核内不均一核糖核蛋白A2/B1在舌鳞状细胞癌中的表达及作用

目的:舌鳞状细胞癌(tongue squamous cell carcinoma,TSCC)是口腔颌面部的常见癌症,严重危害人们的生命健康。核内不均一核糖核蛋白A2/B1(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A2/B1,hnRNP A2/B1)是一种RNA结合蛋白,可调控多种基因的表达,参与多种癌症的发生和发展。本研究旨在探究hnRNP A2/B1对TSCC进展的表达及作用。方法:基于基因表达综合(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库中口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)相关芯片GSE146483、GSE85195分析hnRNP A2/B1在OSCC及正常口腔黏膜细胞、组织中的差异表达情况,基于TSCC相关芯片GSE4676分析hnRNP A2/B1表达与TSCC患者无病生存期的相关性。收集2021年7月至12月于湖南省肿瘤医院就诊的30例TSCC患者的癌及癌旁组织样本,采用real-time RT-PCR和蛋白质印迹法验证TSCC患者样本中hnRNP A2/B1的mRNA和蛋白质表达情况。以人TSCC细胞Tca-8113为研究对象,分别转染hnRNP A2/B1空载敲减质粒(sh-NC组)、敲减质粒(sh-hnRNP A2/B1组)、空载过表达质粒(OE-NC组)和过表达质粒(OE-hnRNP A2/B1组)。采用蛋白质印迹法检测hnRNP A2/B1敲减或过表达效率,细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)检测Tca-8113细胞增殖活性,流式细胞术检测Tca-8113细胞凋亡率。结果:基于GEO数据库中的OSCC相关芯片GSE146483、GSE85195分析发现:hnRNP A2/B1在OSCC及正常口腔黏膜细胞、组织中均存在差异表达(均P<0.01),同时对TSCC相关芯片GSE4676的分析证实hnRNP A2/B1表达与TSCC患者无病生存期呈负相关(P=0.006)。Real-time RT-PCR和蛋白质印迹法结果显示:与癌旁组织样本相比,TSCC组织样本中hnRNP A2/B1的mRNA和蛋白质相对表达水平均显著上调(均P<0.01)。蛋白质印迹法结果显示:Tca-8113细胞在转染敲减或过表达hnRNP A2/B1质粒后,细胞内的hnRNP A2/B1表达水平被显著抑制或促进(均P<0.01)。CCK-8及流式细胞术结果显示:抑制Tca-8113细胞中hnRNP A2/B1的表达可以降低细胞增殖活性(P<0.05),增高细胞凋亡率(P<0.01);促进Tca-8113细胞中hnRNP A2/B1的表达可以增加细胞增殖活性(P<0.05),降低细胞凋亡率(P<0.01)。结论:HnRNP A2/B1是调控TSCC细胞增殖和凋亡水平的关键因子,通过抑制hnRNP A2/B1的表达可以降低TSCC细胞的增殖活性,促进TSCC细胞的凋亡。

核内不均一核糖核蛋白A2/B1研究进展

目前肺癌发病率居高不下，绝大多数肺癌早期表现无特征性，明确诊断一般已属晚期，治疗亦受限制，故5年生存率〈15％，为降低癌症死亡率，提高早期检测率，核内不均一核糖核蛋白A2／B1（heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A2/BI, hnRNPA2/B1, hnRNPA2/B1 ）研究作为新的早期标记物，在临床表现之前，运用痰脱落细胞学预测肺癌可提高至1年，下面对近期研究进展做一综述。

HMBA诱导人成骨肉瘤MG-63细胞分化过程中hnRNP A2/B1的表达与定位

背景与目的:核基质蛋白的差异表达与细胞癌变和增殖分化调控关系密切。本研究观察了hnRNP A2/B1在诱导分化处理前后人成骨肉瘤MG-63细胞核基质中的存在和分布,及其与Actin、Prohibitin的共定位关系。方法:选择性抽提经环六亚甲基双乙酰胺(hexamethylene bisacetamide,HMBA)诱导处理前后的MG-63细胞核基质,并运用双向电泳、质谱分析、蛋白质印记杂交、免疫荧光、激光共聚焦等技术检测hnRNP A2/B1在核基质中的表达与定位变化,及其与相关蛋白的共定位关系。结果:双向电泳及蛋白质印迹杂交结果证实了hnRNP A2/B1存在于MG-63细胞核基质蛋白组分中,并在HMBA处理后细胞核基质中表达下调;免疫荧光显微镜观察显示hnRNP A2/B1定位在核基质上,经HMBA处理后hnRNP A2/B1表达减弱。激光共聚焦显微镜观察结果显示,hnRNP A2/B1与细胞核基质蛋白组分Actin、细胞增殖相关调控因子Prohibitin具有共定位关系,但在诱导处理后细胞内的共定位关系减弱。结论:hnRNP A2/B1在MG-63细胞诱导分化过程中的表达分布,及其与Actin、Prohibitin的共定位关系的改变对MG-63细胞分化具有重要影响,值得进一步探索和研究。

榄香烯乳对肺腺癌A549细胞hnRNPA2/B1的mRNA及蛋白表达的影响

目的 :观察榄香烯乳对人肺腺癌细胞株A5 4 9细胞hnRNPA2 /B1mRNA及蛋白表达的影响。方法 :选用A5 4 9细胞株 ,应用MTT法检测细胞增殖 ,显微镜下观察细胞形态变化 ,逆转录—聚合酶链反应 (RT PCR)检测hnRNPA2 /B1mRNA表达 ,蛋白印迹法检测hnRNPA2 /B1蛋白表达。结果 :榄香烯乳对A5 4 9细胞体外增殖有显著抑制作用 ,且呈时间和剂量依赖性 ,其IC50 值为 15 μg/ml,hnRNPA2 /B1mRNA及蛋白表达水平均有下降。 结论 :榄香烯乳可抑制肺腺癌A5 4 9细胞增殖 ,致其hnRNPA2 /B1的mRNA和蛋白表达水平均有下降。

颅咽管瘤p21及hnRNP A2/B1表达的研究

目的分析颅咽管瘤中细胞增殖相关基因p21及hnRNP A2/B1在蛋白水平的表达,探讨其在颅咽管瘤细胞增殖中的意义。方法采用免疫组化S-P法分别检测p21及hnRNP A2/B1在81例颅咽管瘤中的表达,分别计数p21标记指数(p21 LI)和hnRNP A2/B1标记指数(hnRNP A2/B1 LI),对检测结果进行统计学分析。结果①hnRNP A2/B1主要在颅咽管瘤细胞的核中表达,部分在胞浆中表达,造釉细胞型颅咽管瘤的hnRNP A2/B1 LI(51.723±8.313)%显著高于鳞状乳头型(45.347±7.513)%,P<0.05;②p21在颅咽管瘤细胞核中表达,鳞状乳头型颅咽管瘤中的p21 LI(34.047±6.772)%显著高于造釉细胞型肿瘤(28.235±4.600)%,P<0.05;③p21及hnRNPA2/B1之间在颅咽管瘤中的表达呈负相关(r=-0.238)。结论p21及hnRNP A2/B1在不同类型颅咽管瘤中的表达分别呈明显的差异性。造釉细胞型颅咽管瘤细胞活跃的增殖能力,可能是影响其预后的重要机制之一。

核内不均一核糖核蛋白A2/B1在子宫内膜异位症组织中的表达

目的:研究核内不均一核糖核蛋白A2/B1(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A2/B1,hnRNP A2/B1)在正常子宫内膜、子宫内膜异位症(EMs)患者在位内膜、患者异位内膜间的表达差异。方法:用免疫组织化学法和Western blot分析,研究3例增生中晚期正常子宫内膜、3例增生中晚期EMs患者的在位内膜和异位内膜中,hnRNP A2/B1蛋白的表达差异。结果:hnRNP A2/B1主要表达于间质和腺上皮细胞的细胞核内,且EMs患者在位内膜和异位内膜中的表达强度,均低于正常内膜中的表达(P<0.05);而患者在位内膜和异位内膜中的表达,无明显差异(P>0.05)。结论:hnRNP A2/B1可能参与EMs的发生和发展。

核内不均一核糖核蛋白A2/B1及p53蛋白诊断肺癌的价值

目的探讨检测支气管肺泡灌洗液(BALF)脱落细胞中核内不均一核糖核蛋白(hnRNP)A2/B1和血细胞中p53蛋白在肺癌诊断中的价值。方法收集经病理确诊的肺癌患者30例BALF,以30例肺部良性疾病患者BALF为对照组,采用流式细胞术(FCM),检测两组患者BALF脱落细胞中hnRNPA2/B1表达率及血中p53蛋白表达率。结果肺癌组hnRNPA2/B1为(74.04±22.34)%显著高于肺部良性疾病组(28.03±9.01)%(P<0.01);hnRNPA2/B1水平与非小细胞肺癌临床TNM分期无关(P>0.05)。肺癌组p53蛋白水平为(2.16±1.88)%显著高于肺部良性疾病组(0.93±0.51)%(P<0.01);hnRNPA2/B1和p53蛋白诊断肺癌的敏感性分别为86.7%、70.0%,特异性为96.7%、83.3%;联合检测hnRN-PA2/B1和p53的敏感性为93.3%,特异性为100%。结论hnRNPA2/B1和血细胞中p53蛋白水平对肺癌有辅助诊断价值,尤其对早期肺癌的诊断有重要意义,两种指标联合检测可提高诊断敏感性。

非小细胞肺癌hnRNP A2/B1免疫组化及定量测定的临床意义

目的 :探讨 hn RNP A2 / B1对非小细胞肺癌 (NSCL C)的诊断价值及与 NSCL C临床病期、淋巴结转移的关系。方法 :标本系胸外科手术切除的石蜡包埋组织或新近手术切除标本 ,其中原发性 NSCL C39例、肺良性肿瘤 2 2例、正常肺 5 0例 ,各组年龄、性别均具可比性。采用免疫组化 S- P法和流式细胞术 (FCM)分别检测肺组织 hn RNP A2 / B1的表达及细胞内 hn RNPA2 / B1的含量。 结果 :(1) NSCL C组 hn RNP A2 / B1免疫组化表达阳性率 (74 .4 % )显著高于肺良性肿瘤组 (4 0 .1% ,P<0 .0 1)及正常肺组 (38.0 % ,P<0 .0 1) ,NSCL C组中有淋巴结转移者阳性率 (94 .7% )明显高于无淋巴结转移者 (5 5 .0 % ,P<0 .0 5 ) ;(2 ) NSCL C细胞内 hn RNP A2 / B1定量测定含量 (6 7.2 5± 14 .0 2 ,阳性率 82 .1% )显著高于肺良性肿瘤细胞 (31.79±6 .79,阳性率 4 .5 % ,P<0 .0 1)及正常肺细胞 (30 .15± 5 .85 ,阳性率 0 ,P<0 .0 1) ,NSCL C组中有淋巴结转移者阳性率 (10 0 % )明显高于无淋巴结转移者 (6 5 .0 % ,P<0 .0 5 )。 结论 :hn RNP A2 / B1对 NSCL C的诊断、病情预测、判断淋巴结转移的程度均具有重要的临床价值。 FCM与免疫组化方法相比 ,具有阳性率高、简便、快速等优点。

痰脱落细胞hnRNPA2/B1检测对肺癌诊断价值的探讨

目的:检测痰脱落细胞hnRNPA2/B1在肺癌诊断中的敏感性和特异性,探讨其对肺癌诊断价值。方法:采用免疫细胞化学染色方法,利用单克隆抗体检测临床可疑肺癌患者痰脱落细胞中hnRNPA2/B1的表达情况。结果:痰脱落细胞hnRNPA2/B1免疫细胞化学检查的敏感性为80.8%(21/26),特异性为78.9%(15/19),显著优于常规细胞学检查。结论:hnRNPA2/B1检查敏感性、特异性高,可用于肺癌的辅助诊断。

hnRNP A2/B1在肺癌组织中的表达及其临床意义

目的 观察hnRNPA2/B1在肺癌中的表达,探讨hnRNPA2/B1对肺癌的诊断价值及其与组织类型、临床分 期、吸烟的关系。方法 采用免疫组织化学染色方法检测41例肺癌、13例非肺癌组织中hnRNPA2/B1的表达情况。结果 hnRNPA2/B1免疫组化肺癌组染色阳性率为85.4%(35/41),明显高于非肺癌组30.8%(4/13),两组间有非常显著性差 异(P<0.01)。其在胞浆、胞核均有表达,主要在胞浆表达。4种类型肺癌组织均显示hnRNPA2/B1阳性染色,其中鳞癌细 胞染色阳性率为86.9%(20/23),较腺癌细胞78.6%(11/14)高,两组间无显著性差异(P>0.05)。Ⅲ Ⅳ期肺癌hnRNP A2/B1染色阳性率为88.9%(24/27),高于Ⅰ Ⅱ期肺癌76.9%(10/13),两组间差异不显著(P>0.05)。有吸烟史组hnRNP A2/B1染色阳性率为80.0%(32/40)明显高于无吸烟史组50.0%(7/14),两组间差异显著(P<0.05)。结论 hnRNPA2/B1 与肺癌组织类型、临床病理分期无关,但与吸烟密切相关。hnRNPA2/B1检查敏感性、特异性高,可用于肺癌的辅助诊断。

痰中检测核不均一核糖核蛋白A2/B1早期诊断肺癌的意义

目的:探讨检测痰中核不均一核糖核蛋白A2/B1(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A2/B1,hnRNP A2/B1)在肺癌早期诊断中的意义。方法:收集63例疑诊肺癌患者的痰标本,分别采用痰涂片、痰细胞块切片细胞学检查(镜检找到癌细胞即诊断为肺癌)及痰细胞块切片免疫组织化学检测hnRNP A2/B1(表达阳性即诊断为肺癌)进行诊断,比较2种诊断方法的结果。结果:痰涂片及痰细胞块切片细胞学检查诊断肺癌的敏感度为31.8%,特异度为100%。痰细胞块检测hnRNP A2/B1诊断肺癌的敏感度为80%,特异度为68.4%。检测痰hnRNP A2/B1的敏感度显著高于痰细胞学检查(P<0.01)。结论:痰细胞块结合免疫组织化学法检测hnRNP A2/B1有助于发现早期肺癌。

hnRNP A2/B1在胃癌中的表达及其临床意义

目的:在既往的胃癌蛋白质组研究中我们已发现hnRNP A2/B1具有较高表达,本试验进一步探讨hnRNPA2/B1在胃癌中的表达情况及其与胃癌临床病理特征的关系。方法:用免疫组织化学方法检测122例胃癌患者的胃癌组织及癌旁正常胃粘膜中hnRNP A2/B1蛋白的表达。结果:hnRNP A2/B1在胃癌组织中核表达的阳性率为92.6%(113/122),其中伴有胞浆表达的阳性率为7.3%(9/122)。在癌旁非瘤组织中核表达阳性率为87.7%(107/122),未见胞浆表达。hnRNP A2/B1的表达状态与胃癌临床病理特征无关联。结论:在胃癌及癌旁非瘤组织中均可发现hnRNP A2/B1核表达,hnRNP A2/B1不能作为肿瘤相关的分子标志物。

异质性胞核核糖核蛋白A2/B1 hnRNP A2/B1基因克隆及其在滑膜组织中的表达

目的获得hnRNPA2/B1cDNA序列,研究其在滑膜组织中的表达水平,探讨它在类风湿滑膜炎中可能的致病作用。方法从人外周血单个核细胞中提取总RNA进行逆转录反应,经PCR扩增目的片段,将其克隆于PUC-T1质粒上,并经酶切电泳、DNA测序鉴定分析。采用免疫组化和原位杂交方法,分别利用单克隆抗体和特异的cDNA探针,检测滑膜组织中hnRNPA2/B1的含量及表达水平。结果从人外周血单个核细胞总RNA中扩增得到目的片段,并经测序证实该片段为hnRNPA2/B1的编码序列。免疫组化和原位杂交显示hnRNPA2/B1在类风湿关节炎(RA)滑膜中的表达水平整体上较骨关节炎(OA)和正常对照滑膜组高(P<0.05)。结论成功克隆hnRNPA2/B1cDNA;初步证明hnRNPA2/B1水平在RA关节局部增高,推测它可能参与了类风湿滑膜炎的发病。

检测核不均一核糖核蛋白A2/B1在胸水细胞学鉴别诊断中的意义

目的:观察核不均一核糖核蛋白A2/B1(hnRNPA2/B1)在胸水转移性肺腺癌细胞和间皮细胞中的表达,评价其用于两者鉴别诊断的价值。方法:采用细胞块技术对100例胸水进行免疫组织化学检测,观察hnRNPA2/B1在肺腺癌细胞和间皮细胞中的表达。结果:hnRNPA2/B1标记肺腺癌细胞的敏感度为100%,特异度为70%。结论:检测hnRNPA2/B1对鉴别胸水肺腺癌细胞和间皮细胞很有帮助。

痰液hnRNP A2/B1在肺癌临床诊断中的价值

目的探讨痰液细胞核内不均一核糖核蛋白A2/B1(hnRNPA2/B1)在肺癌临床诊断中的价值。方法应用免疫组织化学SP法分别检测肺癌、吸烟及正常人群组痰液细胞hnRNPA2/B1阳性表达,并分析其在不同人群组中表达的特点。结果肺癌组及吸烟组痰液细胞hnRNPA2/B1阳性表达率显著高于正常人组(P<0·05),肺癌与吸烟组比较无显著性差异(P>0·05)。结论痰液hnRNPA2/B1的过量表达伴随着肺癌的发生、发展、转移的全过程。因此检测痰液细胞(特别是吸烟者)hnRNPA2/B1阳性表达,有助于肺癌的早期诊断。

支气管肺泡灌洗液hnRNPA2/B1、NSE和CEA联合检测在肺癌患者中的临床意义

目的探讨支气管肺泡灌洗液(BALF)中异质性胞核核糖核蛋白A2/B1(hn RNPA2/B1)、神经元烯醇化酶(NSE)和癌胚抗原(CEA)水平测定在肺癌患者中的临床意义。方法对该院2006年1月～2009年6月之间88例肺癌病人(实验组)及68例肺良性疾病患者(对照组)行BALF中hn RNPA2/B1、NES和CEA的水平测定。结果肺癌组BALF中hn RNPA2/B1、NES和CEA明显高于肺良性疾病组(hnRNPA2/B1:(78.82±4.50)vs(32.43±4.73),P=0.0001;NSE:(28.92±2.84)vs(11.66±1.58),P=0.0008;CEA:(54.82±5.50)vs15.84±2.63,P=0.0002),差异有统计学意义(P<0.05),三项联合检测可明显提高肺癌阳性检出率(P<0.05)。hnRNPA2/B1及CEA非小细胞癌明显高于小细胞癌(P<0.05),NSE在小细胞癌中明显高于非小细胞癌(P<0.05),NSE在小细胞癌中明显高于非小细胞癌(P<0.05)。结论 hnRNPA2/B1、NSE和CEA与肺癌的病情变化呈负相关,联合应用可提高其敏感性,尤其在支气管肺泡灌洗液中更为敏感,对肺癌患者早期诊断、病情动态变化、判断预后有一定的参考价值。

非小细胞肺癌患者癌组织、外周血中hnRNP A2/B1 mRNA的表达变化

目的观察非小细胞肺癌(NSCLC)组织与外周血中异质性胞核核糖核蛋白A2/B1(hnRNP A2/B1)mR-NA表达变化,并探讨其临床意义。方法采用RT-PCR法检测57例NSCLC患者(肺癌组)癌组织与外周血单个核细胞中的hnRNP A2/B1 mRNA,以30例肺部良性病变患者(良性组)为对照。结果肺癌组癌组织与外周血单个核细胞中hnRNP A2/B1 mRNA分别为(0.82±0.49)、(0.69±0.48)μg/μL,良性组分别为(0.16±0.25)、(0.13±0.20)μg/μL;两组比较,P均<0.05。NSCLC患者TNM分期Ⅰ～Ⅱ期者癌组织与外周血单个核细胞中hnRNP A2/B1 mRNA分别为(0.68±0.45)、(0.57±0.47)μg/μL,均低于Ⅲ～Ⅳ期的(0.93±0.49)、(0.78±0.4)μg/μL,P均<0.05。NSCLC患者癌组织与外周血单个核细胞中hnRNP A2/B1 mRNA的表达呈正相关(r=0.941,P<0.05)。结论 NSCLC患者癌组织与外周血单个核细胞中hnRNP A2/B1 mRNA表达增加,且二者呈正相关关系;外周血单个核细胞hnRNP A2/BmRNA检测有助于NSCLC的诊断及病理分期。

用生物信息学方法克隆大鼠核不均一核蛋白A2/B1基因

采用外显子预测、序列匹配、序列拼接等生物信息学方法电子克隆了一个在大鼠心肌缺血预适应中表达上调的表达序列标签所代表的核不均一核蛋白A2/B1基因,用逆转录聚合酶链反应证实了该基因的开放阅读框。它的开放阅读框为1026 bp,由10个外显子构成,推测编码341个氨基酸。它的编码区与人和小鼠的核不均一核蛋白A2/B1基因分别有92％和95％的一致性,蛋白质序列的一致性几乎为100％。这些结果表明核不均一核蛋白A2/B1基因在不同物种间高度保守,它在大鼠心肌缺血预适应中表达上调,可能在缺血预适应的内源性保护机制中发挥了重要的作用。

hnRNP A2/B1基因克隆及在肺癌组织中表达的初步探讨

背景与目的目前肺癌治疗中存在无早期特异性诊断指标的难题。本研究旨在获得hnRNPA2/B1cDNA序列,研究其在肺癌组织中的表达情况,为肺癌早期诊断治疗提供实验依据。方法从培养的A549肺腺癌细胞中提取总RNA进行逆转录反应,经PCR扩增目的片段,将其克隆于PUCm-T质粒上,并经酶切电泳、DNA测序鉴定分析。采用原位杂交方法,利用特异的cDNA探针,检测41例肺癌、13例非肺癌组织中hnRNPA2/B1的表达情况。结果从培养的A549肺腺癌细胞提取的总RNA中扩增到目的片段,并经测序证实该片段为hnRNPA2/B1编码序列。原位杂交显示肺癌组hnRNPA2/B1阳性率为87.8%(36/41),显著高于非肺癌组23.1%(3/13)(P<0.01)。其在胞浆、胞核均有表达,主要在胞浆表达。四种类型肺癌组织均显示hnRNPA2/B1阳性染色,其中鳞癌细胞染色阳性率为91.3%(21/23),似高于腺癌细胞78.6%(11/14),但两组间无显著性差异(P>0.05)。结论hnRNPA2/B1可以被成功克隆。初步证实hnRNPA2/B1在肺癌组织中呈高表达,但与肺癌组织类型无明显关系。

HnRNP A2/B1短发夹环RNA重组体的构建与序列分析

目的:利用RNA干扰(RNAinterfering,RNAi)技术构建HnRNPA2/B1重组质粒,并行序列分析。方法:分别将21bP长短的HnRNPA2/B1靶序列,中间为7bP序列间隔的反向重复序列,置入PsiRNA-hH1neoG2质粒中,产生重组质粒PSiRNA-hH1neoG2HnRNPA2/B1。结果:将重组质粒作测序分析,经测序鉴定确定为所需序列。结论:特异性短发夹环RNA(ShRNA)真核表达载体PSiRNA-hH1neoG2HnRNPA2/B1的成功构建,为进一步研究其基因功能奠定基础。