，并在动物肝癌模型研究其抗肿瘤作用。

A-NK细胞对舌鳞癌裸鼠皮下移植瘤抑制作用的实验研究

目的：探讨A-NK细胞治疗裸鼠舌鳞癌移植瘤的效果。方法：分离培养人A-NK细胞;建立舌鳞癌Tca8113-Tb细胞皮下移植瘤模型,随机分为2组（n=7）对照组裸鼠瘤旁注射生理盐水,实验组裸鼠瘤旁注射A-NK细胞,观察33 d后,处死裸鼠,剥离移植瘤,称瘤重,绘制肿瘤生长曲线。结果：治疗15-33 d时实验组肿瘤体积均小于对照组（P〈0.05）,观察33 d后,实验组和对照组瘤重（g）分别是为0.96±0.38和3.74±1.22（P〈0.05）。结论：A-NK细胞在裸鼠体内具有抗肿瘤效应。

A-NK细胞抗肝癌Walker256瘤株的实验研究

目的:观察A-NK细胞的体外生长与增殖,以及杀伤肿瘤细胞的能力,研究A-NK细胞局部注射的体内抗肿瘤作用。方法:用淋巴细胞分离液分离单个核细胞(PBMC),培养LAK细胞和A-NK细胞,分别将LAK细胞、A-NK细胞和Walker-256瘤株细胞接种于培养板中,培养24h后,用四甲基偶氮唑盐(MTT)方法测定吸光度,计算肿瘤杀伤率。复制鼠肝癌模型,分别将LAK、A-NK细胞经肝动脉注入鼠肝癌模型中,观察两组动物的生存时间。结果:A-NK细胞的增殖明显快于LAK细胞(P<0.05),A-NK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性比LAK细胞强(P<0.01),A-NK细胞能显著延长肝癌动物模型的生存期,与LAK细胞比较,具有显著性差异(P<0.01)。结论:A-NK细胞具有增殖快,抗瘤活性强,在体内能抑制肿瘤生长,延长荷瘤动物的生存期。

A-NK细胞对大鼠肝癌的影响

目的探讨A-NK细胞对肝癌的抗肿瘤作用。方法分别将LAK、A-NK细胞经肝动脉注入鼠肝癌模型中,观察两组动物的生存时间。结果A-NK细胞能显著延长肝癌动物模型的生存期,与LAK细胞比较差异有高度显著性(P<0.01)。结论A-NK细胞对肝癌的抗肿瘤作用比LAK细胞强,有临床应用前景。

A-NK细胞对肿瘤治疗的研究

A NK细胞作为肿瘤过继免疫治疗 (AIT)中的一种新型免疫效应细胞 ,具有短期内大量增殖 ,体内外抗肿瘤活性较高的特点 ,临床应用也显示出广阔前景。本文就国内外的研究现况作一综述。

局部应用A-NK/IL-2治疗的抑瘤作用

我们对A-NK及NA-NK细胞体外扩增情况进行观察,然后用A-NK/IL-2局部或全身应用进行体内的抗肿瘤治疗实验,并与NA-NK进行了比较。结果局部应用A-NK/IL-2治疗比NA-NK/IL-2有更强的抑瘤作用。1材料和方法1.1主要试剂和培养液1.1.1完全培养液（CM）分离制备的A-NK和NA-NK细胞均采用RPMI-1640完全培养液培养。

其它

蟾蜍毒素对H22荷瘤小鼠的疗效及毒副作用的实验研究；无血清培养基对体外激活的A-NK细胞的支持作用；葡萄抑制新生血管形成的实验研究；羟喜树碱联合热疗对体内外血管生成的抑制作用；模拟IMRT模式的生物效应研究初探；锰超氧化物歧化酶基因转染小鼠小肠上皮细胞的放射性损伤作用；恶性肿瘤患者临终前的阿片类药物止痛回顾。