HPLC多波长切换指纹图谱结合化学计量学研究白术土炒前后成分变化规律

目的 建立测定白术、土白术水溶性和脂溶性成分的高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)多波长切换指纹图谱,结合化学计量学研究白术土炒前后成分变化规律。方法 建立白术、土白术水溶性及脂溶性成分的HPLC-DAD多波长切换指纹图谱测定方法,测定17批白术和17批土白术的HPLC指纹图谱,采用相似度评价、聚类分析、OPLS-DA分析进行统计分析。结果 白术指纹图谱中共标定9个共有峰,土白术指纹图谱中共标定10个共有峰。指认了新绿原酸、绿原酸、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ及苍术酮6个成分,土炒后1号峰、4号峰(白术内酯Ⅲ)、8号峰(白术内酯Ⅱ)峰面积增加,2号峰(新绿原酸)、3号峰(绿原酸)、5号峰、6号峰、7号峰、9号峰(白术内酯Ⅰ)、10号峰(苍术酮)土炒后峰面积均降低。结论 所建立指纹图谱方法能够系统地分析白术土炒前后化学成分的变化规律,可为进一步规范白术土炒工艺,制定土白术专属性质量标准,研究土白术炮制原理提供实验基础。

白术炮制规格及其化学成分与药理作用研究进展

白术是菊科多年生草本植物,药典收载白术和麸炒白术两种饮片规格,主要有效成分为挥发油、内酯、多糖、黄酮和苷类等。主要作用于胃肠道、免疫与神经系统,发挥调节胃肠道、抗肿瘤、抗炎护肝和保护神经等多种药理作用。本文对白术的古今炮制规格及其化学成分和药理作用进行综述,以期为白术的临床应用提供参考。

白术多糖对动物免疫调节作用研究进展

随着集约化养殖规模的快速发展,畜禽疾病呈现传播快、易流行等特点,并且免疫抑制现象普遍存在,使我国畜禽疫病防控面临较大压力。白术是菊科植物白术的干燥根茎,是一味常用的补益类中药,现代医学研究表明,白术多糖是其主要活性成分之一。文章综述了近年来白术多糖在动物免疫方面的研究进展,为白术深入研究和临床开发应用提供参考。

高效液相色谱法测定白术中白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的含量

本实验建立了高效液相色谱技术(HPLC)测定白术中白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的含量。采用Hypersil GOLD(250 mm×4.6 mm,5um),以乙腈为流动相A、以0.1%磷酸溶液为流动相B进行梯度洗脱,流速1.0 mL/min,白术内酯Ⅰ检测波长为276 nm,白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ检测波长为220 nm,柱温为35℃,进样体积为20μL。白术内酯Ⅰ在0.10~1.60μg范围内线性关系良好,平均回收率为99.29%(RSD=2.25%);白术内酯Ⅱ在0.10~1.60μg范围内线性关系良好,平均回收率为100.07%(RSD=2.59%);白术内酯Ⅲ在0.10~1.60μg范围内线性关系良好,平均回收率为100.43%(RSD=2.20%)。结果表明该方法分离度好、准确度高、重现性好,可测定白术中白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的含量。

白术的法象药理及其临床意义

“以象释药”是中医象思维在中药学研究与应用中的极好体现。白术为“后天培土圣药”,但在《神农本草经》等本草经典中,古人常以之治疗痃癖、结肿、山岚瘴气等诸多疑难怪证。对此,按药性常论往往难以理解。但若以“法象药理”“象性合参”的角度,这些功效应用可以从白术独特的“药象”中找到答案。古代本草著作对于白术特殊药象多有详尽阐释,称之为“盘结丑怪,有兽之形”,以及“桴蓟”“多刺有风象”等。笔者结合传统本草和现代药学研究,将白术的药象特点概括为:叶裂羽刺,团根瘤皱,肉白辛香。而这些药象均与其“逐风水结肿”“痃癖气块”“主大风在身面”等特殊药效密切相关。正如徐灵胎所言:“因形以求理,则其效可知矣。”由此认识白术的“象-效”相关性,可帮助我们理解古人的药学智慧,弘扬传统本草理论的现代应用价值。

饲料中添加白术提取物对日本沼虾生长、健康和抗病力的影响

文章研究了饲料中添加不同水平的白术提取物(Extraction of Atractylodes macrocephala Koidz,EAMK)对日本沼虾(Macrobrachium nipponense)生产性能、器官指数、血液生化指标、抗氧化能力、消化系统健康和抗病力的影响。实验以初始体重为(0.21±0.05)g的日本沼虾为研究对象,设置6个饲料处理,白术提取物添加量为0、100、200、400、600和1200 mg/kg(Control、A100、A200、A400、A600和A1200)。每个饲料处理设6个重复,每个养殖缸放入60尾虾,实验周期为75d,每天记录采食量。养殖实验期间监测水体温度为(20±3)℃,pH为7.8—8.2,亚硝酸盐为0.16—0.2 mg/L,氨氮为0.02—0.1 mg/L,溶氧>6.0 mg/L。在实验结束后,分析日本沼虾生长性能、血清生化指标、肠道消化酶和免疫指标及肝胰腺抗氧化能力,观察日本沼虾的组织结构,用嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)进行攻毒并记录存活率。结果表明:饲料中添加200 mg/kg的白术提取物可以显著提高日本沼虾的增重率(WGR)和特定生长率(SGR),并显著降低饲料系数(FC;P<0.05)。各处理组间的肝体比、出肉率和体成分均无显著性差异(P>0.05);A100组的血清葡萄糖(Glu)含量显著高于对照组(P<0.05),并能显著降低谷丙转氨酶(ALT)活性(P<0.05);各白术提取物处理组的血清甘油三酯(TG)和总胆固醇含量(TC)均显著低于对照组(P<0.05);A400组的肝胰腺GSH-Px活性显著高于A100组和对照组(P<0.05),A600组的肝胰腺CAT活性显著高于其他各组(P<0.05),A200和400组的肠道iNOS的活性显著高于对照组(P<0.05);A400组的日本沼虾肠绒毛显著高于对照组(P<0.05),并且减轻了肝细胞的空泡化,促进了鳃的完整性;A100处理组的嗜水气单胞菌攻毒后存活率显著高于对照组(P<0.05)。综上所述,白术提取物可以提高日本沼虾的生长性能和抗氧化能力,提高抗病力,在日本沼虾饲料中适宜添加量为100—400 mg/kg。

白术多糖提取分离工艺研究

目的优选白术多糖的提取分离工艺。方法比较氯仿-正丁醇Sevage法去蛋白与不去蛋白白术多糖含量。以吸附率和解吸率为考察指标,优选AB-8型、D101型、LX-38型3种大孔吸附树脂。通过吸附时间、解吸时间、上样流速、上样浓度、洗脱剂用量、洗脱剂浓度和洗脱流速研究AB-8型大孔树脂纯化白术多糖工艺。结果未去蛋白的多糖含量为(5.582±1.4480)%、(5.407±0.7668)%、(5.155±0.7214)%,Sevage法去蛋白后的多糖含量为(4.658±0.1558)%、(4.247±0.0742)%、(4.610±0.1734)%。AB-8型大孔树脂较其他两种树脂,其吸附率及解吸率可达(18.40±0.0300)%,(91.73±0.0781)%,纯化工艺为吸附时间3 h、解吸时间3 h、上样流速1 BV/h、上样浓度0.75 mg/mL、洗脱剂用量4 BV、洗脱剂浓度15%乙醇、洗脱流速3 BV/h。结论本试验为白术多糖的提取分离提供了试验依据,为白术多糖的工业化生产提供了参考。

白术-肉苁蓉治疗便秘的网络药理学分析及试验验证

旨在通过网络药理学和动物试验探究白术-肉苁蓉治疗便秘的效果和机制。通过TCMSP数据库获得白术-肉苁蓉成分及对应的靶点蛋白,借助GeneCards、OMIM等数据库得到便秘相关靶点。将基因整理导入UniProt数据库后利用Venny2.1.0、Cytoscape3.7.2和STRING绘制韦恩图及蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,并使用CentiScaPe 2.2插件进行分析。再通过DAVID数据库进行生物信息学GO分析及KEGG信号通路富集分析。通过AutodockTools和PyMOL等软件对部分核心靶点与潜在靶点较多的成分进行分子对接验证。将40只小鼠随机分为空白组(6只)和盐酸洛哌丁胺组(34只),分别用蒸馏水和10.0 mg·kg^(-1)盐酸洛哌丁胺灌胃。造模成功后,将30只便秘小鼠均分为模型组、阳性对照组和高、中、低剂量药物组。空白组和模型组蒸馏水灌胃,阳性对照组10.0 mg·kg^(-1)枸橼酸莫沙必利灌胃,高、中、低剂量药物组分别灌胃4.8、2.4、1.2 g·kg^(-1)的白术-肉苁蓉混悬液治疗,每日1次,持续7 d。7 d后进行排便和小肠运动试验。结果发现,PTGS 2为连接度最高的靶点基因,共筛选出AKT1、TNF和IL-6等19个白术-肉苁蓉治疗便秘的核心靶点,KEGG富集分析表明,脂质和动脉粥样硬化及乙型肝炎等通路较为关键。分子对接结果显示,白术-肉苁蓉潜在靶点较多的成分与便秘核心靶点结合较好。动物试验表明,与模型组比较,中、高剂量药物组首粒黑便时间显著缩短,小肠推进率显著增高。综上,白术-肉苁蓉可改善慢传输型便秘,多种活性成分可能通过PTGS2、AKT1、TNF和IL-6等关键靶点,调节多条信号通路治疗便秘。

基于网络药理学及转录组分析的“白术-苍术”药对防治高脂血症作用机制研究

[目的]明确“白术-苍术”药对对高脂血症(hyperlipidemia,HLP)的防治作用,结合网络药理学分析,初步阐释其作用机制。[方法]采用高脂饲料喂养复制HLP大鼠模型,同时给予不同剂量的“白术-苍术”药对进行干预;实验期末比较各组大鼠血脂水平并观察肝组织脂质沉积情况。采用网络药理学预测“白术-苍术”药对治疗HLP的潜在活性成分及作用靶点,并进一步进行实验验证。[结果]“白术-苍术”药对对高脂饮食诱导的HLP具有良好的防治作用。网络药理学分析发现,“白术-苍术”所含3β-醋酸基白术酮、汉黄芩素、3β-乙酰氧基苍术酮等成分为其治疗HLP的潜在活性成分,过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferators-activated receptors,PPAR)信号通路相关PPARγ、脂肪酸结合蛋白4(fatty acid binding protein 4,FABP4)为其潜在调节通路和作用靶点。动物实验结果表明,“白术-苍术”能显著上调HLP模型大鼠PPARγ表达。[结论]“白术-苍术”药对防治高脂饮食诱导的HLP的作用与激活PPARγ信号通路有关。

白术高效液相色谱指纹图谱及多指标成分含量测定研究

目的 建立白术高效液相色谱(HPLC)指纹图谱和多成分含量的测定方法,为其质量控制提供参考。方法 采用高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)多波长切换法建立白术指纹图谱,应用相似度评价、聚类分析、主成分分析和偏最小二乘判别分析法进行化学计量学研究,对其差异性成分白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ和苍术酮进行含量测定。结果 建立了白术HPLC指纹图谱,共标定了9个共有峰,并鉴定出其中4个成分;37批样品与对照图谱相似度为0.539~0.996;不同产地、不同批次样品质量存在较大差异,白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ、苍术酮和未知成分峰9是影响白术质量的重要因素。结论 该研究建立的指纹图谱结合多成分同时测定的方法简便、稳定、准确、可靠,可为白术的整体质量评价和质量标准的提升提供参考,为其药效物质基础研究及其相关复方研究等奠定基础。

白术根腐病病原菌分离鉴定、生物学特性及植物源农药筛选

【目的】明确河南信阳地区白术根腐病病原菌种属,研究其生物学特性并筛选可用于防控其病原菌的植物源农药。【方法】从种植区采集病株,室内分离病原菌并纯化,利用形态学和多基因联合分析对病原菌进行鉴定,并对病原菌的生物学特性进行研究,利用菌丝生长速率法评价3种植物源杀菌剂对其菌落的抑制作用。【结果】该病原菌菌丝白色,孢子呈卵圆形,两端稍尖,大型分生孢子3~5隔,大小为(7~10)μm×(3~4)μm,小型分生孢子2隔或无格,大小为(3~5)μm×(1~2)μm,多基因联合分析表明该病原菌与藤仓镰刀菌(Fusarium fujikuroi)同源性高,结合形态学特征与分子生物学分析,将信阳白术根腐病病原菌鉴定为藤仓镰刀菌(Fusarium fujikuroi),这是藤仓镰刀菌引起白术根腐病的首次报道。生物学特性研究显示,该病原菌最适培养条件为温度28℃、pH为7,最适生长碳源为蔗糖,最适生长氮源为硝酸钾。3种植物源杀菌剂中,0.3%丁子香酚可溶液剂的EC50为6.906 mg·L^(-1),高于其他供试药剂,对病原菌的毒力最强。【结论】河南信阳地区白术根腐病病原菌为藤仓镰刀菌,该研究结果为信阳地区白术根腐病科学防控提供了依据。

白术内酯Ⅲ减轻脑梗死模型大鼠神经功能损伤

目的探究白术内酯Ⅲ(AMLⅢ)对脑梗死大鼠神经功能损伤的影响。方法将大鼠随机分为假手术组(sham)、模型组(model,改良Longa线栓法制备大鼠脑梗死模型)、白术内酯Ⅲ低和高剂量组(AMLⅢ-L、AMLⅢ-H)、白术内酯Ⅲ高剂量+EX527(SIRT1抑制剂)组(AMLⅢ-H-EX527)。Zea-Longa评分法评估神经功能,ELISA检测血清肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素(IL-6、IL-1β)水平;试剂盒检测脑组织超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、过氧化氢酶(CAT)活性;HE染色观察海马组织病理,TTC染色法检测脑梗死面积,TUNEL染色法检测脑细胞凋亡率;Western blot检测脑组织B淋巴细胞瘤(Bcl-2)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)、SIRT1、Nrf2蛋白表达。结果白术内酯Ⅲ干预后可减轻大鼠海马神经组织损伤,降低神经功能评分、血清TNF-α、IL-6和IL-1β水平、凋亡率、脑梗死面积、MDA水平、Bax蛋白表达,提高SOD和CAT活性、SIRT1、Nrf2、Bcl-2蛋白表达水平(P<0.05);EX527可减轻白术内酯Ⅲ对脑梗死大鼠神经功能的保护作用。结论白术内酯Ⅲ可减轻脑梗死模型大鼠的神经功能损伤。

白术多糖对脂多糖处理下雏鹅十二指肠肠道屏障功能的调节作用

本试验旨在探索白术多糖(PAMK)对脂多糖(LPS)诱导的雏鹅十二指肠肠道屏障损伤的调节作用。将240只1日龄雏鹅随机分为4组(对照组、PAMK组、LPS组、PAMK+LPS组),每组6个重复,每个重复10只雏鹅。对照组和LPS组饲喂基础饲粮,PAMK组和PAMK+LPS组饲喂含有400 mg/kg PAMK的基础饲粮。对照组和PAMK组于21日龄时腹腔注射0.5 mL生理盐水,LPS组和PAMK+LPS组腹腔注射5 mg/kg BW的LPS注射液。腹腔注射后12 h采集雏鹅的血清、十二指肠样品。通过检测肠绒毛形态、血清D-乳酸含量、血清二胺氧化酶(DAO)活性、十二指肠紧密连接和黏附连接相关指标来评估肠道机械屏障功能;通过检测十二指肠杯状细胞数量和黏蛋白相关指标评估肠道化学屏障功能;通过检测十二指肠炎症通路和炎性细胞因子相关指标评估肠道免疫屏障功能。结果显示:与对照组相比,PAMK组十二指肠的绒毛高度、绒隐比、隐窝深度均无显著变化(P>0.05);血清中D-乳酸含量和DAO活性无显著变化(P>0.05);十二指肠组织中闭合蛋白(Occludin)、闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、闭锁小带蛋白-2(ZO-2)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-连环蛋白(α-catenin)、β-连环蛋白(β-catenin)、连接黏附分子(JAM)、肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的基因相对表达量无显著变化(P>0.05);十二指肠的杯状细胞数量无显著变化(P>0.05);十二指肠组织中黏蛋白-1(MUC-1)和黏蛋白-2(MUC-2)的基因相对表达量无显著变化(P>0.05);十二指肠组织中Toll样受体4(TLR4)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、半胱天冬酶-1(Caspase-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)基因相对表达量和TLR4、髓样分化因子88(MyD88)、核因子-κB(NF-κB)、NLRP3、Caspase-1的蛋白表达水平无显著变化(P>0.05)。与对照组相比,LPS显著降低了十二指肠的绒毛高度和绒隐比(P<0.05),并显著增加了隐窝深度(P<0.05);显著增加了血清中DAO活性(P<0.05);显著降低了十二指肠组织中β-catenin、JAM的基因相对表达量(P<0.05);显著减少了十二指肠的杯状细胞数量(P<0.05);显著降低了十二指肠组织中MUC-2基因相对表达量(P<0.05);显著提高了十二指肠组织中TLR4、NLRP3、Caspase-1、TNF-α、IL-6的基因相对表达量和MyD88、Caspase-1的蛋白表达水平(P<0.05)。与对照组相比,PAMK显著增加了LPS处理下十二指肠的绒毛高度(P<0.05),显著减少了隐窝深度(P<0.05),显著增加了绒隐比(P<0.05);显著减少血清中D-乳酸含量(P<0.05);显著增加十二指肠组织中Occludin、β-catenin、JAM基因相对表达量(P<0.05);显著增加了LPS处理下十二指肠中的杯状细胞数量(P<0.05);显著增加了十二指肠组织中MUC-2的基因相对表达量(P<0.05);显著降低了LPS处理下十二指肠组织中TLR4、NLRP3、Caspase-1、TNF-α、IL-6基因相对表达量和MyD88、Caspase-1的蛋白表达水平(P<0.05)。综上所述,LPS可以破坏雏鹅十二指肠肠道的屏障功能,PAMK具有缓解LPS造成的十二指肠肠道屏障损伤的作用。

炒制加工对白术籽蛋白氨基酸营养价值及挥发性成分的影响

通过对白术籽蛋白质氨基酸营养价值和挥发性成分及其炒制前后的变化研究,为白术药材资源综合利用提供理论支持。利用全自动氨基酸分析仪、紫外-可见分光光度计、气相色谱质谱联用仪(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)分别对炒制前后白术籽的可溶性蛋白、氨基酸、挥发性成分进行测定,通过NIST谱库检索对目标化合物进行解析。白术籽中氨基酸种类齐全,生品和炒制品均含有17种氨基酸,总量分别为5.29%和5.90%;甜味和鲜味氨基酸总量与苦味氨基酸总量的比值为1.98和1.95。蛋白质营养价值高,其中必需氨基酸含量与氨基酸总量的比值、必需氨基酸含量与非必需氨基酸含量比值都与理想蛋白标准相接近,必需氨基酸比值系数分别为80.41和77.76,必需氨基酸指数均接近于1。挥发性香气成分丰富,40个挥发性成分包括共有成分12个,生品和炒制品的特有成分各为15个和37个;以萜类化合物为主,以D-柠檬烯为代表的单萜类化合物占比较大。炒制可增加白术籽中药效氨基酸、必需氨基酸以及具有呈味能力的鲜味氨基酸含量,进而提高蛋白质营养价值,促使挥发性成分的类别和数量更加丰富。作为白术药材非药用部位,白术籽生品和炒制品均具有较高的食用价值,炒制加工可进一步改善口感和提升风味;本文研究可为白术非药用部位的资源化利用及高附加值产品创造提供理论依据。

水杨酸对高温胁迫下白术生理特性的影响

为筛选出适宜缓解高温胁迫伤害的最佳SA浓度。研究喷施0.5,1.0和2.0 mmol·L^(-1)3种不同浓度的SA溶液,同时进行不同程度的高温处理后,测定盆栽白术苗叶片的叶绿素荧光参数、根系扫描参数及根系活力,研究水杨酸(SA)对高温胁迫下白术种苗的缓解效应。结果表明,对叶绿素荧光测定的Fv′/Fm′、ΦPSⅡ、NPQ三个参数,高温胁迫下CK组NPQ值均大于处理组,而CK组的Fv′/Fm′和ΦPSⅡ值均小于处理组,且与对照组相比喷施0.5 mmol·L^(-1)的SA溶液效果最为显著。喷施0.5 mmol·L^(-1)SA对高温胁迫下白术种苗根系表面积能起到促进作用,喷施1.0 mmol·L^(-1)SA的促进作用在根长、投影面积及平均直径方面的作用较显著。同时喷施1.0 mmol·L^(-1) SA溶液的白术种苗根系活力的数值最高。综上,0.5 mmol·L^(-1)的SA能缓解高温对白术苗伤害的能力最强。

不同产地白术挥发性成分HS-SPME/GC-MS分析

目的分析不同产地白术挥发性成分差异,为白术产地溯源、加工和品质评价提供科学依据。方法采用顶空固相微萃取技术(HS-SPME)结合气相质谱联用技术(GC-MS),联合层次聚类分析(HCA)、主成分分析(PCA)和偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)法对不同产地11批白术挥发性成分进行差异分析。结果从白术样品中共鉴定出30种挥发性成分,其中共有成分17种,占总挥发性成分含量的88.31%以上;不同产地白术8种挥发性成分含量存在显著差异(VIP>1,P<0.05),其中包含4种品质挥发性成分;浙江和河北白术特征品质挥发性成分为苍术酮,湖南白术特征品质挥发性成分为莪术烯、α-桉叶醇和大根香叶烯B,安徽和重庆白术特征品质挥发性成分为α-桉叶醇。结论不同产地白术特征品质挥发性成分可为产地溯源、加工和品质评价奠定基础。

基于液质联用-模式识别方法的不同产地白术和於术的成分分析

目的对不同产地白术和於术的化学成分进行比较分析,鉴定差异成分,为白术和於术药材的质量评价和道地性研究提供依据。方法以ZORBAX Eclipse XDB-C_(18) Analytica(l 4.6 mm×250 mm,5μm)为色谱柱,以乙腈为流动相B,水为流动相C,洗脱梯度;柱温35℃;流速为1 ml/min;并采用UPLC-Triple-TOF 6600+飞行时间液质联用仪,正负离子扫描模式。结合化学模式识别聚类分析、主成分分析和偏最小二乘判别分析寻找不同产地白术和於术的差异性成分。结果不同产地白术和於术的化学成分存在明显差异,共鉴定出5个差异成分,分别为白术内酯Ⅰ、Atractylmacrol D、Isoasterolide A、白术内酯Ⅱ和白术内酯Ⅲ。浙白术的5个差异成分含量显著高于其他产地白术;於术中的Atractylmacrol D、Isoasterolide A、白术内酯Ⅱ和白术内酯Ⅲ成分含量高于各产地白术。结论不同产地白术和於术的化学成分有所差异,具有较明显的产地特异性,於术的有效成分含量优于白术,浙白术的有效成分含量优于其他产地白术。本研究为评价白术和於术的质量和道地性提供了科学参考。

白术治疗溃疡性结肠炎作用机制的网络药理学分析及实验验证研究

目的基于网络药理学探究并预测白术治疗溃疡性结肠炎(UC)的作用靶点及分子机制,并加以动物实验验证。方法从TCMSP数据库、TCM-ID数据库以及结合相关参考文献筛选出白术的活性成分,在Swiss数据库获得对应靶点,从GeneCards数据库中获取UC疾病的相关靶点,分别构建“药物-成分-靶点-疾病”网络图“、通路-活性成分-靶点”网络图以及绘制PPI核心靶点网络图,并进行GO功能富集分析和KEGG通路注释分析,然后进行活性成分与核心靶点的分子对接。以葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导小鼠UC模型,通过采用苏木精-伊红染色法(Hematoxylin-Eosin staining)、AB-PAS染色法及免疫组织化学法分别检测小鼠结肠组织中病理形态学变化、杯状细胞数目以及炎症因子的表达情况,进行网络药理学预测结果的实验验证。结果筛选出白术内酯I、II、III等30个活性成分,获取其活性成分对应靶点591个,其中关键靶点有IL-1β、TNF-α等,分子对接结果显示IL-1β、TNF-α与核心成分具有良好的结合能力。动物实验结果显示,白术醇提物组可明显增加UC小鼠的结肠长度、降低DAI评分,还可改善UC小鼠结肠组织病变情况,增加杯状细胞的个数,抑制结肠组织中IL-1β、TNF-α的高表达。结论该研究表明白术可通过多组分、多靶点、多通路调控炎症因子的释放而抑制炎症反应,发挥改善UC的药效作用。

白术多糖抑制重症肺炎模型大鼠的炎性反应

目的探讨白术多糖(PAM)对重症肺炎作用的分子机制。方法将60只SD雄性大鼠随机分成对照组、模型组(气管穿刺注射肺炎克雷伯菌)、阳性药对照组(左氧氟沙星,18 mg/kg)、PAM低(50 mg/kg)、高(200 mg/kg)剂量组。模型构建成功后,灌胃给药,1次/d,持续7 d,每组12只。对肺组织进行HE染色,观察其病理学变化并对其损伤程度进行评分;称量法测定肺组织湿/干比;血细胞分析仪检测外周血中白细胞和中性粒细胞数量;酶联免疫吸附反应检测血清和支气管肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和IL-6的水平;Western blot检测肺组织中Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核因子κB(NF-κB)信号通路相关蛋白质的表达。结果模型组大鼠肺损伤评分及湿/干比、血液中白细胞和中性粒细胞数量、血清及BALF中TNF-α、IL-1β和IL-6水平以及肺组织中TLR4、MyD88蛋白表达和NF-κB p56磷酸化水平均显著高于对照组(P<0.05)。与模型组比较,各药物组大鼠肺损伤得到明显改善;其中,PAM高剂量组大鼠外周血中白细胞和中性粒细胞数量均显著降低(P<0.05);血清及BALF中TNF-α、IL-1β和IL-6水平均显著降低(P<0.05),肺组织中TLR4、MyD88蛋白表达和NF-κB p56磷酸化水平均显著降低(P<0.05)。结论PAM对肺炎克雷伯菌所致重症肺炎模型大鼠具有一定的保护作用,其机制可能与调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路抑制炎性反应有关。

白术多糖通过花生四烯酸代谢通路缓解环磷酰胺诱导的小鼠肾损伤

本研究旨在探讨白术多糖(PAMK)对环磷酰胺(CTX)诱导的小鼠肾脏损伤的影响及潜在的作用机制。选用100只42~43日龄雄性C57BL/6小鼠随机分为四组,白术多糖(PAMK)组和白术多糖+环磷酰胺(PAMK+CTX)组灌胃200 mg/kg PAMK,1次/d;对照(Control)组和环磷酰胺(CTX)组给予等量的生理盐水。实验第25~27 d,CTX组和PAMK+CTX组腹腔注射100 mg/kg CTX,1次/d;Control组和PAMK组注射等量生理盐水。实验第35 d采集肾脏进行组织学观察,氧化应激检测和转录组测序。结果显示,与CTX组相比,PAMK+CTX组肾脏损伤有所缓解;肾脏中丙二醛量显著下降(P<0.05)、谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶活性和总抗氧化能力显著升高(P<0.05)。为了进一步探究PAMK缓解CTX诱导肾损伤的调控机制,本实验进行了肾脏转录组测序。结果显示,在Control组vs CTX组和CTX组vs PAMK+CTX组分别鉴定到493个和333个差异表达基因(DEGs)。两组DEGs功能富集分析结果发现DEGs富集在花生四烯酸代谢等信号通路。花生四烯酸通路相关基因检测结果显示,与Control组相比,CTX组Cyp2b9、PTGS1、NF-κB和Mfsd2a mRNA表达量显著升高(P<0.05);与CTX组相比,PAMK+CTX组Cyp2c65、BCL6 mRNA表达量显著升高(P<0.05),Cyp2b9、PTGS1和Mfsd2a mRNA表达量显著降低(P<0.05)。综上所述,PAMK可能通过花生四烯酸代谢通路缓解小鼠肾脏氧化应激,从而降低CTX诱导的小鼠肾脏损伤。