1株黄河三角洲来源杂色曲霉A.versicolor BHT-72的次级代谢产物研究

目的 研究1株黄河三角洲盐碱地曲霉属真菌A. versicolor BHT-72的次级代谢产物及其生物活性。方法 采用硅胶柱层析、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱层析、ODS柱层析、高效液相(HPLC)等色谱方法对该菌株的次级代谢产物分离纯化,并通过核磁共振(NMR)、质谱(MS)等方法,结合相关文献对比鉴定化合物结构;分别采用CCK8法和改良的Ellman法对化合物进行抗肿瘤和抗乙酰胆碱酯酶抑制活性的测试。结果 从A. versicolor BHT-72的大米发酵产物中共分离得到10个单体化合物,分别为diorcinol(1)、12-O-acetyl-sydowinin A(2)、sydowinin A(3)、13-O-acetylsydowinin B(4)、sydoxanthone(5)、3-formylindole(6)、尿苷(7)、zarzissine(8)、6-氨基嘌呤核苷(9)、6-氨基嘌呤脱氧核苷(10)。细胞毒活性测定结果显示,化合物1在质量浓度为30μg/mL时,对鼻咽癌细胞CNE-2的抑制率为65.0%,对非小细胞肺癌H1299和H520的抑制率分别为81.3%和87.0%。化合物2在质量浓度为30μg/mL时对H1299细胞的抑制率为49.8%。在质量浓度为100μg/mL时,化合物1~5对乙酰胆碱酯酶具有一定的抑制活性,抑制率分别为59.4%、60.0%、54.6%、40.0%和66.6%。结论 黄河三角洲盐碱地真菌A. versicolor BHT-72能产生结构多样的活性次级代谢产物,化合物1和2对鼻咽癌细胞CNE-2、非小细胞肺癌H1299和H520具有一定的细胞毒活性,化合物1~5具有一定的乙酰胆碱酯酶抑制活性。

Coriolus versicolor对褐煤溶解过程的条件优化

为了提升劣质褐煤的资源利用率,本文以云南昭通的露天褐煤为研究对象,利用微生物Coriolus versicolor进行溶煤的实验研究。通过正交实验,考察了培养基种类、微量元素的添加量、加煤时间等因素对溶煤效果的影响,使用紫外-可见光分光光度计(UV-Vis)和红外光谱分析仪(FTIR)对溶煤产物进行了分析。结果表明,培养基种类对溶煤效果的影响最大,微量元素添加量的影响最小。当使用DOX培养基、微量元素的添加量为7mL、在第0天添加煤时,溶煤条件最优。溶煤产物主要为带支链的芳香族化合物,FTIR谱图中检测到大量的氢键(3000cm^(-1)~3700cm^(-1))、芳环(1700cm^(-1))、甲基/亚甲基(1440cm^(-1)、2890cm^(-1)附近)和酯/醚键(1030cm^(-1)、1200cm^(-1)附近)等。

一株产凝乳酶变色栓菌鉴定及其凝乳酶的分离纯化与酶学性质研究

微生物凝乳酶具有生产周期短和易于发酵生产的优点,是传统小牛皱胃酶的经济高效替代选择之一。为了筛选新的凝乳酶产生菌,该研究以从传统发酵腐乳分离的霉菌为出发菌株,筛选具有高凝乳活性和低蛋白水解活性的霉菌菌株。采用内源转录区间隔区结合线粒体小亚基核糖体DNA扩增测序的方法对菌株进行了分子鉴定。通过硫酸铵分级盐析沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换柱、Sephadex G100凝胶过滤层析法对酶进行了纯化,并研究了凝乳酶酶学特性。筛选出菌株CQ3具有良好的凝乳活性和低蛋白水解活性,该菌株鉴定为变色栓菌(Trametes versicolor)。CQ3凝乳酶纯化后经SDS-PAGE分析呈现出分子质量为61 kDa的唯一条带。该酶作用的最适温度为45℃,最适pH值为6.5,Ca^(2+)对酶活力有显著的促进作用。该酶在pH值为4.5~7.0和温度低于50℃条件下有良好的稳定性。蛋白酶抑制剂试验表明,该酶为一种天冬氨酸蛋白酶。该研究结果报道了一种新的产凝乳酶菌种资源,为丰富凝乳酶产生菌株资源,进一步评价栓菌凝乳酶在干酪加工适用性的研究提供了理论基础。

基于RAPD和ISSR标记的云芝种质资源遗传多样性分析及SCAR标记建立

为了探究野生云芝(Trametes versicolor)种质资源遗传背景,基于RAPD、ISSR两种分子标记技术对18个不同种源的云芝菌株进行鉴定及遗传多样性分析,并建立稳定性更好的SCAR标记。结果表明RAPD和ISSR引物均能扩增出较多条带,多态率分别为100%和97.4%,说明RAPD和ISSR可以检测到供试菌株丰富的遗传多样性,能够对云芝菌株进行有效的区分。南方的长沙居群和宁乡居群的NPL、PPB、Na、Ne、He、I相近且偏高,北方的山东、辽宁和吉林居群偏低。从聚类结果看,整体上呈由南往北聚类的规律。获得的SCAR标记验证结果显示可能与云芝子实体边缘厚度基因相关。该研究完善了云芝遗传物质的分子标记,可为后续云芝品种选育、性状关联基因调控提供一定的研究基础。

云芝产漆酶培养基优化及发酵液对玉米赤霉烯酮降解的研究

粮食被玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)污染不仅会造成巨大的经济损失,还会对人类和牲畜的健康构成重大威胁。为开发一种经济、绿色、高效且能直接降解ZEN的生物法,以云芝菌株Tv-1为试验菌株,碳源、氮源、漆酶诱导剂(Cu2+和粮油加工副产物)为影响因素,发酵液中的漆酶活力为指标,采用单因素和响应面试验确定云芝产漆酶的最适液体培养基以提高发酵液中漆酶的活力,然后用在最适培养基条件下制备的云芝发酵液直接降解ZEN,研究处理时间对ZEN降解率的影响。结果表明:云芝产漆酶的最适液体培养基为去皮马铃薯200 g/L、麦芽糖19.30 g/L、酵母浸粉2.00 g/L、小麦麸皮42.60 g/L、Cu2+0.48 mmol/L,在此条件下,漆酶活力达到5611.56 U/L,较优化前提高了22.86倍;采用此发酵液直接降解ZEN,第96小时降解率可达92.45%。本研究确定了云芝Tv-1产漆酶的最适发酵液体培养基,且云芝发酵液能够有效降解ZEN,为消减粮食中的ZEN奠定了理论基础。

产香云芝菌丝体的培养条件优化及其挥发性成分分析

为获得云芝菌丝体最佳产香培养条件和其挥发性成分,采用单因素试验法考察了不同碳源、氮源、pH值、培养基体积、培养温度、培养时间对云芝菌丝体产生挥发性成分的影响,通过响应面法优化其培养条件,并结合气相色谱-质谱联用法对云芝菌丝体挥发性成分进行分析。结果表明:培养基体积、培养时间、培养温度对云芝菌丝体挥发性成分具有显著影响,最佳培养条件为以蔗糖为碳源、不添加氮源、培养基体积120 mL、培养温度27.5℃、培养时间27 d,在此条件下验证试验结果与理论预测的误差为0.315%。从云芝菌丝体中共检测出6种挥发性成分,包括脂肪醇类3种、芳香族类1种、倍半萜烯类2种,其中1-表双环倍半水芹烯和(E)-菖蒲烯为主要成分,相对含量分别为29.96%和29.17%,为云芝菌丝体在微生物香料的进一步开发应用提供科学依据。

ARTP法改良变色栓菌ATCC20869发酵漆酶

变色栓菌漆酶是一种含铜的多酚氧化酶,可氧化多种酚类和芳香族化合物,主产物为水且几乎不产生有毒副产物,具有较好的应用前景,但变色栓菌漆酶较低的产量限制了其进一步应用。本研究利用ARTP技术成功地从变色栓菌ATCC20869中突变出新的突变菌株TA-03。为了进一步提高漆酶产量,利用单因素摇瓶发酵实验和响应面分析法,优化了漆酶发酵条件。结果表明:在法尼醇添加量为4.48 mmol/L、硫酸铜添加量为1.90 mmol/L,pH为4.00的条件下,突变株漆酶产量达到了(283.77±8.91)U/mL。为深入探究突变菌株TA-03漆酶酶活性提高的原因,对其进行重测序和转录组分析。研究结果显示,漆酶活性区域氨基酸的突变以及新陈代谢等方面的富集导致了漆酶活性的提升。这为变色栓菌漆酶的实际应用进行了有意义的探索,提升了漆酶在发酵工业上的应用。

杂色曲霉固态发酵晒青毛茶工艺优化研究

以晒青毛茶为原料,利用杂色曲霉进行固态发酵。通过单因素试验及响应面试验,以发酵茶叶感官评分及茶多酚含量为考察指标,对菌种添加量、外加水量、发酵时间、发酵温度4个因素进行黑茶发酵工艺条件优化研究。结果表明,当菌种添加量为14.5%、外加水量为25%、发酵温度为32℃、发酵时间为10 d,发酵得到的茶叶感官评分为(91.00±2.29)分,茶多酚含量为(17.84±0.28)%。此工艺条件下制得的黑茶外形匀整、汤色红浓明亮、香气纯正、滋味醇厚,且茶多酚含量高。

杂色曲霉β-葡萄糖苷酶分离纯化及酶学性质研究

试验旨在从杂色曲霉发酵液中分离纯化β-葡萄糖苷酶,并对其进行酶学性质研究。利用ENrich Q,10×100离子交换色谱法对杂色曲霉产β-葡萄糖苷酶分离纯化,采用SDS-PAGE测定其分子质量。结果表明:该β-葡萄糖苷酶的分子质量约为88.5 kDa,纯化倍数为53.44,回收率为70.78%,比酶活为1438.11 U/mg。该β-葡萄糖苷酶最适反应温度为50℃,最适反应pH为5.5;在温度20~50℃,pH 5.0~7.0时有较好的稳定性。Mn^(2+)对该酶具有明显的促进作用;Co^(2+)、Cu^(2+)、Cd^(2+)对该酶表现出抑制作用;而Na^(+)、Mg^(2+)、K^(+)、Ca^(2+)、Ba^(2+)对该酶无明显影响。该酶以水杨苷为底物时,米氏常数K_(m)为0.48 mg/mL,最大反应速率V_(m)为0.04 mg/(min·mL)。试验从杂色曲霉发酵液中成功分离出一种β-葡萄糖苷酶,为纤维素类饲料的应用提供了数据支撑。

转录组与代谢组联合分析三蕊柳对柳蓝叶甲的抗虫机制

为研究三蕊柳抗柳蓝叶甲的机制及其中的原理,以垂柳、黄花柳、旱柳为代表的非抗虫组和以3个无性系的三蕊柳为代表的抗虫组4种不同且相关的柳树品种为试验对象,以差异代谢物儿茶素溶液、水杨酸溶液、没食子酰葡萄糖溶液、新橙皮苷溶液以及异泽兰黄素溶液浸泡处理的叶片饲喂柳蓝叶甲成虫及幼虫进行试验,探究三蕊柳抗柳蓝叶甲的机制。结果表明:(1)柳蓝叶甲在食用异泽兰黄素溶液处理的叶片后出现死亡:24 h后成虫存活率平均为83.33%,48 h后成虫存活率平均为40%;24 h后幼虫存活率平均为80%,48 h后幼虫存活率平均为35%。(2)其他溶液处理的叶片均未造成柳蓝叶甲死亡:24 h后及48 h后,成虫、幼虫的成活率均为100%。(3)结合转录组与代谢组分析结果筛选出来的5种差异代谢物溶液处理叶片饲喂柳蓝叶甲之后,只有异泽兰黄素溶液处理出现柳蓝叶甲死亡,异泽兰黄素可能是三蕊柳抗柳蓝叶甲的重要原因。综上所述,推测三蕊柳抗虫机制与次生代谢物——异泽兰黄素有关。

Trametes versicolor修复石油烃污染土壤及温室气体释放特征

石油烃是环境中一种难降解的物质,物理化学修复技术成本高、能耗大且不利于环境恢复。杂色云芝(Trametes versicolor)的菌丝能够均质化土壤,是石油烃生物修复的潜在微生物。本文以不同类型石油烃污染为研究对象,以降解率为考核指标,探究杂色云芝对不同类型石油烃的降解性能。在此基础上,研究杂色云芝对石油烃污染土壤的生物修复作用及对温室气体释放的影响,为石油烃污染土壤的生物修复技术应用提供理论指导。结果表明:杂色云芝能有效降解不同类型石油烃,4天内正十六烷被去除了53.55%,9天内原油被去除了21.61%。利用杂色云芝降解模拟污染土壤中的石油烃,修复15天后,正十六烷的去除率达到32.68%,原油的去除率达到4.84%。正十六烷污染的土壤中,污染物被降解并以CO_(2)和CH_(4)的形式释放到环境中,在原油污染的土壤中,CH_(4)的释放量较少,而CO_(2)和N_(2)O的释放量增加。研究结果证明了杂色云芝修复不同类型石油烃污染土壤的可能性,提供了生物修复能产生更少温室气体的理论依据。

云芝发酵红薯浆水代谢产物对酸奶风味的影响

目的探究云芝发酵红薯浆水(Coriolus versicolor fermentation of sweet potato pulp water,CV-SPPW)代谢产物对酸奶风味的影响。方法该研究测定红薯浆水(sweet potato pulp water,SPPW)发酵前后的理化指标和利用液相色谱-串联质谱法(liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)分析CV-SPPW的代谢产物。通过气相色谱-质谱法(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)和感官评定方法对酸奶的风味进行研究。结果与SPPW相比,CV-SPPW中总多糖、总黄酮、总酚、总三萜的含量分别提高4.79、13.67、10.54、2.74倍,游离氨基酸提高了121.87%;棉籽糖、赤藓酮糖、灵芝酸F等代谢产物分别上升13.70、7.49、7.00倍,这些代谢产物通过糖类热解、美拉德反应等途径形成酸奶的风味物质。与0%酸奶组相比,5%、10%、15%的3组酸奶中香茅醇、4-壬酮、E-2-辛烯醛等风味物质的含量显著增加,赋予酸奶果香味、花香味。结论CV-SPPW能够明显改善酸奶品质,提升酸奶的风味特性,具有很好的应用前景。

云芝胞内糖肽口服制剂质量评价

目的:了解云芝胞内糖肽口服制剂的质量现状并发现存在的质量问题,完善质量标准,为药品监管提供技术支持。方法:从全国范围内抽取54批次云芝胞内糖肽口服制剂样品,依据现行质量标准检验,从药品安全性、有效性等方面进行探索性研究,建立多项检测方法全面分析其质量情况。结果及结论:云芝胞内糖肽口服制剂在原料工艺和制剂工艺中均发现与批准工艺不符的问题,其质量标准有待完善和提高。

近红外光谱法结合聚类分析对云芝胞内糖肽胶囊不同生产工艺的分类研究

目的利用近红外光谱技术对云芝胞内糖肽胶囊进行制剂工艺研究,采用聚类分析对不同工艺样品进行分类,评估制剂工艺的合规性。方法2023年5―8月采用无损检验方法,对46批样品进行近红外光谱检测,对平均光谱经二阶导数预处理后得到的导数光谱进行建模,对预处理后的谱图进行聚类分析。结果不同生产工艺的样品分别聚类,提示某生产企业的制剂工艺与批准工艺可能不符,经调研确认情况属实。结论近红外光谱结合聚类分析可运用于云芝胞内糖肽胶囊制剂工艺的分类研究,为工艺控制提供有益的技术借鉴。

HPLC法测定云芝菌发酵茶中9种活性成分及抗氧化活性研究

目的:建立同时测定云芝菌发酵茶中9种活性成分含量的高效液相色谱法,并对发酵前后茶叶中9种活性成分含量和抗氧化活性的变化进行研究。方法:采用Agilent C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为0.05%磷酸溶液和乙腈,梯度洗脱,检测波长为280 nm、流速1.0 mL/min、柱温30℃。结果:与未发酵的对照组绿茶相比,云芝菌发酵茶中咖啡碱的含量无明显变化,没食子酸、可可碱和没食子儿茶素没食子酸酯的含量分别增加了0.4613%、0.3118%和0.5770%,没食子儿茶素、茶碱、表没食子儿茶素、表儿茶素和表没食子儿茶素没食子酸酯含量分别减少了0.0156%、0.0178%、1.2938%、1.1062%和4.0241%。体外抗氧化活性试验结果表明,发酵后茶叶对DPPH·和·OH的清除率均有显著性(P<0.05)降低。当浓度为2.0 mg/mL时,云芝菌发酵茶提取液对DPPH·和·OH的清除率分别为7.79%和9.65%。结论:云芝菌的固体发酵可改变茶叶中活性成分的含量和抗氧化活性,研究为云芝菌发酵茶的开发提供了实验依据。

葛根发酵产物延缓衰老小鼠器官功能衰退的作用机制

[目的]探究葛根素抗衰老作用机制。[方法]通过D-半乳糖诱导的亚急性衰老小鼠模型,测定小鼠血清、肝脏和脾脏的氧化应激指标评定其抗氧化能力。以水迷宫试验(MWM)评定小鼠的空间学习记忆能力;尼氏染色法观察小鼠海马体的病理变化;测定脑组织氧化应激指标,综合探讨云芝发酵葛根提取物(FP)对脑衰老的影响。采用Micro-CT扫描分析FP对衰老小鼠股骨运动能力的影响。采用苏木精和伊红(HE)染色,观察小鼠睾丸和胸腺的组织结构变化。[结果]与模型组相比,FP干预后,小鼠血清MDA含量显著降低(P<0.001),GSH含量显著升高(P<0.001),SOD活力显著升高(P<0.05);肝组织中MDA含量显著降低(P<0.05),GSH含量显著升高(P<0.01),对SOD活性无显著影响;脾脏组织中MDA含量显著降低(P<0.05),SOD活性显著升高(P<0.001),对GSH含量无显著影响;表明FP可通过提高血清抗氧化能力来延缓衰老小鼠肝、脾的抗氧化功能衰退;FP组小鼠末次训练总路程下降62.18%(P<0.000 1)、平台穿越次数提高77.14%(P<0.000 1);脑组织MDA显著降低(P<0.001),GSH含量和SOD活力显著升高(P<0.05);海马神经元的凋亡得到改善;FP能够提高小鼠股骨体积分数,改善衰老股骨状态;FP组小鼠睾丸和胸腺组织结构异常得到改善。[结论]FP可延缓衰老小鼠脑组织结构和功能衰退;股骨运动协调能力衰退;肝脏和脾脏抗氧化功能衰退及胸腺和睾丸组织结构退行性改变。

白腐菌Trametes versicolor产漆酶发酵条件的优化

对白腐菌Trametesversicolor产漆酶的发酵条件进行了研究,结果表明摇瓶培养产漆酶的最佳培养基组成为:可溶性淀粉2g/L,氯化铵1.2g/L,KH2PO42g/L,MgSO4·7H2O0.5g/L,CaCl2·2H2O0.1g/L,VB10.001g/L,Tween802g/L,微量元素混合液7mL/L,愈创木酚0.015mmol/L,CuSO4·5H2O60μmol/L,pH3.5;最佳发酵条件为:在250mL三角瓶装50mL培养基,接种量(Φ8mm)2块,25℃,150r/min振荡培养10d时,漆酶活力达到862U/L,约是优化前的4倍。

基于ITS序列的栓菌属部分种的分子分类初步研究(英文)

栓菌属 Trametes 的一些近缘种宏观和微观形态学非常相近,传统分类学方法难于对其进行准确分类定位。测定了 34 个分类单元的 ITS(包括 5.8SrDNA)序列,并对得到的 43 个分类单元的 ITS 序列进行系统发生分析,构建了聚类分析树状图。该树状图显示,栓菌属类群与其他属类群明显分开,Trametes versicolor 聚类到一个高支持率的独立分支。形态学上定名为 T. hirsuta 和 T. pubescens 物种聚类到同一高支持率的独立分支,试验分析表明这两个种应视为同一物种。

白腐菌漆酶催化聚合造纸废水中木素的研究

为了证实漆酶对从造纸厂二沉池出水提取出的木素的催化聚合作用,研究了白腐菌采绒革盖菌Coriolus versicolor漆酶对木素聚合的影响。在有氧条件下,通过添加漆酶和少量ABTS介体到水样中,用紫外分光光度计测定了其中木素浓度变化,利用凝胶色谱法分析了酶催化聚合木素前后的分子量的变化。结果表明:酶处理6h以后,废水中木素浓度从93.1mg/L下降到17.2mg/L。酶处理2h以后,从造纸厂污水分离的木素的分子量从31251上升到58610。造纸废水中木素及其衍生物被聚合后通过絮凝沉淀除去,从而实现废水色度与COD降低,进而为造纸废水回用提供可能。

红树林内生真菌Pestalotiopsis versicolor的化学成分研究

对内生拟盘多毛孢菌(Pestalotiopsis versicolor)进行大量液体培养,应用多种色谱纯化方法,从其代谢产物中分离得到8个化合物。根据它们的理化性质和波谱数据分别鉴定为:麦角甾醇(1),3β,5α,9α-三羟基-7,22麦角甾二烯-6-酮(2),ergosta-8(9),22-diene-3,5,6,7-tetraol(3β,5α,7α,22E)(3),butyl 2-pyrrolidone-5-carboxylate(4),胸腺嘧啶(5),尿嘧啶(6),邻苯二甲酸正丁酯(7),对羟基苯甲醛(8)。