神经生长因子在康复医学中的应用(Ⅰ)——白眉蝮蛇乌苏里亚种蛇毒神经生长因子的分离纯化与鉴定

本研究结果表明:白眉蝮蛇乌苏里亚种蛇毒中含有神经生长因子(NGF),分离纯化该种NGF是可行的。经SDS-聚丙酰胺凝胶电泳分析,NGF呈一条区带。它在20ng/ml浓度下,可刺激大鼠胚脑组织的生长。用电泳法测得NGF的分子量为45000。

白细胞-内皮细胞的体外粘附反应及眼镜蛇毒的影响

F-MLP与白三烯B_4能增加中性多形核白细胞(PMNL)对人脐静脉内皮细胞的粘附率。白三烯B_4处理的PMNL刺激内皮细胞产生6-酮-PGF_1a,F-MLP或自三烯B_4处理的PMNL促进内皮细胞释放von Willebrand因子。眼镜蛇毒抑制F-MLP或白三烯B_4对PMNL粘附的刺激作用,但这种PMNL仍能促进内皮细胞的花生四烯酸代谢与von Willebrand因子释放。而用F-MLP、白三烯B_4和/或眼镜蛇毒预先处理内皮细胞,不影响白细胞的粘附,也不影响内皮细胞释放6-酮-PGF_1a与von Willebrand因子。这些体外试验结果表明,F-MLP与白三烯B_4在刺激PMNL-内皮细胞粘附中主要的靶细胞是PMNL而不是内皮细胞。PMNL在没有粘附于内皮细胞的情况下也可能通过释放某些介质影响内皮细胞的功能。

白眉蝮蛇毒几种有效成分研究的新进展

近年来我国东北地区长白山白眉蝮蛇毒的应用研究受到了科学工作者的重视，本文对白眉蝮蛇毒的几种有效成分近十年来实验研究方面进行综述。

乌苏里蝮蛇采毒周期对排毒量的影响

目的 探讨乌苏里蝮蛇 (Gloydiusussuriensis Emelianov)采毒周期与排毒量的关系。 方法 将实验的蛇分成 6个组 ,全部采一次毒后分别测定采毒间隔周期为 5、 1 0、 1 5、 2 0、 2 5、 3 0天的排毒量 ;测定 5～ 1 0月份 ,周期为 3 0天的排毒量 ;并测定采毒频次的增加对排毒量、含水率和蝮蛇死亡率的影响及测定体重对排毒量的影响。 结果 5、 6、 9、 1 0月份可 2 0天为一个采毒周期 ,在月平均温度较高的 7、8月份 ,1 5天为一个采毒周期 ,排毒量接近或超过该种的平均排毒量 1 1 .4mg。

五步蛇毒蛋白C激活物对人脐静脉血管内皮细胞组织因子表达的影响

目的观察五步蛇毒蛋白C激活物(PCA)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)的保护作用,并分析其对组织因子(TF)表达的影响。方法常规培养HUVEC,实验分为空白对照组、脂多糖(LPS)组、PCA(0.625、1.25、2.50μg·mL^(-1))组和PCA+LPS组。MTT法检测HUVEC活性,ELISA检测HUVEC培养上清中TF分泌量,免疫荧光染色检测核转录因子(NF)-κB是否被激活-核转运。结果 PCA对HUVEC活性和形态无显著影响(P>0.05)。与空白对照组,LPS组细胞活性显著下降(P<0.01);而LPS+PCA组细胞活性显著高于LPS组(P<0.05)。LPS组TF表达量和NF-κB表达均显著高于空白对照组(P<0.01);LPS+PCA组与LPS组比较TF表达量和NF-κB表达降低(P<0.01)。结论 PCA可降低HUVEC分泌TF,减少LPS对HUVEC的损伤作用,其可能与抑制NF-κB通路的活化有关。

降纤酶关键质量属性研究

目的:通过对降纤酶鉴别、纯度、分子量、等电点、N端序列、比活性6个方面关键质量属性的表征,为后续标准提高提供依据。方法:采用SDS-PAGE电泳法分析不同来源的蛇毒原料;采用紫外-可见分光光度法、SDS-PAGE电泳法、体积排阻色谱和反相超高效液相色谱法、基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱法、等电聚焦电泳法、“edman”N端测序法以及凝固法和生色底物法对不同企业提供的降纤酶进行测定和分析。结果:不同来源的尖吻蝮蛇蛇毒蛋白组成基本一致,尖吻蝮蛇蛇毒和白眉蝮蛇蛇毒蛋白质组成差异较大。降纤酶对苯甲酰-L-精氨酸甲酯盐酸盐最大吸收波长为247 nm,对苯甲酰-L-精氨酸乙酯盐酸盐最大吸收波长为254 nm,但对苯甲酰-DL-精氨酰对硝基苯胺无水解作用。降纤酶能完全水解纤维蛋白原α肽链,活性受到苯甲基磺酰氟、二硫苏糖醇和对氨基苯甲醚的抑制。尺寸排阻高效液相色谱法降纤酶纯度测定结果高于反向超高效液相色谱法,前者为99.9%,后者为95.4%。SDS-PAGE电泳法测降纤酶完整分子量受标准品线性范围的影响,采用10~250 kDa范围的标准品点拟合,降纤酶完整分子量为(42.1±1.6)kDa;采用10~100 kDa范围的标准品点拟合,降纤酶分子量为(38.4±1.3)kDa。MALDI-TOF-MS法测得降纤酶完整分子量为(33.3±0.5)kDa,脱糖基分子量为(28.8±0.02)kDa。降纤酶pI值在3.0~4.0之间,N端序列为VIGGVECDINEHRFL。凝固法和生色底物法测比活性相关性显著(P<0.01),但凝固法结果高于生色底物法。结论:不同企业提供的降纤酶的6个方面的关键质量属性基本一致。现行降纤酶药品国家标准中鉴别、纯度、分子量等项目有待进一步增修订。