乳制品中A1β-酪蛋白、A2β-酪蛋白检测方法研究进展

随着消费者对A2β-酪蛋白的关注度提升,A2β-酪蛋白相关产品不断更新换代。A2β-酪蛋白常用检测方法有反相高效液相色谱法(RP-HPLC)、液相色谱-高分辨串联质谱法、毛细管区带电泳法、试剂盒检测法等。本文对β-酪蛋白遗传变体A1β-酪蛋白和原始形态A2β-酪蛋白的功能特点、检测方法、定量分析进行综述,说明检测方法的原理和试剂药品的作用机理,加强对A1β-酪蛋白、A2β-酪蛋白检测方法的改进与优化,为A2β-酪蛋白应用于功能性食品、婴幼儿配方食品提供理论依据。

乳制品中A1β-酪蛋白、A2β-酪蛋白含量的测定

本检测方法在已有检测方法资料的基础上,通过改变柱温和梯度洗脱条件,提高A1 β-酪蛋白和A2 β-酪蛋白的分离效果,以便更好的分析乳制品中A1 β-酪蛋白和A2 β-酪蛋白的含量。本检测方法使用盐酸胍、二硫苏糖醇使β-酪蛋白变性,流动相选择B(乙腈),A(0.1%三氟乙酸水溶液),流速0.5 mL/min,梯度洗脱,柱温50℃,反相色谱柱进行分离,紫外检测器214 nm检测。采用本方法可以较好地分离牛乳中的A1 β-酪蛋白和A2 β-酪蛋白,并且出峰时间稳定。A1 β-酪蛋白在0.16~1.65 mg/mL浓度范围内线性关系良好,回归方程y=1.25×10^(6)x-1.44×10^(5),R^(2)=0.9985,R=0.9992,回收率范围96.4%~105.0%,精密度小于2.0%;A2β-酪蛋白在0.34~3.35 mg/mL浓度范围内线性关系良好,回归方程y=3.16×10^(6)x-3.16×10^(5),R^(2)=0.9988,R=0.9994,三浓度水平加标回收率范围97.5%~105.0%,精密度小于2.0%。结果表明,方法操作简单、重现性好、准确度高,可为牛乳中A1 β-酪蛋白和A2 β-酪蛋白的进一步研究和应用作技术参考。

高效液相色谱-串联质谱法测定婴幼儿配方乳粉中A1 β-酪蛋白、A2 β-酪蛋白含量

建立婴幼儿配方乳粉中A1、A2 β-酪蛋白的高效液相色谱-串联质谱测定方法。乳粉经尿素溶液溶解稀释,胰蛋白酶酶解,过膜后利用ACQUITY UPLC Peptide BEH C18(100 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱分离,0.1%甲酸水、0.1%甲酸乙腈为流动相梯度洗脱,高效液相色谱-串联质谱仪测定。结果表明,A1、A2 β-酪蛋白在0.02~2.00 mg·mL^(-1)线性范围内,相关系数(R^(2))均≤0.99,检出限为0.05~0.10 g·kg^(-1);定量限为0.2~0.5 g·kg^(-1);平均回收率在92.08%~105.29%;平均相对标准偏差为1.5%~7.9%。随机选取了10个品牌的婴幼儿配方乳粉进行测定,得到A1 β-酪蛋白、A2 β-酪蛋白的含量在0~30.3 g·kg^(-1)。

A1/A2型β-酪蛋白检测方法研究进展

乳中最常见的β-酪蛋白主要分为A1型和A2型。A2型为原始β-酪蛋白,而A1型等变异体是源于DNA突变所导致的氨基酸序列发生变化。由于A1β-酪蛋白基因型的个体牛具有较高的产奶量,因此在不断选育后产生了大量的A1型等变异体。但研究表明,A2β-酪蛋白比A1β-酪蛋白表现出更好的生物活性。目前已开发出了各种A2奶类产品,但其中的A1/A2型β-酪蛋白的检测方法还未标准化。就目前常见的A2β-酪蛋白的检测方法进行了分类阐述总结,分别从分子、蛋白质水平以及代谢物差异等方面检测A2β-酪蛋白或检测A2奶中是否存在A1β-酪蛋白。这对未来创新、改进检测A2β-酪蛋白的方法以及建立乳制品中A2β-酪蛋白检测及定量分析提供理论参考,以期更好的便携式现场检测方法标准化地应用于现实。

响应曲面法优化β-酪蛋白及其A1、A2型变异体检测方法的酶解条件

利用响应曲面法优化β-酪蛋白及其A1、A2型变异体超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)检测方法的酶解条件。将酶解设备(X1)、酶解时间(X2)和酶加入量(X3)作为影响因子,以A2型β-酪蛋白(Y1)、A1型β-酪蛋白(Y2)和β-酪蛋白总量(Y3)的质量浓度为评价指标。根据Box-Behnken中心组合试验设计原理,针对检测方法中酶解反应这一关键步骤,通过单因素实验优选,响应曲面法研究酶解时间(X2)和酶加入量(X3)与A2型β-酪蛋白(Y1)、A1型β-酪蛋白(Y2)和β-酪蛋白总量(Y3)之间的关系。确定最佳酶解条件为:酶解设备(X1)为水浴摇床,酶解时间(X2)为2.5 h,酶加入量(X3)为15μL。

A1与A2β-酪蛋白酸奶产品特性的比较

探究分别含有A1、A2两种β-酪蛋白牛乳制成的搅拌型和凝固型酸奶产品特性的区别。持水力结果表明,A1β-酪蛋白酸奶(凝固型和搅拌型)的持水力大于69%,A2β-酪蛋白酸奶(凝固型和搅拌型)的持水力大于65%。质构特性的结果显示,凝固型酸奶差距更为明显,A1β-酪蛋白酸奶的硬度和稠度分别比A2β-酪蛋白酸奶高41.4%和59.8%。此外,A1β-酪蛋白酸奶黏性优于A2β-酪蛋白酸奶。流变学特性与微观结构结果显示,A1β-酪蛋白酸奶的滞后回路面积较A2β-酪蛋白酸奶小14.6%,说明A2β-酪蛋白制成的酸奶结构更易于被破坏,网状结构更为稀疏。本实验为A2β-酪蛋白牛乳在酸奶制品的应用及实际生产提供一定理论支持。

酶联免疫法检测牛乳中A1β-酪蛋白研究

对一种牛乳中A1β-酪蛋白含量的酶联免疫试剂盒测定方法的线性范围、重复性及交叉反应进行测定和研究。使用该方法对普通巴氏杀菌乳(O_PMilk)、A2β-酪蛋白生牛乳(A2_RMilk)和A2β-酪蛋白鲜牛奶(A2_PMilk)样品中A1β-酪蛋白含量进行测定。结果表明,在6.25~400 ng/mL浓度范围内线性良好(r2=0.99148)。7次重复试验相对标准偏差(S_(RSD))为4.97%(n=7),小于10%,重复性良好。同时该试剂盒方法对A1β-酪蛋白具有良好的特异性,与A2β-酪蛋白无明显交叉反应,可以满足牛乳中A1β-酪蛋白的定性研究要求。但是该试剂盒方法仍存在不足,还需进一步完善。

A1、A2 β-酪蛋白对肠脑轴影响的比较研究进展

β-酪蛋白是牛乳蛋白的主要成分,其中以A1、A2β-酪蛋白最为常见。β-酪蛋白衍生肽具有生物活性,可影响胃肠道和肠脑轴功能。A1和A2β-酪蛋白具有不同的生理效应,其中A1β-酪蛋白衍生肽可能加重肠道功能障碍和胃肠道炎症、干扰氧化还原平衡,并可能导致神经炎症和认知功能障碍。临床试验表明,与饮用含A1和A2β-酪蛋白的牛奶相比,饮用不含A1β-酪蛋白的牛奶胃肠不良症状和肠道炎症较少,并且在标准化测试中与认知功能的改善相关。虽然还需要进一步研究A1和A2β-酪蛋白在生理和发育过程中的作用,但目前的研究表明,避免食用A1β-酪蛋白可改善人的整体健康,尤其是改善消化和认知功能。