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Pseudomonas stutzeri A1501基因组结构及功能注释 被引量:4
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作者 燕永亮 杨剑 +4 位作者 窦岳坦 平淑珍 王忆平 金奇 林敏 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 2008年第5期45-52,共8页
采用全基因组"shotgun"方法完成了固氮斯氏假单胞菌A1501的全基因组序列测定,并进行了基因组结构与功能注释分析。A1501基因组全长4 567 418 bp,含有4 146个ORFs。该基因组中已鉴定了42个编码转座酶的重复序列,这些序列的存... 采用全基因组"shotgun"方法完成了固氮斯氏假单胞菌A1501的全基因组序列测定,并进行了基因组结构与功能注释分析。A1501基因组全长4 567 418 bp,含有4 146个ORFs。该基因组中已鉴定了42个编码转座酶的重复序列,这些序列的存在预示着转座现象在A1501菌中非常活跃,预示该菌与其他生物之间基因交流可能比较频繁。比较基因组表明,为了适应特定的生存环境,假单胞菌在基因组结构和遗传信息容量上产生了明显的分化。此外,基因组分析鉴定了A1501环境适应的遗传基础,包括物质转运、信号传导和趋化系统等,这些系统是细菌能够在根际土壤环境中保持竞争力以及能够与水稻形成高效联合固氮体系的关键。A1501基因组的完成为进一步开展功能基因组学和蛋白质组学研究奠定了基础。 展开更多
关键词 基因组测序 斯氏假单胞菌a1501 联合固氮 比较基因组学
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固氮施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)A1501同化硝酸盐代谢基因簇分布及调控研究 被引量:1
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作者 黄丽玲 李耘 +11 位作者 王珊珊 陆超 杨智敏 林敏 燕永亮 陈明 张维 王劲 周正富 柯秀彬 战嵛华 陆伟 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期72-81,共10页
固氮施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)A1501在有氧条件下能够利用硝酸盐/亚硝酸盐为唯一氮源生长,表明该菌除了具有固氮和反硝化等氮循环系统外还有同化硝酸盐/亚硝酸盐系统。为进一步阐明该菌同化硝酸盐的代谢机制,利用生物信息学... 固氮施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)A1501在有氧条件下能够利用硝酸盐/亚硝酸盐为唯一氮源生长,表明该菌除了具有固氮和反硝化等氮循环系统外还有同化硝酸盐/亚硝酸盐系统。为进一步阐明该菌同化硝酸盐的代谢机制,利用生物信息学手段分析了硝酸盐同化相关基因的组成及分布情况,并初步研究了同化硝酸盐途径特异性调控关系。结果表明,P.stutzeri A1501中存在两个硝酸盐同化基因簇nasST-nasA-nirBDnasBcobA和nasR-nasFED,分布于基因组不同部位。第一个基因簇中nasS-nasT编码二元抗转录终止因子,nasA编码NarK/NasA家族硝酸盐转运蛋白,nirBD编码亚硝酸盐还原酶,nasB编码同化硝酸盐还原酶,cobA编码参与西罗血红素合成的尿卟啉-ⅢC-甲基转移酶;第二个基因簇中nasR编码单一组分抗转录终止因子,nasFED编码ABC型(ATP依赖)硝酸盐/亚硝酸盐转运蛋白。NasS-NasT双组分蛋白调控硝酸盐/亚硝酸盐还原酶基因的转录,NasR调控硝酸盐/亚硝酸盐转运蛋白基因的转录。 展开更多
关键词 施氏假单胞菌a1501 硝酸盐同化 基因簇 途径特异性控制
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斯氏假单胞菌A1501物质代谢及能量生成相关基因的分析 被引量:1
3
作者 刘伟 燕永亮 +6 位作者 杨剑 平淑珍 陈立宏 陆伟 张维 陈明 林敏 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第4期175-180,共6页
斯氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)A1501是一株分离自中国南方水稻根际土壤的联合固氮菌。该菌在无氨和微好氧条件下可将空气中的氮气转化为植物可以直接利用的铵。A1501基因组测定工作已经完成,根据A1501菌基因组的功能注释对该菌的... 斯氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)A1501是一株分离自中国南方水稻根际土壤的联合固氮菌。该菌在无氨和微好氧条件下可将空气中的氮气转化为植物可以直接利用的铵。A1501基因组测定工作已经完成,根据A1501菌基因组的功能注释对该菌的中心代谢、能量合成及环境适应性等方面进行了生物信息学分析。结果发现,A1501菌的物质代谢途径具有多样性,除不能利用EMP途径代谢己糖外,该基因组含有几乎所有编码Entner-Doudorff途径(ED)、磷酸戊糖途径(HMP)、糖酵解途径(EMP)、三羧酸循环(TCA)以及乙醛酸途径中关键酶类的基因。此外,基因组分析鉴定了252个与能量产生相关以及3套编码电子传递复合体(1个Nqr和2个Rnf复合体)的基因簇。为进一步研究A1501菌的碳代谢调控及C-N偶联机制提供了重要的理论依据。 展开更多
关键词 斯氏假单胞菌a1501 生物固氮 中心代谢 能量生成
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碳化硼促进Psendomonas stutzeri A1501电催化固氮产氨及机制 被引量:2
4
作者 董国文 陈飘 +4 位作者 任国平 王超 金曙光 叶捷 周顺桂 《中国环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第5期2449-2458,共10页
以Pseudomonas stutzeri(P.stutzeri)A1501为模式固氮菌株、碳化硼(B_(4)C)为典型电子传递载体构建电催化氮还原体系,探究B_(4)C添加对该体系固氮产氨性能的影响.结果表明,B_(4)C能够显著提高P.stutzeri A1501介导的电催化氮还原体系的... 以Pseudomonas stutzeri(P.stutzeri)A1501为模式固氮菌株、碳化硼(B_(4)C)为典型电子传递载体构建电催化氮还原体系,探究B_(4)C添加对该体系固氮产氨性能的影响.结果表明,B_(4)C能够显著提高P.stutzeri A1501介导的电催化氮还原体系的产氨性能.在0.4g/L投加量条件下,900℃煅烧温度下制备的B_(4)C(B_(4)C_(900))的添加能够使电催化体系氨累积量提高117%,这是由于B_(4)C_(900)表面丰富的活化位点能够促进N2吸附与活化.此外,电化学和光谱学谱图表明,B_(4)C_(900)的添加不仅能够促使P.stutzeri A1501分泌更多的氧化还原活性物质,而且驱动高活性阴极生物膜的形成,进而强化电极电子的长距离传递及利用. 展开更多
关键词 Psendomonas stutzeri a1501 B_(4)C 电催化 生物固氮
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施氏假单胞菌A1501铁吸收调节蛋白Fur的表达特性与功能鉴定
5
作者 刘一超 陆超 +3 位作者 战嵛华 柯秀彬 陆伟 燕永亮 《生物技术进展》 2022年第3期387-395,共9页
铁是细胞生理代谢的重要金属元素,是多种氧化还原酶类、过氧化物酶类的重要组成部分。革兰氏阴性菌中,胞内铁转运、储存和利用主要由铁吸收调节蛋白Fur(ferric uptake regulator)调控。水稻根际联合固氮菌--施氏假单胞菌(Pseudomonas st... 铁是细胞生理代谢的重要金属元素,是多种氧化还原酶类、过氧化物酶类的重要组成部分。革兰氏阴性菌中,胞内铁转运、储存和利用主要由铁吸收调节蛋白Fur(ferric uptake regulator)调控。水稻根际联合固氮菌--施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)A1501基因组中含有一个fur同源基因,但其具体功能尚不清楚。比较了A1501中fur基因及其编码蛋白的序列特征,并通过实时荧光定量PCR(real-time quantitative,qRT-PCR)和Western blotting杂交方法测定了fur基因和Fur蛋白的表达特性,结果发现fur基因表达水平与环境中铁浓度呈负相关,在铁限制条件下高表达,铁过量条件下表达受抑制。构建了fur基因突变株和功能回补株,表型测定发现fur突变影响了A1501的碳源代谢谱,并导致A1501对过氧化氢胁迫敏感。胞内铁含量测定表明,fur突变株内的铁含量为野生型的1.3倍,进一步qRT-PCR测定表明fur突变影响了铁离子转运系统及过氧化物酶编码基因的表达。研究结果为解析根际微生物胞内铁平衡调节及根际环境适应机制奠定了理论基础。 展开更多
关键词 施氏假单胞菌a1501 铁吸收调节蛋白 生物固氮 氧化胁迫 铁转运系统
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Transcriptional Analysis of Pseudomonas stutzeri A1501 Associated with Host Rice 被引量:2
6
作者 Khandakar Mohiul Alam Tao Zhang +3 位作者 Yonglian Yan Wei Zhang Min Lin Wei Lu 《Advances in Microbiology》 2016年第3期210-221,共12页
Pseudomonas stutzeriA1501, associative and endophytic nitrogen-fixing bacterium showed the capacity of colonization in the rice roots and considered as the good colonizer in the rice plant. The experiment was conducte... Pseudomonas stutzeriA1501, associative and endophytic nitrogen-fixing bacterium showed the capacity of colonization in the rice roots and considered as the good colonizer in the rice plant. The experiment was conducted to study the expression of genes potentiality relevant to the association of nitrogen fixing Pseudomonas stutzeri with host rice and reveal the molecular mechanism by which underlying interaction between bacteria and host rice. The bacteria were shown to be uniformly distributed on the rhizoplane of the root and the density of bacteria was found at the intercellular junction and micro colony developed on the surface of the epidermal cells and on the cellular junctions. Root exudates of rice were the major components of carbon and energy sources for bacteria. RT-PCR analyses of pilK, metE, rpoN and fdhE genes expression of P. stutzeri A1501 were performed at positive and negative (control) conditions. After 1 h, it was found that pilK, metE and rpoN transcription were increased 5.7, 6.4 and 3.4-fold, respectively, whereas in the fdhE gene has no expression. Consequently, after 4 h pilk, fdhE, metE and rpoN were decreased -1.9, -4.4, -0.2 and -0.8-fold, respectively. The gene pilK, expression was up-regulation after 1 h and down-regulation after 4 h that has twitching motility to convey the bacterial cell to point of attachment in to host plant. The gene expressions of the bacteria, pilK, metE, rpoN and fdhE were up- and down-regulated during the influence of root exudates which regulated the colonization of bacteria during plant-microbe interaction. 展开更多
关键词 RICE Pseudomonas stutzeri a1501 Transcriptional Analysis Root Exudates COLONIZATION
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斯氏假单胞菌Pseudomonas stutzeriA1501氧胁迫下基因表达谱研究 被引量:1
7
作者 窦岳坦 燕永亮 +6 位作者 平淑珍 陆伟 陈明 张维 王忆平 金奇 林敏 《科学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期664-671,共8页
斯氏假单胞菌Pseudomonas stutzeri A1501分离自我国南方水稻田,在低铵和微好氧条件下能紧密结合在水稻根表,并侵入根内生长和固氮.为探讨氧对A1501基因组表达的影响,利用全基因组芯片技术,研究不同氧浓度(0.5%,21%)下A1501基因组表达谱... 斯氏假单胞菌Pseudomonas stutzeri A1501分离自我国南方水稻田,在低铵和微好氧条件下能紧密结合在水稻根表,并侵入根内生长和固氮.为探讨氧对A1501基因组表达的影响,利用全基因组芯片技术,研究不同氧浓度(0.5%,21%)下A1501基因组表达谱,结果表明:(ⅰ)67个基因在高氧浓度下表达上调2倍以上,其中17个基因的功能未知;(ⅱ)68个基因在高氧条件下表达,其中约50%的基因参与固氮或反硝化.实时定量RT-PCR验证结果表明,4个编码氧化还原酶的基因和7个编码胞外夹膜多糖和抗原寡糖合成的基因在高氧下表达上调,其中sodC在高氧下表达上调2.7倍、编码黄素单胺氧化酶相关蛋白的基因PST1610表达上调2.2倍、编码α-酮戊二酸-铁氧化酶族氧化还原酶的基因PST3584表达上调3.2倍、编码NAD依赖型氧化还原酶的基因PST2179表达上调2.9倍.这些基因及其表达产物可能在A1501氧保护机制中发挥作用. 展开更多
关键词 斯氏假单胞菌 PSEUDOMONAS STUTZERI a1501 全基因组芯片 氧胁迫 联合固氮 氧化还原酶
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斯氏假单胞菌A1501固氮新基因PST1305的功能分析 被引量:1
8
作者 樊慧俐 燕永亮 +5 位作者 李燕 平淑珍 张维 陈明 林敏 陆伟 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期580-584,共5页
【目的】研究斯氏假单胞菌A1501基因组"固氮岛"中PST1305基因在A1501生物固氮过程中所起的作用。【方法】利用同源重组与三亲接合的方法构建PST1305的非极性突变株。乙炔还原法测定固氮酶活。RT-PCR分析PST1305基因与其周围... 【目的】研究斯氏假单胞菌A1501基因组"固氮岛"中PST1305基因在A1501生物固氮过程中所起的作用。【方法】利用同源重组与三亲接合的方法构建PST1305的非极性突变株。乙炔还原法测定固氮酶活。RT-PCR分析PST1305基因与其周围基因转录单元的关系,Real-TimePCR比较PST1305在最佳固氮与非固氮条件下表达水平的差异。【结果】突变株np1305的固氮酶活显著降低,功能互补菌株np1305 Comp能基本恢复细胞的固氮作用。PST1305与其上游的nifB、fdxN、下游的nifQ等基因位于同一个转录单元,组成一个操纵子。基因芯片表明,PST1305基因在固氮比非固氮条件下表达量显著上调(约38.7倍),Real-Time PCR验证支持这一结果。【结论】PST1305基因参与固氮过程,其突变会影响固氮酶的活性,该基因可能通过参与A1501固氮酶电子传递或者固氮酶的氧保护过程影响固氮效率。 展开更多
关键词 斯氏假单胞菌a1501 生物固氮 REAL-TIME PCR 固氮新基因
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固氮施氏假单胞菌A1501四碳二羧酸结合蛋白DctP的功能及表达特性
9
作者 戴淑玲 李红权 +5 位作者 尚立国 杨智敏 闫宁 陆伟 燕永亮 战嵛华 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期825-834,共10页
【目的】研究施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)A1501四碳二羧酸结合蛋白Dct P的生物学功能和自身表达特性。【方法】构建结合蛋白编码基因dct P的非极性突变株,测定dct P突变株以不同四碳二羧酸(琥珀酸延、胡索酸、苹果酸)为唯一碳... 【目的】研究施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)A1501四碳二羧酸结合蛋白Dct P的生物学功能和自身表达特性。【方法】构建结合蛋白编码基因dct P的非极性突变株,测定dct P突变株以不同四碳二羧酸(琥珀酸延、胡索酸、苹果酸)为唯一碳源时的生长情况和固氮酶活性;构建dct P基因启动子的融合表达载体dct P-lac Z,将其分别转入野生型A1501和ntr BC、rpo N和dct B突变株中,测定在不同四碳二羧酸为唯一碳源诱导条件下重组菌株中的β-半乳糖苷酶活性。【结果】dct P基因的突变使菌株丧失了四碳二羧酸的利用能力,影响了菌株的固氮酶活性;苹果酸、延胡索酸、琥珀酸对dct P-lac Z具有明显的诱导作用;在rpo N、ntr BC和dct B突变株中,dct P的表达量均显著降低。【结论】Dct P蛋白在四碳二羧酸的利用过程中起重要的作用,dct P基因的表达是Rpo N依赖型,可被四碳二羧酸诱导,受到调控蛋白Ntr BC/Dct B的协同调控。 展开更多
关键词 施氏假单胞菌a1501 四碳二羧酸 DctP
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Study on molecular interac-tion between NifA and NifL of Pseudomonas stutzeri A1501 by using the yeast two-hybrid system 被引量:2
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作者 XIEZhihong YANGYi +8 位作者 PINGShuzheng CHENMing ZHANGwei LUWei XUYuquan LIUHongjuan WANGGuoying E.Claudine LINMin 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 2005年第2期190-192,共3页
关键词 分子相互作用 NIFA NifL 假单胞菌 a1501 酵母 无性繁殖
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Expression profile analysis of the oxygen response in the nitrogen-fixing Pseudomonas stutzeri A1501 by genome-wide DNA microarray
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作者 DOU YueTan YAN YongLiang +6 位作者 PING ShuZhen LU Wei CHEN Ming ZHANG Wei WANG YiPing JIN Qi LIN Min 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 2008年第8期1197-1204,共8页
Pseudomonas stutzeri A1501, an associative nitrogen-fixing bacterium, was isolated from the rice paddy rhizosphere. This bacterium fixes nitrogen under microaerobic conditions. In this study, ge- nome-wide DNA microar... Pseudomonas stutzeri A1501, an associative nitrogen-fixing bacterium, was isolated from the rice paddy rhizosphere. This bacterium fixes nitrogen under microaerobic conditions. In this study, ge- nome-wide DNA microarrays were used to analyze the global transcription profile of A1501 under aerobic and microaerobic conditions. The expression of 135 genes was significantly altered by more than 2-fold in response to oxygen stress. Among these genes, 68 were down-regulated under aerobic conditions; these genes included those responsible for nitrogen fixation and denitrification. Sixty- seven genes were up-regulated under aerobic conditions; these genes included sodC, encoding a copper-zinc superoxide dismutase, PST2179, encoding an NAD(P)-dependent oxidoreductase, PST3584, encoding a 2OG-Fe(II) oxygenase, and PST3602, encoding an NAD(P)H-flavin oxidoreductase. Addi- tionally, seven genes involved in capsular polysaccharide and antigen oligosaccharide biosynthesis together with 17 genes encoding proteins of unknown function were up-regulated under aerobic con- ditions. The overall analysis suggests that the genes we identified are involved in the protection of the bacterium from oxygen, but the mechanisms of their action remain to be elucidated. 展开更多
关键词 假单胞菌 基因组 DNA 氧化作用 固氮作用 氧化还原酶类
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粪产碱菌的Tn5转座诱变及吲哚乙酸生物合成特性的研究 被引量:11
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作者 李法峰 平淑珍 +1 位作者 苏宝林 林敏 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期551-555,共5页
粪产碱菌 (Alcaligenesfaecalis)A1 50 1的吲哚乙酸 (IAA)合成需要外源色氨酸参与。在不含色氨酸的限制性培养基中 ,A1 50 1能良好生长 ,但不能合成IAA ,表明在A1 50 1中存在一条依赖于色氨酸的IAA合成途径。A1 50 1的IAA合成具有菌体... 粪产碱菌 (Alcaligenesfaecalis)A1 50 1的吲哚乙酸 (IAA)合成需要外源色氨酸参与。在不含色氨酸的限制性培养基中 ,A1 50 1能良好生长 ,但不能合成IAA ,表明在A1 50 1中存在一条依赖于色氨酸的IAA合成途径。A1 50 1的IAA合成具有菌体密度依赖特性。采用Tn5转座诱变技术构建A1 50 1的突变库 ,从 350 0多株Tn5转染子中分离到一株色氨酸营养缺陷型突变株AT63。该Tn5突变株在不含色氨酸的限制性培养基上不能生长 ,但仍能进行IAA的生物合成 ,每毫升菌体密度等于 1 0的突变株菌体的IAA合成量为 2 2 4 μg。对突变株AT63的研究表明在A1 50 1中至少存在两条IAA合成途径 :一条以色氨酸为合成前体 ,另一条以吲哚 - 3-磷酸甘油为前体。southern杂交结果表明突变株中Tn5插入位点可能位于编码色氨酸合成酶基因上。 展开更多
关键词 粪产碱菌a1501 Tn5诱变 吲哚乙酸
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非生物胁迫条件下施氏假单胞菌生物膜形成规律的研究 被引量:3
13
作者 闫宁 杨智敏 +5 位作者 尚立国 戴淑玲 战嵛华 陆伟 林敏 燕永亮 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期172-178,共7页
旨在系统研究非生物胁迫因素对固氮施氏假单胞菌A1501生物膜形成能力的影响,测定了不同NaCl浓度、pH值、温度等培养条件下A1501生长及其生物膜形成能力的变化规律。结果显示,上述3种环境因素均对A1501菌的生长及生物膜形成具有影响,且... 旨在系统研究非生物胁迫因素对固氮施氏假单胞菌A1501生物膜形成能力的影响,测定了不同NaCl浓度、pH值、温度等培养条件下A1501生长及其生物膜形成能力的变化规律。结果显示,上述3种环境因素均对A1501菌的生长及生物膜形成具有影响,且呈现出一定的规律性。NaCl浓度2 mmol/L、p H值6.8、温度30℃是A1501的最适生长条件,而在0.6 mol/L的NaCl、p H值6.0及温度40℃等胁迫条件下,A1501菌的生物膜形成量均达到最高,分别为最佳生长条件下的7.8、7.0和2.0倍。在测试的诸因素中,NaCl浓度对A1501生物膜形成影响最大。以上结果表明,生物膜的形成与菌体生长负相关,即高盐、弱酸、高温等条件不利于A1501的生长,但刺激了其生物膜的形成。 展开更多
关键词 施氏假单胞菌a1501 非生物胁迫 生物膜形成 生长特性 环境因素
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施氏假单胞菌在玉米根际的固氮效率和促生效果研究 被引量:5
14
作者 杨华 李江 +7 位作者 张维 周正富 燕永亮 郭嘉 刘相国 郝东云 林敏 柯秀彬 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期76-84,共9页
非豆科植物根际联合固氮作用广泛存在于水稻、玉米等根际,在农作物节肥增产方面具有巨大的应用潜力。施氏假单胞菌A1501是一株分离自水稻根际的模式联合固氮菌,接种该菌对水稻和玉米均具有良好的促生效果。为了进一步研究根际固氮与促... 非豆科植物根际联合固氮作用广泛存在于水稻、玉米等根际,在农作物节肥增产方面具有巨大的应用潜力。施氏假单胞菌A1501是一株分离自水稻根际的模式联合固氮菌,接种该菌对水稻和玉米均具有良好的促生效果。为了进一步研究根际固氮与促生效果的关系,利用突变型泌铵固氮菌株(1568/pVA3)和转基因氮高效利用玉米品系共同构建高效固氮体系,并在温室条件下进行促生及生物固氮量评价。播种60 d后对玉米生长量和微生物固氮量进行分析,结果表明:固氮施氏假单胞菌接种后氮高效利用和对照玉米品系的地上和地下部生物量都显著高于不接种对照,但是固氮菌接种对氮高效利用玉米和对照玉米的总生物量没有显著影响。氮高效利用玉米接种1568/pVA3菌株后,植株生物量较施肥处理提高25.5%,全氮含量较不接种对照增加39%,15N同位素稀释法测定生物固氮量为0.8 g·株^(-1);接种野生型后植株生物量较施肥处理提高24.8%,生物固氮量为0.64 g·株^(-1)。研究结果表明,通过将固氮菌尤其是泌铵工程菌与氮高效利用玉米建立联合固氮体系可以显著提高根际固氮量和植株生物量,据估算每公顷可节省化肥约23%,而对照体系为7.5%。 展开更多
关键词 固氮施氏假单胞菌a1501 氮高效利用玉米 根际联合固氮 生物固氮效率 ~(15)N稳定性同位素稀释法
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固氮斯氏假单胞菌铵载体amtB基因的功能和结构分析 被引量:1
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作者 侯胜强 何升 +3 位作者 窦岳坦 平淑珍 林敏 陈明 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期572-576,566,共6页
固氮斯氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)A1501是分离自水稻根际的联合固氮细菌,属变形细菌γ亚族。全基因组序列分析表明该菌含有2个紧密连锁的的铵载体蛋白编码基因amtB1和amtB2,位于同一个操纵子中glnK基因下游。铵载体蛋白AmtB1和Am... 固氮斯氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)A1501是分离自水稻根际的联合固氮细菌,属变形细菌γ亚族。全基因组序列分析表明该菌含有2个紧密连锁的的铵载体蛋白编码基因amtB1和amtB2,位于同一个操纵子中glnK基因下游。铵载体蛋白AmtB1和AmtB2分别包含12和11个跨膜结构域。为研究amtB的功能,构建了amtB极性双突变株(PKOB1)。amtB极性双突变导致菌株生长缓慢;在铵浓度分别为3.3和10mmol/L条件下,其固氮酶活仍保持在0.01mmol/L的最佳固氮条件的87%和74%,而野生型已经基本尚失固氮能力。以硝酸盐为唯一氮源时,突变株细胞培养液的铵浓度可达到3.4mmol/L,而野生型并未检测到铵,表明AmtB可能参与了P.stutzeriA1501的铵离子转运,并与固氮酶活和氮代谢相关。 展开更多
关键词 斯氏假单胞菌a1501 铵载体 跨膜结构 AMTB
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大肠杆菌氮代谢调节蛋白GlnG与固氮施氏假单胞菌氮代谢调节蛋白NtrC的功能互补研究
16
作者 柯琪 陈清华 +2 位作者 战嵛华 陆伟 燕永亮 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期190-197,共8页
旨在围绕大肠杆菌DH10B(Escherichia coli DH10B)中氮代谢调节蛋白GlnG与施氏假单胞菌A1501(Pseudomonas stutzeriA1501)中氮代谢调节蛋白NtrC在一般氮代谢调控网络中是否存在功能互补展开研究。利用DH10B菌的glnG基因回补A1501菌的ntr... 旨在围绕大肠杆菌DH10B(Escherichia coli DH10B)中氮代谢调节蛋白GlnG与施氏假单胞菌A1501(Pseudomonas stutzeriA1501)中氮代谢调节蛋白NtrC在一般氮代谢调控网络中是否存在功能互补展开研究。利用DH10B菌的glnG基因回补A1501菌的ntrC突变株,以及A1501菌的ntrC基因回补DH10B菌的glnG突变株,对所获得的功能互补株分别展开生理生化表型测定。结果表明,在以硝酸钾或尿素为唯一氮源的培养条件下,DH10B glnG基因可以回补A1501ntrC突变株的氮源利用能力,并且部分恢复ntrC突变株的固氮酶活性(约为野生型A1501固氮酶活性的45%);与DH10B glnG突变株相比,A1501菌的ntrC基因回补了DH10B glnG突变株以精氨酸为唯一氮源的生长能力。以上结果说明DH10B菌的GlnG蛋白与A1501菌的NtrC蛋白不仅在进化关系上紧密联系而且在所测试的氮代谢途径中存在功能互补。 展开更多
关键词 施氏假单胞菌a1501 NTRC 大肠杆菌DH10B GlnG 一般氮代谢 功能互补
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斯氏假单胞菌NifA蛋白Y370氨基酸突变对固氮基因转录的影响
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作者 樊慧俐 燕永亮 +5 位作者 李燕 平淑珍 张维 陈明 林敏 陆伟 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 2009年第3期88-92,共5页
NifA为固氮微生物固氮基因(nif)表达的正调控因子,序列分析显示NifA蛋白C6区的一个酪氨酸残基高度保守(对应于A1501为Y370)。β-半乳糖苷酶活性分析表Y370C突变体不能激活nifH启动子,也不能使NifA缺失突变株A1506恢复固氮酶活,而野生型N... NifA为固氮微生物固氮基因(nif)表达的正调控因子,序列分析显示NifA蛋白C6区的一个酪氨酸残基高度保守(对应于A1501为Y370)。β-半乳糖苷酶活性分析表Y370C突变体不能激活nifH启动子,也不能使NifA缺失突变株A1506恢复固氮酶活,而野生型NifA可以激活PnifH+lacZ的表达,并恢复A1506的固氮酶活。研究证明斯氏假单胞菌A1501 NifA蛋白的C6区的Y370氨基酸是NifA蛋白激活nif基因转录的关键位点之一,其具体作用机制值得进一步深入研究。 展开更多
关键词 斯氏假单胞菌a1501 NIFA蛋白 定点突变 转录激活
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固氮斯氏假单胞菌固氮调节基因ntrB的功能研究
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作者 高淼 陈明 +7 位作者 何升 窦岳坦 侯胜强 平淑珍 张维 陆伟 王玉炯 林敏 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第2期211-215,共5页
利用三亲接合的方法将含有 ntrB 基因部分序列的自杀载体导入固氮斯氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)A1501中,获得了 ntrB 基因的非极性突变株(AdnB)。RT-PCR实验证明,AdnB 菌株中与 ntrB 连锁的下游基因 ntrC 能正常转录;ntrB 基因的... 利用三亲接合的方法将含有 ntrB 基因部分序列的自杀载体导入固氮斯氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)A1501中,获得了 ntrB 基因的非极性突变株(AdnB)。RT-PCR实验证明,AdnB 菌株中与 ntrB 连锁的下游基因 ntrC 能正常转录;ntrB 基因的非极性突变导致细胞完全丧失固氮能力,但其突变株能在含 NH_4^+的基本培养基 K 中正常生长;在以硝酸盐为唯一氮源时,AdnB 比野生型 A1501的细胞生长延迟约14~18 h,认为 ntrB 基因与硝酸盐的氮代谢有关。功能互补实验结果表明,AdnB 的功能互补菌株能完全恢复细胞的固氮作用和对硝酸盐的利用。 展开更多
关键词 斯氏假单胞菌a1501 ntrB非极性突变株 功能互补
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施氏假单胞菌氮代谢调控蛋白GlnK与碳信号分子α-酮戊二酸的体外互作研究
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作者 王珊珊 毋少宇 +4 位作者 刘一超 战嵛华 柯秀彬 陆伟 燕永亮 《生物技术进展》 2021年第1期91-98,共8页
细菌中PⅡ蛋白是一类氮代谢调控因子,可通过感知胞内碳氮信号变化调整自身与靶蛋白的相互作用,从而实现对下游基因的级联调控。α-酮戊二酸是胞内碳状态的重要信号分子,前期研究发现PⅡ蛋白可结合α-酮戊二酸感应细胞内的碳状态,但不同... 细菌中PⅡ蛋白是一类氮代谢调控因子,可通过感知胞内碳氮信号变化调整自身与靶蛋白的相互作用,从而实现对下游基因的级联调控。α-酮戊二酸是胞内碳状态的重要信号分子,前期研究发现PⅡ蛋白可结合α-酮戊二酸感应细胞内的碳状态,但不同菌中二者的结合存在差异。施氏假单胞菌A1501(Pseudomononas stutzeri A1501)只含有1种PⅡ蛋白GlnK,其在A1501固氮调控中发挥重要作用,但具体碳信号感知与转导机制有待进一步探索。基于此,通过大肠杆菌外源表达GlnK蛋白,并通过微量热泳动(microscale thermophoresis,MST)方法研究GlnK蛋白与碳信号分子α-酮戊二酸的体外互作,发现二者可以体外结合,且进一步证实GlnK蛋白的第89位甘氨酸(G89,Gly89)可能与互作相关。研究结果为进一步解析α-酮戊二酸在A1501中的信号转导奠定了基础,也为深入解析固氮菌的碳氮代谢偶联机制提供了理论支持。 展开更多
关键词 施氏假单胞菌a1501 GlnK蛋白 Α-酮戊二酸 分子互作
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N_2和NH_4^+培养下粪产碱菌固氮酶铁蛋白的生物合成及特性比较
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作者 海伟力 宋未 尤崇杓 《植物生理学报(0257-4829)》 CSCD 1992年第4期361-368,共8页
应用DEAE-纤维素和凝胶柱层析,分别将N_2和NU_1^+(30 mmol/L)培养的粪产碱菌固氮酶铁蛋白(Af2和Af^+2)分离并提纯52倍,在SDS-PAGE上呈均一状态。Af2的比活性达1540 nmol C_2H_4mg^(-1)protein min^(-1),Af~*2无活性。Af2和Af~*2理化性... 应用DEAE-纤维素和凝胶柱层析,分别将N_2和NU_1^+(30 mmol/L)培养的粪产碱菌固氮酶铁蛋白(Af2和Af^+2)分离并提纯52倍,在SDS-PAGE上呈均一状态。Af2的比活性达1540 nmol C_2H_4mg^(-1)protein min^(-1),Af~*2无活性。Af2和Af~*2理化性质基本相同,分子量为64.5 kD;均由2个亚基组成,每个亚基分子量为32.5kD;氨基酸种类相同,总残基数分别为537和553,不含色氨酸;每分子Af2和Af^+2均含有4个Fe原子和4个酸不稳定S^(2-)原子;UV-vis光谱吸收特征相同;荧光探剂测定结果为:每分于Af2和Af~*2均络合2个分子MgATP或2个分子MgADP。 展开更多
关键词 粪产碱菌 固氮酶铁蛋白 生物合成
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