抑制lncRNA TUG1下调核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白1炎症小体在延缓阿尔茨海默病进展的作用

目的探讨敲低长链非编码RNA(lncRNA)牛磺酸上调基因1(TUG1)抑制核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白1(NLRP1)炎症小体在缓解阿尔茨海默病进展中的作用。方法选取9~10周龄遗传背景为C57/BL6的野生型小鼠(WT组,10只)或淀粉样前体蛋白(APP)/早老素1(PS1)转基因小鼠(30只)。APP/PS1转基因小鼠随机分为模型(model)组,模型+敲低lncRNA TUG1组[model+lncRNA TUG1短发夹RNA(shRNA)组]和model+shRNA非靶标(NT)组,每组10只。分别采集12周龄第1天(3月龄)和32周龄第1天(8月龄)小鼠外周血和脑皮质组织,并分离皮质中的原代小胶质细胞和原代星形胶质细胞,每个时间点每组5只小鼠。Real-time PCR分别测定3月龄和8月龄上述4个分组小鼠脑皮质组织和原代小胶质细胞中lncRNA TUG1和巨噬细胞移动抑制因子(MIF)mRNA的水平,以及原代星形胶质细胞中补体蛋白C1r和C1s mRNA的水平。ELISA法测定其外周血浆中MIF含量。对3月龄和8月龄小鼠脑皮质原代小胶质细胞和原代星形胶质细胞共培养。CCK-8法测定上述2种细胞的增殖能力。Western blotting分别测定3月龄和8月龄上述4个分组小鼠脑皮质组织中MIF、白细胞介素1β前体(pro-IL-1β)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、Caspase-1(p20)、Caspase-1(full)、NLRP1及NLRP3蛋白的表达水平。采用免疫荧光染色法测定8月龄各分组小鼠脑皮质组织中β淀粉样蛋白(Aβ)表达。结果3月龄和8月龄时,与WT组小鼠相比,model组小鼠脑皮质组织和原代小胶质细胞中lncRNA TUG1和MIF相对表达水平显著上调,原代小胶质细胞和原代星形胶质细胞增殖能力增强(P<0.05)。与model组相比,model+lncRNA TUG1 shRNA组小鼠脑皮质组织和原代小胶质细胞中lncRNA TUG1和MIF的相对表达水平显著降低,原代小胶质细胞和原代星形胶质细胞增殖能力降低(P<0.05)。与WT组相比,model组小鼠外周血浆中MIF含量显著升高;小鼠脑皮质组织中pro-IL-1β、ASC、Caspase-1(p20)、Caspase-1(full)、NLRP1以及NLRP3的蛋白表达水平显著升高;Aβ免疫荧光强度明显增强(P<0.05)。与model组相比,model+lncRNA TUG1 shRNA组小鼠外周血浆中MIF含量显著降低;小鼠脑皮质组织中pro-IL-1β、ASC、Caspase-1(p20)、Caspase-1(full)和NLRP1的蛋白表达水平显著降低,Aβ免疫荧光强度明显降低(P<0.05),而NLRP3蛋白质的表达水平无明显变化(P>0.05)。与model组相比,model+shRNA NT组小鼠上述所有检测指标差异均无显著性(P>0.05)。结论APP/PS1转基因小鼠脑皮质组织和原代小胶质细胞中lncRNA TUG1和MIF因子表达上调与脑皮质内NLRP1炎症小体激活成正相关,敲低lncRNA TUG1可缓解阿尔茨海默病的进展。

锚蛋白重复序列和细胞因子信号传导抑制因子盒蛋白13通过锌指家族核转录因子2/溶质载体家族7成员11介导的铁死亡促进动脉粥样硬化的机制研究

目的探讨锚蛋白重复序列和细胞因子信号传导抑制因子盒蛋白13(ASB13)在动脉粥样硬化(AS)进展中的作用和分子机制。方法将载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠随机分为对照组、AS组、sh-NC组、sh-ASB13组和sh-ASB13+sh-锌指家族核转录因子2(SNAI2)组。对照组小鼠给予标准饮食,其余4组均给予高脂饮食,饲喂8周。细胞实验1将HUVECs分为细胞对照组、ox-LDL组、ox-LDL+si-NC组、ox-LDL+si-ASB13组和ox-LDL+si-ASB13+Erastin组。细胞实验2将HUVECs分为ox-LDL+si-NC组、ox-LDL+si-SNAI2组和ox-LDL+si-ASB13+si-SNAI2组。采用HE染色评估组织病理学变化;采用CCK-8分析细胞活力;采用Western blot检测ASB13、SNAI2、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、GPX4蛋白表达水平;采用生化检测试剂盒检测脂质代谢物和Fe2+水平。结果动物实验结果表明,与对照组比较,AS组小鼠血清HDL-C水平及主动脉组织中SLC7A11和GPX4蛋白表达水平均降低,LDL-C、TC、TG、Glu和Fe2+水平及主动脉组织中ASB13蛋白表达水平均升高(P<0.05)。与sh-NC组比较,ASB13敲低抑制AS小鼠的动脉粥样硬化斑块形成,SNAI2敲低则作用相反。细胞实验结果表明,与细胞对照组比较,ox-LDL处理降低HUVECs细胞活力,升高ASB13蛋白表达水平,促进脂质积累和铁死亡;沉默ASB13升高细胞活力,减少脂质积累和铁死亡(P<0.05)。ASB13泛素化降低SNAI2蛋白表达水平,SNAI2与SLC7A11启动子结合促进其转录激活,上调SLC7A11蛋白表达水平。与ox-LDL+si-NC组比较,沉默SNAI2或铁死亡诱导剂Erastin处理逆转了ASB13沉默对HUVECs的保护作用(P<0.05)。结论ASB13可能通过SNAI2/SLC7A11介导的铁死亡促进AS发生与发展。

肝素结合蛋白、核因子κB亚基p65及神经元特异性烯醇化酶与心脏骤停患者预后的相关性

目的分析心肺复苏(CPR)患者血清肝素结合蛋白(HBP)、核因子κB(NF-κB)亚基p65及神经元特异性烯醇化酶(NSE)对预后的影响。方法收集2020年9月至2022年9月杭州师范大学附属医院急诊重症监护室接受治疗的心脏骤停(CA)患者,经CPR后,将满足入选条件且存活超过48 h的CPR患者纳入分析,根据患者入院治疗1个月后格拉斯哥-匹兹堡脑功能表现分级(CPC)分为预后良好组(CPC评分1~2级)和预后不良组(CPC评分3~5级),并记录两组性别、年龄、基础疾病及CA原因。同时,分别于自主循环恢复(ROSC)即刻、ROSC后6 h、12 h、24 h、48 h五个时间点采集其外周血,监测CPR患者血清HBP、NF-κB亚基p65、NSE的变化,分析HBP、NF-κB亚基p65及NSE与急性生理与慢性健康状况(APACHE)Ⅱ评分、格拉斯哥昏迷评分(GCS)的相关性,并采用ROC曲线分析判断HBP、NF-κB亚基p65及NSE对CPR预后的影响。结果最终共有30例患者CPR成功并存活超过48 h。其中预后良好组11例,预后不良组19例。预后不良组HBP、NF-κB亚基p65、NSE、APACHEⅡ评分较预后良好组升高,预后良好组GCS评分高于预后不良组,差异具有统计学意义(P<0.05)。HBP、NF-κB亚基p65、NSE在CPR后分别在ROSC后6 h、12 h、24 h达到最高峰。血清HBP、NF-κB亚基p65、NSE均与APACHEⅡ评分呈正相关(P<0.01),与GCS评分呈负相关(P<0.01)。ROC曲线分析显示HBP、NF-κB亚基p65、NSE判断CPR预后AUC分别为0.871、0.579、0.802,敏感度分别为96.3%、81.1%、93.8%,特异度分别为91.1%、78.2%、97.8%,提示HBP、NF-κB亚基p65及NSE均可预测CPR患者预后的严重程度。HBP、NF-κB亚基p65、NSE联合预测CPR患者预后不良的AUC和敏感度分别为0.953、97.7%,均高于单一指标预测(P<0.05)。结论CA患者CPR后出现不同程度的炎症反应和神经功能损伤,HBP、NF-κB亚基p65及NSE可用于早期评估复苏后患者病情严重程度及判断预后,且三者联合价值更高。

A20结合核因子抑制蛋白的抗体制备及鉴定

目的获得A20结合核因子抑制蛋白(A20 binding inhibitor of NF-κB activation,ABIN1)的多克隆抗体。方法利用钥孔虫戚血蓝蛋白(KLH)偶联肽段为抗原免疫新西兰兔,获得抗血清。分别用ELISA、免疫荧光法和Western印迹检测对抗体进行鉴定。结果与结论成功制备出兔抗人ABIN1抗血清,为进一步研究ABIN1的生物学功能提供了工具。

抗CCL20单克隆抗体对血清淀粉样蛋白A相关的结节病中促炎性细胞因子的抑制作用

目的探讨抗CCL20单克隆抗体是否可抑制高水平血清淀粉样蛋白A(SAA)相关的结节病外周血单个核细胞(PBMC)中促炎性细胞因子的表达。方法提取健康人和结节病患者的PBMC,并进行分组。除空白对照组(正常人PBMC)和结节病PBMC对照组(患者PBMC)外,另将结节病组PBMC中分别加入SAA、SAA+抗CCL20单克隆抗体、SAA+NF-κB抑制剂BAY11-7082或地塞米松,经培养48 h后收集各组细胞,分别作为PBMC+SAA刺激组、PBMC+SAA+NF-κB抑制剂BAY11-7082组、PBMC+SAA+抗CCL20单抗组、PBMC+地塞米松干预组,使用ELISA分别测定各组细胞上清液中细胞因子IL-17A、IL-23、IL-6、CCL20和TGF-β1的表达,使用RT-PCR测定各组细胞中CCR6、IL-17、ROR-γt和Foxp3的mRNA表达水平,使用Western blot检测各组细胞中p-NF-κB和NF-κB蛋白的表达水平。结果PBMC+SAA+抗CCL20单抗组与PBMC+SAA组相比,细胞上清液中的IL-17A、IL-23和IL-6的水平显著降低(P<0.01),而TGF-β1的含量显著升高(P<0.01)。PBMC+SAA+抗CCL20单抗组相较于PBMC+SAA组,细胞中CCR6、IL-17A、ROR-γtmRNA水平显著降低(P<0.01),而Foxp3 mRNA差异无统计学意义(P>0.05)。PBMC+SAA+抗CCL20单抗组中p-NF-κB蛋白表达水平较PBMC+SAA组明显降低(P<0.01)。结论抗CCL20单克隆抗体可抑制高水平SAA相关的结节病PBMC中促炎性细胞因子的表达。

急性药物性肝损伤患者血清核因子E2相关因子2、血红素加氧酶-1、脂肪酸结合蛋白4、缺氧诱导因子1α表达意义及其与肝功能指标相关性研究

目的:探讨急性药物性肝损伤患者血清核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)、脂肪酸结合蛋白4(FABP4)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)表达意义及其与肝功能指标的相关性。方法:回顾性选取62例急性药物性肝损伤患者的临床资料作为病例组,另选80例健康体检者的临床资料作为对照组。比较两组血清Nrf2、HO-1、FABP4、HIF-1α及肝功能指标水平,用Pearson相关性分析急性药物性肝损伤患者血清Nrf2、HO-1、FABP4、HIF-1α水平与肝功能的相关性,并绘制受试者工作特征曲线(ROC)分析血清Nrf2、HO-1、FABP4、HIF-1α水平联合检测对急性药物性肝损伤的诊断价值。结果:病例组血清Nrf2、HO-1、FABP4、HIF-1α及谷丙转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、谷草转氨酶(AST)、谷氨酰转移酶(GGT)、总胆红素(TBIL)水平高于对照组(均P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,急性药物性肝损伤患者血清Nrf2水平与血清ALT、AST、TBIL水平呈负相关(r=-0.763、-0.741、-0.685,均P<0.05);血清HO-1水平与血清ALT、AST、TBIL水平呈负相关(r=-0.489、-0.524、-0.568,均P<0.05);血清FABP4水平与血清AST、TBIL水平呈正相关(r=0.509、0.512,均P<0.05);血清HIF-1α水平与血清ALT、AST、TBIL水平呈正相关(r=0.527、0.486、0.542,均P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清Nrf2、HO-1、FABP4、HIF-1α水平联合检测诊断急性药物性肝损伤的曲线下面积(AUC)值为0.919,高于血清Nrf2、HO-1、FABP4、HIF-1α水平单独检测(0.787、0.822、0.824、0.772,均P<0.05)。结论:血清Nrf2、HO-1、FABP4、HIF-1α在急性药物性肝损伤患者中呈高表达,其表达水平与患者肝功能损伤有关,且四者联合检测对急性药物性肝损伤的诊断价值更高。

刺槐素通过核因子κB信号通路抑制脂多糖诱导的巨噬细胞损伤

目的:探讨刺槐素(Acacetin)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠骨髓巨噬细胞(BMDMs)的抗炎作用机制。方法:CCK-8法检测各浓度刺槐素(5μmol/L,10μmol/L,20μmol/L,40μmol/L)对小鼠骨髓巨噬细胞增殖的影响,筛选最佳剂量;分离培养小鼠骨髓巨噬细胞,LPS(50 ng/mL)预处理BMDMs(0 min,10 min,30 min,60 min),加入刺槐素(10μmol/L)孵育0.5 h。蛋白质印迹法检测p65、磷酸化p65(p-p65)、核因子κB抑制蛋白α(IκBα)、磷酸化IκBα(p-IκBα)的表达,激光共聚焦观察核因子κB核转位情况。结果:CCK-8结果显示,5~40μmol/L的刺槐素对小鼠骨髓巨噬细胞增殖无明显影响,结合课题组前期研究结果,选择10μmol/L刺槐素作为后续研究剂量;与空白对照组比较,LPS不同时间刺激组p-p65、p-IκBα的表达水平均显著增加,给予刺槐素治疗后,能显著降低p-核因子κB p65和p-IκBα的表达;刺槐素能抑制LPS介导的核因子κB p65核转位。结论:刺槐素的抗炎作用与抑制核因子κB信号通路有关,刺槐素可作为一种有潜力的候选抗炎药物。

与A20结合的核因子-κB抑制蛋白1的研究进展

与A20结合的核因子κB抑制蛋白1(A20 binding inhibitor of NF-κB activation,ABIN1)是近年来研究发现的一个新泛素结合蛋白。最初的研究表明,ABIN1通过结合锌指结构蛋白A20在NF-κB信号通路中发挥重要的调节作用。目前发现,ABIN1在过表达的条件下能抑制肿瘤坏死因子、白细胞介素1、脂多糖、表皮生长因子等诱导的NF-κB的活性,从而发挥抗炎和免疫调节作用。因此,以ABIN1为新靶点调节NF-κB活性的研究日益受到关注。本文就ABIN1蛋白结构、功能及其研究进展做一综述。

尿液胰岛素样生长因子结合蛋白-7与金属蛋白酶组织抑制剂-2在脓毒症急性肾损伤中的应用价值

目的分析尿液胰岛素样生长因子结合蛋白-7(IGFBP-7)和金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)在脓毒症急性肾损伤(AKI)中的早期预测价值。方法选取2020年1月—2021年12月山西省人民医院急诊科监护室收治的脓毒症患者58例,并根据KDIGO的诊断标准分成脓毒症AKI组22例和非AKI组36例。分别在入组后0 h、24 h、48 h、72 h采集患者尿液及血液标本,并检测血肌酐(SCr)与尿IGFBP-7、TIMP-2水平。分析SCr、尿IGFBP-7、TIMP-2与脓毒症AKI的相关性。受试者工作特征曲线(ROC)分析SCr、尿IGFBP-7及TIMP-2在脓毒症早期急性肾损伤中的诊断价值。结果与非AKI组比较,AKI组各时点SCr、尿IGFBP-7、尿TIMP-2水平均升高,差异具有统计学意义(F/P=147.848/<0.001、330.849/<0.001、136.777/<0.001)。SCr与尿IGFBP-7、尿TIMP-2均呈正相关(r/P=0.680/<0.001,0.392/0.002),尿IGFBP-7与尿TIMP-2呈正相关(r/P=0.618/<0.001)。ROC曲线分析显示,SCr、尿IGFBP-7、尿TIMP-2及尿IGFBP-7联合TIMP-2预测脓毒症AKI的曲线下面积(AUC)分别为0.586、0.907、0.738、0.914,尿IGFBP-7、尿IGFBP-7联合TIMP-2优于SCr(Z/P=4.117/<0.001,4.196/<0.001);尿IGFBP-7、尿IGFBP-7联合TIMP-2优于尿TIMP-2(Z/P=2.663/0.008,3.378/0.008)。结论尿IGFBP-7、尿TIMP-2与尿IGFBP-7联合TIMP-2均可以作为早期预测脓毒症急性肾损伤发生的指标,且尿IGFBP-7、尿IGFBP-7联合TIMP-2的预测价值优于尿TIMP-2。

膀胱癌细胞中锌指蛋白A20对核转录因子κB抑制的机制探讨

目的 为了探讨锌指蛋白A2 0在膀胱癌细胞中抑制核转录因子κB(NuclearTranscriptionFactorKappaB ,NF κB)作用的可能机制。方法 转染绿色荧光蛋白融合的A2 0质粒 (GreenFluorescentProteinfusedA2 0 ,GFP A2 0 )和A2 0显性失活突变体质粒 [GFP A2 0 (1- 36 8) ]入膀胱癌细胞T2 4 ,荧光显微镜观察质粒在细胞中表达情况 ,RT PCR检测肿瘤坏死因子受体I(Tu morNecrosisFactorReceptorⅠ ,TNFRⅠ )、核转录因子κB受体激活子配体 (ReceptorActivatorofNF κBLigand ,RANKL)、NF κB抑制蛋白ⅠκBα的mRNA表达变化。结果 转染 2 4h后 ,质粒在细胞中稳定表达 ,4 8h后表达继续增加。转染A2 0质粒或A2 0显性失活突变体质粒 2 4h及 4 8h后 ,TNFRⅠ和RANKLmRNA表达无明显变化 (P >0 .0 5 )。而在这两个时间点处 ,A2 0质粒转染可明显抑制细胞内ⅠκBαmRNA的表达 ;A2 0质粒处理组与未处理组之间、A2 0质粒转染组与显性失活突变体质粒转染组之间差异均有显著性 (P <0 .0 1)。结论 A2 0作用于TNFR的下游对NF κB起抑制作用 ,ⅠκBαmRNA可能作为NF κB报告基因受A2 0抑制。

巨噬细胞抑制因子-1、胰岛素样生长因子结合蛋白3、糖类抗原19-9检测对胰腺癌患者预后的预测价值

目的探讨糖类抗原19-9(CA19-9)、胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP3)、巨噬细胞抑制因子-1(MIC-1)检测对胰腺癌患者预后的预测价值。方法选取82例胰腺癌患者作为观察组,另选取81例健康体检志愿者作为对照组。对比两组受试者MIC-1、IGFBP3、CA19-9水平,分析胰腺癌患者预后的影响因素和MIC-1、IGFBP3、CA19-9单独及联合检测对胰腺癌患者预后的预测价值。结果观察组患者MIC-1、IGFBP3、CA19-9水平均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。82例胰腺癌患者根据预后情况分为好转组61例与预后不良组21例,好转组与预后不良组患者分化程度、临床分期、淋巴结转移情况及MIC-1、IGFBP3、CA19-9水平比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。分化程度为低分化、临床分期为Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移、MIC-1≥500 pg/ml、IGFBP3≥40 U/ml、CA19-9≥40 U/ml均为胰腺癌患者预后不良的独立危险因素(P﹤0.05)。MIC-1、IGFBP3、CA19-9联合检测预测胰腺癌患者预后的灵敏度和特异度分别为87.4%、71.9%,曲线下面积为0.816(95%CI:0.715~0.917),高于MIC-1、IGFBP3、CA19-9单独检测。结论MIC-1、IGFBP3、CA19-9水平升高均与胰腺癌患者预后不良密切相关,三者在胰腺癌患者预后预测中有较高的使用价值。

TP53BP2基因真核表达载体的构建及在人胚肾Expi293F细胞中蛋白表达、纯化及活性鉴定

目的构建人肿瘤抑制因子p53结合蛋白2(tumor suppressor p53-binding protein 2,TP53BP2)的重组真核表达载体,转染人胚肾Expi293F细胞,获得高纯度的重组人全长TP53BP2蛋白并对其进行生物学活性鉴定。方法利用UniProt网站查询TP53BP2基因序列,并进行Expi293F表达系统序列优化,通过同源重组连接至pcDNA3.1(+)-P2Ae GFP载体并进行双酶切和测序鉴定,通过转染试剂聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)将pcDNA3.1(+)-P2A-eGFPTP53BP2质粒瞬时转染至Expi293F细胞,荧光显微镜观察转染效率,收集实验组及对照组细胞,利用免疫印记试验(Western blot,WB)检测TP53BP2重组蛋白表达水平。通过His标签纯化试剂盒及Superdex 20010/300GL层析柱进行蛋白纯化,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDSPAGE)对纯化后重组蛋白进行鉴定。利用免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation,Co-IP)检测重组人全长TP53BP2蛋白与p65蛋白结合情况。利用免疫荧光(immunofluorescence,IF)检测重组人全长TP53BP2蛋白与p65蛋白共定位。利用表面等离子体共振(surface-plasmon resonance,SPR)技术,检测纯化后的重组人全长TP53BP2蛋白与TP53BP2抗体的相互作用。结果经测序和双酶切鉴定,重组质粒pcDNA3.1(+)-P2A-eGFP-TP53BP2构建成功。经荧光显微镜观察结果显示转染效率约为60%,WB结果表明TP53BP2蛋白在Expi293F细胞中过表达,证明转染成功。SDS-PAGE结果表明纯化后重组蛋白纯度在90%以上,证明纯化成功。Co-IP结果表明,TP53BP2重组蛋白可与p65蛋白相互作用。IF结果表明,His标签蛋白、TP53BP2蛋白及p65蛋白存在共定位,表明三者之间存在相互作用。SPR结果表明,纯化的重组人TP53BP蛋白与TP53BP2抗体具有较好的结合活性。以上结果均证明重组人全长TP53BP2蛋白具有生物学活性。结论成功构建了TP53BP2基因真核表达载体并在人胚肾Expi293F细胞中成功表达出具有生物学活性的重组人全长TP53BP2蛋白,为进一步研究TP53BP2的结构和功能奠定了基础。

辛伐他汀对兔动脉粥样硬化斑块中核因子κB-DNA结合活性和基质金属蛋白酶1及3表达的影响

目的观察辛伐他汀对兔动脉粥样硬化斑块中核因子κB-DNA结合活性和基质金属蛋白酶1及3表达的影响,进一步探讨辛伐他汀降脂效应以外的抗动脉粥样硬化作用机制。方法36只雄性新西兰大耳白兔被随机分为低脂对照组、高脂对照组和辛伐他汀组,喂养12周。实验结束时,分别用酶标法、电泳移动迁移技术、免疫组织化学和形态学方法观察三组兔的血脂水平、主动脉组织中核因子κB-DNA结合活性、基质金属蛋白酶1和3的表达及血管内膜厚度。结果实验结束时,低脂对照组和辛伐他汀组血脂水平、核因子κB-DNA结合活性、基质金属蛋白酶1和3的表达及血管内膜厚度均明显低于高脂对照组(P<0.05);辛伐他汀组血脂水平与低脂对照组相比无明显差异,但核因子κB-DNA结合活性、基质金属蛋白酶1和3的表达及血管内膜厚度均明显低于低脂对照组(P<0.05)。结论辛伐他汀可以抑制核因子κB-DNA结合活性,减弱基质金属蛋白酶1和3的表达,延缓动脉粥样硬化的形成。

脑泰方对局灶性脑缺血大鼠脑组织核因子-κB、基质金属蛋白酶9及其抑制剂表达的影响

目的观察益气活血中药脑泰方对局灶性脑缺血大鼠海马C2区缺血组织基质金属蛋白酶9(MMP-9),核因子-κB(NF-κB)及基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP1)表达的影响,探讨其治疗局灶性脑缺血的机制。方法随机将SD大鼠分为假手术组、模型组及脑泰方低、中、高剂量组(3、9、27 g/kg)。各组大鼠灌胃给药连续3 d,每日1次,预处理后采用大脑中动脉栓塞法(MCAO)制备大鼠局灶性脑缺血模型,术后连续灌胃给药3 d。采用HE染色观察海马C2区细胞,免疫组化法检测海马C2区MMP-9、NF-κB及TIMP1表达。结果脑泰方高剂量组大鼠正常细胞较模型组明显增多,仅少数细胞出现核固缩样改变;脑泰方高、中、低剂量组MMP-9表达明显降低(P<0.05);脑泰方高、中剂量组NF-κB表达明显下降(P<0.05);脑泰方高、中、低剂量组TIMP1表达明显升高(P<0.05)。结论脑泰方干预通过抑制NF-κB、降低MMP-9表达,增强TIMP1表达,保护血脑屏障,减轻脑水肿,对局灶性脑缺血导致的血脑屏障损伤有一定保护作用。

卵巢上皮性癌中Raf激酶抑制蛋白、核因子κBp65蛋白的表达及相关性研究

目的:研究卵巢上皮性癌组织中Raf激酶抑制蛋白(RKIP),核因子κBp65蛋白(NF-κBp65)的表达,探讨两者在卵巢上皮性癌侵袭转移中的作用和机制,分析RKIP表达水平改变对卵巢上皮性癌侵袭能力和NF-κB信号通路活性的影响。方法:应用免疫组织化学染色方法检测76例卵巢上皮性癌组织、35例良性卵巢上皮性肿瘤组织、22例正常卵巢组织中RKIP和NF-κBp65蛋白的表达,并分析不同卵巢组织临床及病理因素之间的关系。结果:卵巢上皮性癌组织中RKIP的表达低于良性卵巢上皮性肿瘤组织及正常卵巢组织,而NF-κBp65的表达高于良性卵巢上皮性肿瘤组织及正常卵巢组织,差异有高度统计学意义(P<0.01);RKIP和NF-κBp65在卵巢上皮性癌中的表达均与肿瘤分化程度、临床分期及有无淋巴结转移有关(P<0.05);卵巢上皮性癌组织中RKIP与NF-κBp65的表达呈负相关(r=-0.582,P<0.01)。结论:RKIP表达的减少或缺失与卵巢上皮性癌的发生、发展密切相关,可能通过上调NF-κBp65的表达促进卵巢上皮性癌的侵袭和转移,其机制可能与活化NF-κB信号通路有关。

右美托咪定对创伤后应激障碍大鼠核因子κB抑制蛋白激酶/核因子κB抑制蛋白α/核因子κB通路及认知功能障碍的影响

目的探讨右美托咪定(DEX)对创伤后应激障碍大鼠(PTSD)核因子κB抑制蛋白激酶(IKK)/核因子κB抑制蛋白α(IκBα)/核因子κB(NF-κB)通路及认知功能障碍的影响。方法将大鼠按照随机数字表法分为空白对照(control)组、模型(model)组、阳性对照(positive)组和DEX组。除control组外,其余各组使用单一延长应激法(SPS)构建PTSD模型,并于模型制作后分别给予相应药物。旷场实验和Morris水迷宫法检测大鼠自主活动和学习记忆能力;HE染色法观察大脑皮层和海马组织病理变化;ELISA和Western blotting检测海马组织白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量及IKK、IκBα、嘌呤能离子通道型受体7(P2X7R)和富含亮氨酸重复结构域蛋白3(NALP3)表达水平;凝胶电泳迁移率转变分析(EMSA)评价NF-κB活性。结果与control组相比,model组大鼠大脑皮层及海马CA1区出现结构紊乱,细胞核固缩等病理变化,大鼠自主活动和学习记忆能力降低(P<0.05),IL-1β、IL-6和TNF-α含量、IKK、IκBα、P2X7R和NALP3表达水平及NF-κB活性升高(P<0.05);与model组相比,positive组和DEX组大鼠大脑皮层及海马CA1区病理现象缓解,上述指标变化均与model组相反(P<0.05)。结论DEX可显著提高PTSD大鼠自主活动和学习记忆能力,减少海马组织炎症反应,改善认知功能障碍,可能与下调IKK/IκBα/NF-κB通路有关。

加味小青龙汤对慢性阻塞性肺疾病大鼠肺组织核转录因子-κB、锌指蛋白A20表达的影响

目的:观察加味小青龙汤对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺组织核转录因子-κB 65(NF-κB65)、锌指蛋白A20蛋白及其基因表达的影响。方法:Wistar大鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、地塞米松和加味小青龙汤组。采用脂多糖气管滴注联合烟熏方法建立COPD大鼠模型,检测支气管肺泡灌洗液中TNF-α、IL-1β含量,检测肺组织NF-κB65、A20蛋白及其基因表达,观察加味小青龙汤对上述指标及肺组织病理形态学变化的影响。结果:与正常组比较,模型组TNF-α、IL-1β、NF-κB和A20蛋白及其基因表达均明显上调;与模型组比较,加味小青龙汤组TNF-α、白介素-1β、NF-κB蛋白表达明显降低,加味小青龙汤组A20基因表达显著上调。病理观察结果显示,与正常组比较,模型组肺组织炎症细胞浸润,管腔中有大量中性粒细胞及黏液聚集,管壁明显增厚,胶原染色显示肺间质纤维组织大量增生;加味小青龙汤组肺组织病理改变明显轻于模型组,加味小青龙汤组肺组织少数呈轻度间质性肺炎,仅见少量的纤维组织增生。结论:加味小青龙汤能够减轻COPD模型大鼠肺组织损伤,对COPD模型肺组织有保护作用,其机理可能与其降低TNF-α和白介素-1β含量、下调NF-κB蛋白表达、上调A20基因表达有关。

热休克蛋白70对感染性脑水肿核转录因子-κB及其抑制蛋白的影响

目的探讨热休克蛋白70(HSP70)对感染性脑水肿大鼠核转录因子κB(NFκB)活化及NFκB抑制蛋白α(IκBα)的影响及意义。方法制备百日咳菌液大鼠感染性脑水肿模型。72只SD大鼠随机分为对照组(NS组)、感染性脑水肿组(BE组)及热休克处理组(HSP组),各组分别于注射百日咳菌液或生理盐水4、8和24h处死,取脑组织,采用Western印迹杂交分析法检测脑组织HSP70及IκBα表达,凝胶电泳迁移率检测法(EMSA)检测神经细胞核提取物NFκB活性。结果在热休克处理后,HSP组各时间点HSP70表达明显增加,与NS组和BE组比较差异均有显著性(P均<0.01)。在BE组各时间点中,NFκB均显示明显的滞留条带,提示NFκB活性明显增强,而IκBα表达则明显减低。HSP组各时间点中,NFκB滞留条带与BE组比较明显减低,而IκBα表达则明显增强。结论HSP70表达增加可抑制NFκB活化及IκBα蛋白降解,提示HSP70对感染性脑水肿具有保护作用,其机制可能与抑制NFκB活化及IκBα蛋白降解有关。

供肝冷保存再灌注期间核因子 NF-κB和抑制蛋白 IκBs的变化及其意义

目的 :研究肝移植期间供肝组织中核因子 NF-κB的激活特征及其活性调控机制。方法 :改良 Kamada法建立大鼠原位肝脏移植模型 ,按供肝在 4℃乳酸林格液中的冷保存时间 ,实验分冷保存 2 h组和 6 h组 ,凝胶迁移率改变分析法 (EMSA)和 Western印迹法测定移植期间不同时相供肝组织中 NF-κB的活性变化及其主要抑制蛋白 IκB-α、IκB-β的表达水平。结果 :两组供肝组织在冷缺血保存期间其 NF-κB活性与正常肝组织相比无明显差异 (P>0 .0 5 ) ,再灌注后 30 m in至 6 h两组的 NF-κB活性均出现显著的诱导激活 (P<0 .0 1) ,其中冷保存 2 h组供肝组织的 NF-κB活性高峰出现在再灌注 1h;而冷保存 6 h组在再灌注 30 min即达到活性高峰 ,并维持在较高的激活水平 ;供肝组织中抑制蛋白 IκB-α的含量显著高于 IκB-β,两组的 IκB-α蛋白在再灌注 30 min至 1h均有明显降解 (P<0 .0 5 ) ,而 IκB-β蛋白仅在冷保存 6 h组有较明显的降解 (再灌注 30 m in)。 结论 :核因子 NF- κB仅在供肝的再灌注早期呈诱导性激活 ,其激活特征与供肝的冷保存再灌注损伤有关 ,抑制蛋白 IκB- α在供肝的 NF-

血清脂肪酸结合蛋白-4和摄食抑制因子-1水平与2型糖尿病患者视网膜病变的相关性分析

目的探讨血清脂肪酸结合蛋白-4(fatty acid binding protein-4,FABP4)和摄食抑制因子-1(Nesfatin-1)水平与2型糖尿病患者视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)的关系。方法选取2014年4月至2016年3月辽宁省铁岭市中心医院收治的2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)住院患者116例,按视网膜病变程度分为无糖尿病视网膜病变组(NDR组)45例、非增殖性视网膜病变组(NPDR组)40例、增殖性视网膜病变组(PDR组)36例。同时选取我院35例健康体检者作为对照组。采用ELISA法检测血清FABP-4与Nesfatin-1浓度,分析其与DR相关性。结果糖尿病患者的收缩压(systolic blood pressure,SBP)、舒张压(diastolic blood pressure,DBP)、空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、甘油三酯(triglyceride,TG)、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)高于对照组,DR患者FBG、糖化血红蛋白(glycated hemoglobin,HbA1c)、高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL-C)、CRP水平高于非DR患者,PDR组患者HbA1c、CRP水平高于NPDR组,差异有显著性(P<0.05)。糖尿病患者的血清FABP4水平低于对照组,DR组患者血清FABP4水平低于非DR患者,PDR组患者血清FABP4水平低于NPDR患者,Nesfatin-1与之相反,差异有显著性(P<0.05)。血清FABP4水平与体重指数、FBG、HbA1c及CRP水平呈正相关(r分别为0.212、0.151、0.097、0.117,P<0.05);血清Nesfatin-1水平与体重指数、FBG、HbA1c及CRP水平呈负相关(r分别为-0.202、-0.172、-0.183、-0.167,P<0.05)。多元logistic回归模型中,校正体重指数、CRP后血清FABP4水平DR的一个危险性因素(OR=1.211,95%CI:1.218~1.324;P<0.001),Nesfatin-1是DR的一个保护性因素(OR=0.972,95%CI:0.934~0.956;P<0.001)。结论血清FABP4浓度与DR的发展和进展呈正相关,是DR的危险因素;Nesfatin-1与DR的发展和进展呈负相关,是DR的保护因素。