培养基种类对花生毛状根株系生物量和白藜芦醇含量的影响

旨在研究不同培养基对花生毛状根株系生物量和白藜芦醇含量的影响。利用发根农杆菌R1601侵染花生的叶片,诱导毛状根,利用PCR技术检测毛状根。使用5种培养基(1/2MS、MS、MS+500 mg/L羧苄西林钠、B5和N6)分别培养同一个株系的花生毛状根,4周后利用高效液相色谱法(HPLC)测量毛状根生物量和白藜芦醇含量。结果显示,不同培养基对花生毛状根株系生物量的积累有显著差异,1/2MS培养基和MS培养基有利于花生毛状根株系生物量的积累。不同培养基对花生毛状根株系中白藜芦醇的含量有显著差异,B5培养基和N6培养基有利于花生毛状根株系中白藜芦醇的积累。

发根农杆菌诱导花生发根的条件优化

以花生无菌苗的不同部位为外植体,用发根农杆菌(Agrobacterium rhizogene)GIM1.141进行侵染,诱导发根,以为花生的转基因研究和花生发根提取白藜芦醇奠定基础。通过对重悬菌液乙酰丁香酮的添加、不同外植体、菌液浸泡时间以及发根培养基4种因素的研究,优化发根农杆菌的转化体系。结果表明,花生的叶片、子叶、下胚轴均能被GIM1.141诱导出发根,相同诱导条件下,各外植体的发根诱导率顺序为叶片>子叶>下胚轴;适宜的菌液浸泡时间为10min;附加乙酰丁香酮(100μmol/L),发根诱导率明显提高,花生叶片、子叶、下胚轴的最高发根诱导率分别为87.29%、75.8%、23.33%,因此,花生发根诱导的合适条件为以叶片和子叶为外植体,在添加乙酰丁香酮(100μmol/L)的菌液中浸泡10min诱导出来的发根经过除菌,能在MSB5培养基上自主生长。

发根农杆菌介导的花生遗传转化体系的建立

[目的]为花生的转基因研究和白芦藜醇的生物技术生产奠定基础。[方法]利用发根农杆菌R1601分别侵染花生的子叶、叶片和茎段,诱导毛状根;利用PCR技术检测毛状根。[结果]叶片和茎段在发根农杆菌R1601侵染后产生毛状根,但叶片诱导率较高,其诱导率达65.6%,更适合作为转化外植体。毛状根除菌后,能在MS培养基上自主生长。PCR扩增表明,T-DNA序列整合进花生的基因组中。[结论]建立了发根农杆菌介导的花生遗传转化体系。

发根农杆菌菌株和花生品种对发根诱导率的影响

试验以花育20、花育45、鲁花11无菌花生子叶为材料,采用3×3双因子设计,研究3株发根农杆菌菌株和花生品种对花生发根诱导率的影响。结果表明:发根农杆菌和花生品种均显著影响发根诱导率。花育45的发根诱导率最高,为93.7%,其适宜菌株为A4;花育20的发根诱导率为89.2%,适宜菌株为ATCC15834;鲁花11的发根诱导率为73.4%,适宜菌株为GIM1.141。

不同发根农杆菌诱导花生发根研究

利用5种发根农杆菌侵染不同花生外植体,对比其发根诱导率,分析寻找利于花生转化的外植体、花生品种及发根农杆菌。结果表明,农杆菌94022诱导发根率较其它发根农杆菌高;后期继代培养中子叶诱导的发根易于培养,存活率高,生长状态好;在用培养后的子叶为外植体时,花育20较其它品种发根诱导率高。

花生毛状根的高频诱导及NAA和2,4-D对花生毛状根生长和白藜芦醇含量的影响

为获得高诱导率的花生毛状根诱导条件,同时探究不同浓度的萘乙酸(NAA)和2,4二氯苯氧乙酸(2,4-D)对花生毛状根生长和白藜芦醇含量的影响。研究了不同发根农杆菌菌株和不同乙酰丁香酮浓度对花生毛状根诱导率的影响;以固体MS培养基为对照,分别添加不同浓度的NAA和2,4-D,培养花生毛状根,探究对毛状根生长和白藜芦醇含量的影响。实验显示花生毛状根诱导率可达到92.3%。花生毛状根随着NAA的浓度升高,生物量同对照相比较无显著差异,各浓度的NAA之间也无明显差异;与对照相比较,白藜芦醇含量显著增高,呈显著差异,但各浓度的NAA之间白藜芦醇的含量无明显差异。添加2,4-D形成的生物量明显偏低,白藜芦醇含量与添加NAA组无差别。以A600为0.8的发根农杆菌R1601菌液侵染花生叶片,在含50μmol/L乙酰丁香酮的MS培养基培养时,可以高效的诱导得到花生毛状根;NAA可以作为一种外源激素提高花生毛状根中白藜芦醇的含量。