lncRNA LUCAT1通过miR-199b-5p/AKAP1信号轴促进肝癌进展的机制

目的探究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)肺癌相关转录物1(lung cancer associated transcript 1,LUCAT1)通过miR-199b-5p/A激酶锚定蛋白1(A-kinase anchoring protein 1,AKAP1)信号轴促进肝癌转移的机制。方法收集2020年1月至2021年10月在成都市新都区人民医院进行手术治疗的80例肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者的肝癌及癌旁组织标本,采用RT-qPCR检测LUCAT1、miR-199b-5p、AKAP1 mRNA水平。将Huh7、HepG2细胞进行不同转染,pHRi-si-NC、pHRi-si-LUCAT1分别转染至Huh7、HepG2细胞,pHRi-si-LUCAT1和pHRi-anti-miR-NC、pHRi-si-LUCAT1和pHRi-anti-miR-199b-5p、pHRi-si-LUCAT1和pHRi-NC、pHRi-si-LUCAT1和pHRi-AKAP1分别共转染至Huh7、HepG2细胞。双荧光素酶报告验证LUCAT1对miR-199b-5p、miR-199b-5p对AKAP1的调控关系;EdU染色、划痕实验和Transwell实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力;RT-qPCR检测细胞LUCAT1、miR-199b-5p和AKAP1 mRNA水平;Western blot检测细胞Ki67、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2、MMP-9水平。向20只裸鼠皮下注射已转染pHRi-si-LUCAT1的Huh7细胞悬液,30 d后测定移植瘤体积、质量、LUCAT1、miR-199b-5p、AKAP1 mRNA、Ki67、MMP-2、MMP-9水平。结果①与癌旁组织相比,HCC组织LUCAT1(1.51±0.53比1.13±0.72;t=3.802,P<0.001)、AKAP1 mRNA(3.73±0.97比1.28±0.76;t=17.783,P<0.001)水平显著升高,miR-199b-5p(1.21±0.53比3.56±1.02;t=18.286,P<0.001)水平显著降低。②转染pHRi-si-LUCAT1后,miR-199b-5p水平显著升高(Huh7:3.71±0.28比1.00±0.10,t=15.787,P=0.004;HepG2:3.49±0.25比1.00±0.11,t=15.790,P=0.004),LUCAT1(Huh7:0.34±0.05比1.00±0.06,t=14.637,P=0.005;HepG2:0.41±0.06比1.00±0.07,t=11.084,P=0.008)和AKAP1 mRNA水平显著降低(Huh7:0.52±0.05比1.00±0.09,t=8.075,P=0.015;HepG2:0.55±0.06比1.00±0.13,t=5.444,P=0.032);细胞EdU阳性率、划痕愈合率和细胞侵袭数均显著降低(P均<0.05);Ki67(Huh7:0.24±0.03比0.92±0.06,t=17.558,P=0.003;HepG2:0.10±0.03比0.51±0.03,t=16.738,P=0.004)、MMP-2(Huh7:0.20±0.03比0.90±0.05,t=20.793,P=0.002;HepG2:0.05±0.02比0.21±0.02,t=9.798,P=0.010)、MMP-9(Huh7:0.25±0.04比0.75±0.05,t=13.525,P=0.005;HepG2:0.15±0.03比0.59±0.04,t=15.242,P=0.004)表达水平显著降低;共转染pHRi-si-LUCAT1和pHRi-anti-miR-199b-5p后,miR-199b-5p水平显著降低(Huh7:1.42±0.11比3.65±0.25,t=14.142,P=0.005;HepG2:1.30±0.05比3.71±0.20,t=20.248,P=0.002),LUCAT1(Huh7:0.85±0.10比0.40±0.06,t=6.683,P=0.022;HepG2:0.90±0.08比0.45±0.04,t=8.714,P=0.013)和AKAP1 mRNA水平显著升高(Huh7:0.80±0.07比0.55±0.04,t=5.371,P=0.033;HepG2:0.85±0.08比0.51±0.04,t=6.584,P=0.022);细胞EdU阳性率、划痕愈合率和细胞侵袭数均显著升高(P均<0.05);Ki67(Huh7:0.91±0.06比0.25±0.04,t=15.853,P=0.004;HepG2:0.92±0.07比0.18±0.03,t=16.830,P=0.004)、MMP-2(Huh7:0.62±0.05比0.22±0.03,t=11.882,P=0.007;HepG2:0.75±0.05比0.39±0.05,t=8.818,P=0.013)、MMP-9(Huh7:0.51±0.05比0.18±0.02,t=10.614,P=0.009;HepG2:0.89±0.06比0.34±0.04,t=13.211,P=0.006)表达水平显著升高;共转染pHRi-si-LUCAT1和pHRi-AKAP1后,miR-199b-5p水平显著降低(Huh7:1.82±0.12比3.55±0.30,t=9.274,P=0.011;HepG2:1.70±0.14比3.62±0.25,t=11.606,P=0.007),LUCAT1(Huh7:0.71±0.03比0.30±0.03,t=16.738,P=0.004;HepG2:0.75±0.05比0.35±0.04,t=10.820,P=0.008)和AKAP1 mRNA水平显著升高(Huh7:0.87±0.05比0.51±0.03,t=10.694,P=0.009;HepG2:0.90±0.09比0.54±0.04,t=6.331,P=0.024);细胞EdU阳性率、划痕愈合率和细胞侵袭数均显著升高(P均<0.05);Ki67(Huh7:0.64±0.06比0.30±0.03,t=8.779,P=0.013;HepG2:0.75±0.06比0.25±0.03,t=12.910,P=0.006)、MMP-2(Huh7:0.80±0.05比0.34±0.04,t=12.443,P=0.002;HepG2:0.84±0.08比0.40±0.03,t=8.920,P=0.012)、MMP-9(Huh7:0.76±0.05比0.23±0.04,t=14.337,P=0.005;HepG2:0.76±0.05比0.31±0.04,t=12.173,P=0.007)表达水平显著升高;③转染pHRi-si-LUCAT1后,肿瘤体积[(523.67±64.33)mm^(3)比(1542.21±201.51)mm^(3),t=8.340,P=0.014)]和质量[(0.67±0.15)g比(1.87±0.22)g,t=7.806,P=0.016)]均显著减小,LUCAT1(0.47±0.10比1.00±0.14,t=5.336,P=0.033)、AKAP1(0.12±0.03比0.51±0.05,t=11.585,P=0.007)、Ki67(2.45±0.28比5.93±0.55,t=9.766,P=0.010)、MMP-2(2.35±0.25比5.74±0.51,t=10.338,P=0.009)、MMP-9(3.55±0.34比6.42±0.84,t=5.486,P=0.032)蛋白水平均显著降低,miR-199b-5p(1.68±0.17比1.00±0.16,t=5.045,P=0.037)水平显著升高。结论LncRNA LUCAT1通过miR-199b-5p/AKAP1信号轴促进HCC细胞增殖、迁移和侵袭。

胃腺癌组织RBMS1、AKAP12表达变化及其临床意义

目的探讨胃腺癌组织RNA结合基序单链相互作用蛋白1(RBMS1)、A激酶锚定蛋白12(AKAP12)表达变化及其临床意义。方法选择胃腺癌患者102例,取手术切除的胃癌组织及其癌旁组织(距肿瘤组织边缘5 cm以上,经病理检查明确为正常胃组织),采用免疫组化法检测RBMS1、AKAP12表达。比较胃癌组织与癌旁正常组织RBMS1、AKAP12阳性表达率,采用Pearson线性相关分析法分析胃癌组织RBMS1阳性表达与AKAP12阳性表达的关系。分析胃癌组织RBMS1、AKAP12阳性表达与临床病理特征的关系以及二者表达与预后的关系。结果胃癌组织RBMS1阳性表达率显著高于癌旁正常组织,AKAP12阳性表达率显著低于癌旁正常组织(χ^(2)分别为75.583、53.204,P均<0.05)。胃癌组织RBMS1阳性表达与AKAP12阳性表达呈负相关关系(r=-0.625,P<0.05)。胃癌组织RBMS1、AKAP12阳性表达与TNM分期、淋巴结转移有关(P均<0.05),与性别、年龄、肿瘤最大径、肿瘤部位、组织分化程度无关(P均>0.05)。所有患者术后随访2~36个月,中位随访时间25.30个月。随访期间失访1例,死亡30例,3年总体生存率为70.30%(71/101)。胃癌组织RBMS1阳性表达者与阴性表达者3年总体生存率分别为66.20%(47/71)、80.00%(24/30),胃癌组织AKAP12阳性表达者与阴性表达者3年总体生存率分别为82.14%(23/28)、65.75%(48/73)。胃癌组织RBMS1阳性表达者3年总体生存率显著低于其阴性表达者(χ^(2)=4.310,P<0.05),胃癌组织AKAP12阳性表达者3年总体生存率显著高于其阴性表达者(χ^(2)=4.569,P<0.05)。结论胃腺癌组织RBMS1高表达、AKAP12低表达,二者表达变化与肿瘤TNM分期、淋巴结转移和患者预后密切相关。

AKAP1过表达腺病毒载体构建及其在心肌细胞中的功能初步研究

目的利用Ad Easy腺病毒载体系统构建A激酶锚定蛋白(AKAP)1重组腺病毒载体,初步探索AKAP1在心肌细胞中的功能。方法以正常小鼠心肌细胞c DNA为模板,利用PCR获取AKAP1基因,构建腺病毒重组质粒p Ad Easy-AKAP1。用293A细胞,包装重组腺病毒Ad-AKAP1颗粒,并用荧光蛋白标记法测定其滴度。用Western blot检测重组腺病毒感染原代小鼠心肌细胞和糖尿病心肌病细胞模型后AKAP1、Caspase-3的表达情况,用流式细胞仪检测原代小鼠心肌细胞内ROS生成水平及AKAP1对高糖状态下心肌细胞凋亡的影响。结果构建了携带AKAP1基因的过表达腺病毒载体,并获得5×10^(10)pfu/ml的高滴度重组腺病毒。重组腺病毒可感染原代心肌细胞和糖尿病心肌病模型H9c2细胞并介导AKAP1过表达(P<0.05)。与阴性对照组相比,过表达AKAP1可抑制高糖高脂状态下心肌细胞内ROS的生成(P<0.05),可抑制高糖状态下心肌细胞的凋亡和Caspase-3活化(P<0.01)。结论过表达AKAP1对高糖高脂状态下的心肌细胞具有潜在保护作用,对心肌功能发挥具有重要作用。其机制可能与AKAP1抑制心肌细胞内ROS生成、抑制Caspase-3活化、抑制细胞凋亡有关。

视网膜神经节细胞中AKAP1的丢失与青光眼小鼠病情发展的相关性及机制研究

目的探究视网膜神经节细胞中A激酶锚定蛋白1(AKAP1)的丢失与青光眼小鼠病情发展的相关性及机制。方法选择无特定病原体(SPF)级C57BL/6小鼠,通过硬膜外静脉阻塞并烧灼建立具有慢性高眼压的小鼠青光眼模型,然后按照眼压高低分为青光眼早期组(相对低眼压+造模后7 d)、青光眼中期组(相对中眼压+造模后15 d)和青光眼晚期组(相对高眼压+造模后28 d),每组6只,另选取6只正常小鼠作为对照组(造模后7 d)。手持眼压计检测各组小鼠眼内压;蛋白质印迹分析各组AKAP1的蛋白表达;苏木精-伊红染色用于分析视网膜的病理变化;CCK-8试剂盒与TUNEL分析检测细胞的活力与凋亡;免疫组织化学分析检测细胞自噬相关蛋白的表达水平;RT-PCR实时分析磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、丝苏氨酸蛋白激酶(Akt)和腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)的mRNA表达。结果与对照组相比,青光眼早期组、中期组和晚期组的AKAP1的蛋白表达、IPL和GCL厚度和细胞活力均显著降低,眼内压、细胞凋亡率、LC3-Ⅱ/Ⅰ和Beclin水平均显著升高(P <0.05),且随着病情发展,3组青光眼小鼠的AKAP1的蛋白表达、IPL和GCL厚度和细胞活力逐渐降低,眼内压、细胞凋亡率、LC3-Ⅱ/Ⅰ和Beclin水平均逐渐升高,组间差异均有统计学意义(P <0.05)。结论视网膜神经节细胞中AKAP1的丢失与青光眼小鼠病情发展负相关,AKAP1的低表达,抑制了PI3K/Akt/AMPK途径,促进了视网膜神经节细胞的凋亡和自噬,因此与青光眼的发病机制密切相关,有助于AKAP1针对青光眼的定向诊断和治疗。

AKAP1调控线粒体稳态及其在心血管疾病中的研究进展

线粒体是细胞的能量工厂,同时也是细胞内信号传导的枢纽,可调节细胞增殖、分化和存活。A型激酶锚定蛋白(A-kinase anchoring protein,AKAP) 1是一种支架蛋白,因其可与蛋白激酶(protein kinase,PK) A结合而得名。近年研究发现AKAP1可将多种信号蛋白以及mRNA招募至线粒体外膜,调节线粒体功能及一系列相关生理病理过程。研究报道AKAP1可参与调控心肌肥厚、心肌细胞凋亡、血管舒张等活动,提示AKAP1与心血管疾病密切相关。本文将对AKAP1及其信号复合物调控线粒体功能的分子机制进行综述,并阐述AKAP1在心血管疾病中的研究进展。

AKAP1在高原低压低氧致心肌损伤中的保护作用及机制

目的探讨A型激酶锚定蛋白1(A-kinase anchored protein1,AKAP1)在高原低压低氧环境导致心肌损伤中的保护作用及可能机制。方法于2021年1月至2022年5月,将SPF级雄性C57BL/6小鼠分为常氧野生对照(wild type,WT)组及高原低压低氧实验(hypobaric hypoxia,HH)组,各6只小鼠;HH组用动物实验低压氧舱模拟6000 m海拔持续4周构建模型。分离SD大鼠乳鼠原代心肌细胞后分为常氧对照组及低氧实验组(n=3),用三气低氧培养箱以1%氧浓度低氧24 h构建细胞模型。用蛋白质印迹法、免疫组化及实时荧光定量聚合酶链反应检测心肌组织和细胞中AKAP1蛋白及mRNA表达。心肌点注射AKAP1或对照腺病毒后将小鼠分3组(n=6):WT组、高原低压低氧过表达对照组(HH+Ad-Ctrl组)、高原低压低氧过表达实验组(HH+Ad-AKAP1组)。用无创M型超声心动机检测小鼠心脏功能,马松及天狼猩红染色检测心肌纤维化程度,麦胚凝集素检测心肌细胞肥大状况。用siRNA干涉或腺病毒上调原代心肌细胞AKAP1表达后将细胞分3组(n=3):常氧对照组,低氧干涉对照组(低氧+siCtrl组),低氧AKAP1敲低组(低氧+siAKAP1组);常氧对照组,低氧过表达对照组(低氧+Ad-Ctrl组),低氧AKAP1过表达组(低氧+Ad-AKAP1组)。用流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法及实时荧光定量聚合酶链反应检测AKAP1、凋亡相关蛋白及mRNA的表达水平,JC-1染色检测线粒体膜电位,MitoSOX检测线粒体活性氧水平。结果HH组小鼠心肌AKAP1表达低于WT组,低氧实验组细胞AKAP1表达低于常氧对照组(P<0.01)。与WT组比较,HH+Ad-Ctrl组小鼠左心室射血分数及左心室短轴缩短率降低(P<0.01),心肌纤维化及肥大程度加重(P<0.01),B细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2,BCL-2)降低,BCL-2相关X蛋白(BCL-2-associated X protein,BAX)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase 3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(Caspase 9)表达升高(P<0.01)。过表达AKAP1后,与HH+Ad-Ctrl组比较,HH+Ad-AKAP1组小鼠左心室射血分数及左心室短轴缩短率升高(P<0.01),心肌纤维化及肥大程度减轻(P<0.01),BCL-2表达升高,BAX、Caspase 3、Caspase 9表达下降(P<0.01)。与常氧对照组比较,低氧+siCtrl组大鼠原代心肌细胞BCL-2表达降低,BAX、Caspase 3、Caspase 9表达升高,凋亡水平增加(P<0.01),线粒体膜电位降低,活性氧生成增加(P<0.01)。敲低AKAP1后,与低氧+siCtrl组比较,低氧+siAKAP1组细胞BCL-2表达降低,BAX、Caspase 3、Caspase 9表达升高,凋亡水平增加(P<0.01),线粒体膜电位降低,活性氧生成增加(P<0.01)。过表达AKAP1后,与低氧+Ad-Ctrl组比较,低氧+Ad-AKAP1组细胞BCL-2表达升高,BAX、Caspase 3、Caspase 9表达降低(P<0.05),凋亡水平降低(P<0.01),线粒体膜电位增强,活性氧水平降低(P<0.01)。结论高原低压低氧条件下心肌细胞AKAP1下调,可能导致线粒体膜电位降低、活性氧生成增加,引发心肌细胞凋亡,从而加重高原低压低氧心肌损伤。

激酶锚定蛋白1抑制线粒体分裂减轻肾脏缺血再灌注损伤

目的:探讨激酶锚定蛋白1(AKAP1)在肾脏缺血再灌注损伤(IRI)中的作用及机制。方法:首先构建小鼠肾脏缺血再灌注模型,夹闭双侧肾动脉缺血28 min,再灌注24 h后采血并留取肾组织,检测血清肌酐、尿素氮、病理损伤及AKAP1表达情况,其次将小鼠肾小管上皮细胞培养至第2天进行干预,缺氧过程(H)将细胞置入1%O_(2)、5%CO_(2)、37℃三气培养箱内无糖无血清依次培养3 h,复氧(R)时更换含10%胎牛血清低糖培养基正常培养6 h。观察对照组和各缺复氧(H/R)组再复氧6 h时肾小管上细胞一般形态,最后通过转染过表达AKAP1的方式检测H/R各组ATP含量,线粒体膜电位以及线粒体Mito-Red染色情况。结果:AKAP1在肾脏缺血再灌注后表达下降(P<0.05);小鼠肾小管上皮细胞在H/R处理后出现AKAP1表达下降以及线粒体功能障碍(P<0.05);AKAP1通过线粒体动力相关蛋白1调控H/R诱导线粒体损伤(P<0.05)。结论:AKAP1可以通过抑制线粒体功能障碍减轻肾脏IRI。

AKAP1在高糖诱导的足细胞线粒体分裂中的作用

目的研究A激酶锚定蛋白（AKAP1）在高糖诱导足细胞线粒体分裂中的作用及可能的信号转导通路。方法体外培养条件永生性人足细胞，完全分化并同步化处理后进行后续实验。实验分组：（1）葡萄糖浓度分为5、15、25、35mmol／L组刺激足细胞48h；（2）高糖（35mmol／L）培养基分别刺激足细胞12、24、36、48h；（3）正常对照组（5mmol／L葡萄糖）、高渗对照组（30mmol／L甘露醇＋5mmol／L葡萄糖）、高糖组（35mmol／L葡萄糖）、高糖（35mmol／L葡萄糖）＋AKAP1siRNA组。免疫荧光染色检测足细胞中AKAP1的表达和分布，Western印迹检测足细胞中AKAP1、线粒体动力相关蛋白1（dynamin related protein1，Drp1）、P-Drp1蛋白水平。Mitotracker Red染色观察各组足细胞线粒体形态，对长度、纵横比、形状系数定量分析。流式细胞术评价足细胞凋亡水平。结果与正常组比较，高糖刺激导致足细胞凋亡增加（P〈0．05），线粒体分裂增加、纵横比及形状系数降低（均P〈0．05），AKAP1蛋白表达水平、P-Drp1／Drp1以时间、浓度依赖方式增加（P〈0．05）；与高糖组比较，AKAP1siRNA转染后线粒体分裂减少，线粒体纵横比及形状系数升高（均P〈0．05），足细胞凋亡减少；AKAP1蛋白水平及P-Drp1／Drp1下降（P〈0．05）；上述各项高渗对照组与正常对照组差异均无统计学意义（均P〉0．05）。结论高糖刺激下AKAP1可能通过线粒体Drp1调控足细胞线粒体分裂，导致足细胞损伤。

LPL、GPIHBP1、apoA-Ⅴ突变在高脂血症性急性胰腺炎发病中的作用

急性胰腺炎(acute pancreatits,AP)是常见的一种急腹症,死亡率极高,其病因及发病机制尚未完全明确,是目前研究的热点.其中,高脂血症(hyperlipidemia,HL)与AP关系的研究越来越受到重视,而基因突变尤其是脂蛋白脂肪酶(lipoprotein lipase,LPL)、甘油磷酸肌醇锚定高密度脂蛋白结合蛋白1(glycosylphosphatidylinositol high density lipoprotein-binding protein1,GPIHBP1)及载脂蛋白A-Ⅴ(apolipo-proteinA-Ⅴ,apoA-Ⅴ)的基因突变对HL特别是高乳糜微粒血症及随之发生的复发性胰腺炎的影响最为显著.本文就这3个蛋白的相关基因突变在高脂血症性胰腺炎发病中的作用研究进展作一综述.

肾移植受者代谢标志物与血脂水平的相关性研究

目的分析肾移植受者血脂代谢、高脂血症、他克莫司药物代谢中共表达的基因及其与血脂水平的相关性。方法从比较毒理基因组学数据库(CTD)中筛选出共表达的基因。收集25例肾移植受者的一般资料,检测ATP结合盒亚家族A成员1(ABCA1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)、糖基磷脂酰肌醇锚定高密度脂蛋白结合蛋白1(GPIHBP1)的表达情况。对肾移植受者进行跟踪随访,收集术后1、3、6、12个月空腹血糖、糖化血红蛋白、甘油三酯、总蛋白、白蛋白、球蛋白、胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、他克莫司血药浓度,并分析受者高脂血症的发生情况。分析ABCA1、GPIHBP1、PPAR-γ与临床指标的相关性,及其与相关指标对肾移植术后高脂血症的诊断效能。结果共筛选出3个共表基因ABCA1、PPAR-γ、GPIHBP1。ABCA1与术后6个月胆固醇、术后3个月他克莫司血药浓度成正相关,与术后3个月空腹血糖呈负相关(均为P<0.05);GPIHBP1与术前胆固醇、术前甘油三酯呈负相关,与术后3个月他克莫司血药浓度呈正相关(均为P<0.05)。PPAR-γ与术前球蛋白、术前低密度脂蛋白呈负相关(均为P<0.05)。ABCA1、GPIHBP1、PPAR-γ联合术前球蛋白及术后1、6个月血糖水平诊断肾移植术后高甘油三酯血症的效果较好(AUC=0.900)。ABCA1、GPIHBP1、PPAR-γ联合术后1、6个月他克莫司血药浓度及术后6个月血糖水平诊断肾移植术后高胆固醇血症的效果较好(AUC=0.931)。结论ABCA1、GPIHBP1、PPAR-γ与肾移植术后血脂、他克莫司血药浓度等指标存在不同程度的相关关系,但用于预测肾移植术后高脂血症尚无确切依据。提升机体免疫力、规范的血糖管理可能是控制高脂血症的有益因素。

基于TRPV1探讨黄五甘附膏治疗膝骨关节炎外周炎性痛敏的作用机制

目的:观察黄五甘附膏对阳虚寒凝证膝骨关节炎(KOA)大鼠滑膜组织瞬时受体电位锚蛋白1(TRPV1)受体表达、巨噬细胞极化及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路调控作用,探讨其缓解KOA外周炎性痛敏的作用机制。方法:48只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、黄五甘附膏高、中、低剂量组(9.3、4.65、2.325 g·kg^(-1))、塞来昔布组(208.2 mg·kg^(-1)),采用气候箱加游泳2周联合膝关节腔注射碘乙酸钠(MIA)建立阳虚寒凝证KOA大鼠模型,连续给药4周,观察各组大鼠一般情况,记录机械刺激缩足痛阈值(PWT)和关节直径,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、神经生长因子(NGF)和降钙素基因相关肽(CGRP)炎性因子表达;苏木素-伊红(HE)染色观察膝关节滑膜组织病理学改变;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠膝关节滑膜组织TRPV1、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白表达水平;免疫荧光(IF)测量评估M1/M2巨噬细胞极化情况。结果:与空白组比较,模型组大鼠整体精神状态较差,自主活动减少,体质量偏低,关节直径增加,X射线提示关节边缘骨赘增生,关节面明显粗糙,关节腔间隙明显变窄,大鼠PWT显著降低(P<0.01),大鼠血清IL-1β、TNF-α、CGRP、NGF含量均显著升高(P<0.01),滑膜Krenn评分显著升高(P<0.01),TRPV1、p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白表达显著升高(P<0.01),M1巨噬细胞占比和M1/M2显著升高(P<0.01),M2巨噬细胞占比显著降低(P<0.01);与模型组比较,黄五甘附膏低、中、高剂量体质量有不同程度上升(P<0.05,P<0.01),黄五甘附膏高剂量组和塞来昔布组大鼠膝关节直径减少(P<0.01),黄五甘附膏高、中剂量组PWT恢复较为明显(P<0.05),各给药组大鼠血清IL-1β和CGRP的含量都显著降低(P<0.01),塞来昔布组和黄五甘附膏高剂量组大鼠血清TNF-α含量明显降低(P<0.05),黄五甘附膏中剂量组大鼠血清NGF含量明显降低(P<0.05),黄五甘附膏高剂量组滑膜Krenn评分明显降低(P<0.05),黄五甘附膏各剂量组大鼠滑膜组织中TRPV1和p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白表达都显著下降(P<0.01),塞来昔布组和黄五甘附膏各剂量组滑膜组织中M1巨噬细胞占比均降低(P<0.01),黄五甘附膏高剂量组M2巨噬细胞占比升高(P<0.05),黄五甘附膏中、高剂量M1/M2降低(P<0.05)。结论:黄五甘附膏可通过调控巨噬细胞极化减轻KOA炎症反应,减少炎性疼痛介质释放,同时还降低了TRPV1蛋白表达,其机制可能与p38 MAPK信号通路有关,从而达到改善KOA外周痛敏的效应。

血清GPAA1、SF、OPN与儿童急性淋巴细胞白血病危险度的关系及对血栓发生风险的评估效能研究

目的:分析血清糖基磷脂酰肌醇锚附着蛋白1(GPAA1)、铁蛋白(SF)、骨桥蛋白(OPN)与儿童急性淋巴细胞白血病危险度的关系及对血栓发生风险的评估效能。方法:选择我院自2017年1月至2022年12月接诊的112例急性淋巴细胞白血病患儿作为观察组,另选112例性别、年龄与观察组相匹配的健康体检儿童作为对照组。检测两组血清GPAA1、SF、OPN表达水平,分析不同危险度的急性淋巴细胞白血病患儿血清GPAA1、SF、OPN表达水平的差异性,观察急性淋巴细胞白血病患儿的血栓发生情况,通过受试者工作特征曲线(ROC)下面积(AUC)评价血清GPAA1、SF、OPN预测急性淋巴细胞白血病患儿发生血栓的效能。结果:观察组血清GPAA1、SF、OPN表达水平均高于对照组(P<0.05);在低危、中危和高危的急性淋巴细胞白血病患儿中,血清GPAA1、SF、OPN表达水平有差异(P<0.05);经Spearman相关性分析,血清GPAA1、SF、OPN表达水平与儿童急性淋巴细胞白血病危险度呈正相关(P<0.05);在112例急性淋巴细胞白血病患儿中,发生血栓12例,占10.71%;经多因素Logistic回归分析,血清GPAA1、SF、OPN均是急性淋巴细胞白血病患儿发生血栓的独立预测因素(P<0.05);经ROC曲线分析,血清GPAA1、SF联合OPN预测急性淋巴细胞白血病患儿发生血栓的AUC为0.901。结论:血清GPAA1、SF、OPN与儿童急性淋巴细胞白血病危险度密切相关,联合预测患儿发生血栓的效能较好,对此病的诊治具有重要指导意义。

自身抗体与高甘油三酯血症

部分重度高甘油三酯血症的病因与自身抗体相关,目前的研究显示,脂蛋白脂酶、糖基磷脂酰肌醇高密度脂蛋白结合蛋白1和载脂蛋白C-Ⅱ这3种参与脂代谢的重要功能蛋白的自身抗体均可导致高甘油三酯血症。本文拟对自身抗体诱发的高甘油三酯血症进行综述,探讨其诊治策略。