S100钙结合蛋白A16在胃癌转移中的作用和机制

目的:研究S100钙结合蛋白A16(S100 calcium binding protein A16,S100A16)对胃癌细胞迁移的影响及其分子机制。方法:慢病毒感染构建稳定过表达S100A16的胃癌细胞株SGC-7901和MGC-803;划痕实验和Transwell实验检测胃癌细胞的迁移能力;SGC-7901细胞通过脂质体转染S100A16 siRNA,Western blot检测E-钙黏蛋白和波形蛋白;免疫共沉淀检测S100A16和闭合小环蛋白2(zonula occludens 2,ZO-2)的结合情况;免疫荧光观察S100A16和ZO-2在胃癌细胞中的定位。结果:S100A16在胃癌细胞中表达高于胃上皮细胞;稳定过表达S100A16的胃癌细胞SGC-7901和MGC-803构建成功;过表达S100A16促进胃癌细胞SGC-7901和MGC-803迁移;转染S100A16 siRNA抑制SGC-7901细胞中S100A16表达,E-钙黏蛋白表达升高,波形蛋白下调;S100A16和ZO-2存在相互作用,并在空间上存在共定位。结论:S100A16过表达促进胃癌细胞迁移,其作用机制可能是通过和ZO-2相互作用而实现。

钙离子结合蛋白S100A16对胃癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨钙结合蛋白S100A16在胃癌组织和细胞中的表达,及其对胃癌细胞SGC-7901增殖、迁移、侵袭能力的影响。方法:应用免疫组织化学染色法检测S100A16在胃癌和相应癌旁组织中的差异表达。应用Western blot检测正常胃上皮细胞GES-1以及胃癌细胞MGC-803和SGC-7901中S100A16的表达水平。将S100A16高表达质粒和干扰质粒分别转染至人胃癌细胞株SGC-7901中,用Western blot检测各组细胞中S100A16的表达。采用磺酰罗丹明B(sulforhodamine B,SRB)比色法和克隆形成实验检测细胞的增殖能力。采用划痕实验检测细胞迁移能力,采用Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果:在胃癌组织及胃癌细胞中,S100A16的表达量明显高于相应癌旁组织及正常胃上皮细胞。SRB染色和克隆形成实验显示,过表达S100A16会增加SGC-7901细胞的增殖能力,敲低S100A16后增殖能力降低。划痕实验Transwell实验显示,过表达S100A16会增加SGC-7901细胞的迁移和侵袭能力,敲低S100A16则会降低。免疫共沉淀实验显示在胃癌细胞SGC-7901中,S100A16与YBX-1存在结合。结论:胃癌组织及细胞中S100A16的表达明显上调,S100A16在胃癌中的异常表达可能是由于与YBX-1的相互结合,进而促进胃癌细胞增殖、迁移、侵袭从而影响胃癌的发生发展。

Bacillus sp．C3细胞色素P450CYP102A16酶活性研究

通过异源表达及Ni-NTA亲和层析纯化获得重组Bacillus sp．C3细胞色素P450CYP102A16蛋白；以CYP102A16纯酶为研究对象，系统研究温度、pH、有机溶剂、表面活性剂、金属和非金属离子等对该酶活性及其稳定性的影响；用还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（nicotinamide adenine dinucleotide phosphate，NADPH）消减法测定CYP102A16的酶活性．结果表明：CYP102A16的最适反应温度为35℃，最适反应pH为6．5-7．5，该酶在45℃以下、pH5．0～10．0的范围内稳定；CYP102A16能完全耐受20％二甲基亚砜（dimethylsulfoxide，DMSO）、30％甲醇、10％乙醇和20％丙酮，经10％乙腈、正丙醇和异丙醇处理后残余酶活性在45％以上，经10％正丁醇处理几乎失活；添加低质量浓度氯代十六烷基吡啶（cetylpyridine chloride，CPC）（0．003-0．02g/L）和聚乙二醇辛基苯基醚（Triton X-100）（0．1-0．2g／L）可使CYP102A16酶活性分别提高40％和60％左右，而添加低质量浓度十二烷基硫酸钠（sodiumdodecyl sulphate，SDS）（O．004-0．008g／L）对该酶活性无显著影响；1-20mmol／L K^＋、20-50mmol/L Na^＋、0．05mmol／L Cd^2＋对CYP102A16酶活性表现出轻微的促进效应，NH4^＋、Ca^2＋、Mg^2＋、Fe^3＋、CO^2＋、Mn^2＋、Zn^2＋、Cu^2＋和乙二胺四乙酸（ethylene diamine tetraacetic acid．EDTA）均能不同程度地抑制CYP102A16的活性，在离子浓度为1-100mmol／L时抑制效应表现为Ca^2＋〉Mg^2＋〉NH^4＋〉EDTA，抑制作用的大小总体上与离子浓度呈正相关．

大车前苷通过调控miR-711/S100A16信号通路表达抑制膀胱癌细胞的增殖和迁移

目的探讨大车前苷对膀胱癌MGH-U3细胞增殖和迁移的作用及分子机制。方法分别采用0,5,10,20,40,80μg/ml的大车前苷处理膀胱癌MGH-U3细胞,通过CCK-8法分析大车前苷对MGH-U3细胞增殖能力的影响。将MGH-U3细胞分为对照组(0μg/ml大车前苷)和大车前苷组(40μg/ml大车前苷)。通过细胞划痕实验分析大车前苷对MGH-U3细胞迁移能力的影响。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测大车前苷处理后MGH-U3细胞中miR-711的表达。通过miRGator数据库和双荧光素酶基因报告实验分析miR-711的靶基因。qRT-PCR和Western blot分别检测大车前苷处理后MGH-U3细胞中miR-711靶基因的表达。结果与0μg/ml比较,随着大车前苷处理浓度的升高,MGH-U3细胞活力显著降低(F=29.16,P<0.05)。与对照组相比,大车前苷组MGH-U3细胞迁移能力显著降低(t=7.10,P<0.05)。与对照组相比,大车前苷组MGH-U3细胞中miR-711表达显著增多(t=27.03,P<0.01)。双荧光素酶基因报告实验证实miR-711的靶基因是S100钙调蛋白A16(S100A16)。与对照组相比,大车前苷组MGH-U3细胞中S100A16基因表达显著降低(t=8.68,P<0.01)。结论大车前苷通过上调miR-711表达降低S100A16基因表达,抑制膀胱癌MGH-U3细胞增殖和迁移。

miR-6893-5p对前列腺癌LNCaP细胞增殖和迁移的抑制作用及机制研究

目的探讨miR-6893-5p对前列腺癌LNCaP细胞增殖和迁移的影响及其作用机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测miR-6893-5p在前列腺癌细胞系(DU-145、PC-3、C4-2B、LNCaP)及正常前列腺上皮细胞(RWPE-1)中的表达。选择miR-6893-5p表达最低的细胞系,分别感染携带无意义序列的重组慢病毒(NC组)和携带miR-6893-5p序列的重组慢病毒(miR-6893-5p组)。采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法和划痕实验观察两组细胞的增殖和迁移情况。采用生物信息学预测和双荧光素酶检测系统验证miR-6893-5p的靶基因。RT-qPCR和Western blot分别检测靶基因的表达。结果miR-6893-5p在前列腺癌细胞系中的表达明显低于RWPE-1细胞(P<0.05),LNCaP细胞中miR-6893-5p的表达最低(P<0.01)。与NC组相比,miR-6893-5p上调可明显抑制LNCaP细胞的增殖能力和迁移能力(均P<0.05)。双荧光素酶检测证实miR-6893-5p可与S100钙结合蛋白A16(S100 calcium binding protein A16,S100A16)靶向结合(P<0.01)。NC组和miR-6893-5p组LNCaP细胞中S100A16 mRNA相对表达量分别为(1.01±0.07)和(0.22±0.06),与NC组相比,miR-6893-5p能够抑制LNCaP细胞中S100A16的表达(P<0.01)。结论miR-6893-5p对前列腺癌LNCaP细胞增殖和迁移具有明显的抑制作用,其作用机制可能与负向调控S100A16基因表达有关。

山羊痘病毒G9和A16基因的克隆及生物信息学分析

为研究山羊痘病毒(goatpox virus,GTPV)G9、A16蛋白的功能,用PCR方法从山羊痘病毒弱毒疫苗毒株GTPV AV41中扩增出编码G9、A16蛋白的基因进行测序,通过生物信息学方法对目的基因序列进行分析。结果显示:G9蛋白有34个磷酸化位点,17个抗原表位位点;二级结构中以α-螺旋和无规则卷曲为主,分别占36.61%和42.86%,有9个保守结构域,蛋白序列末尾有跨膜区域,包含15个半胱氨酸残基位点;三级结构中具有细胞凋亡和跨膜功能的结构。A16蛋白有36个磷酸化位点,19个抗原表位位点;二级结构中α-螺旋和无规则卷曲为主,分别占25.46%和48.28%,有10个保守结构域,蛋白序列末尾有跨膜区域,包含21个半胱氨酸残基位点;三级结构预测结果显示可以形成膜蛋白。上述研究结果为进一步探究GTPV的G9、A16蛋白功能提供了参考。