23S核糖体RNA结构域Ⅴ区位点A2063G、A2064G突变与儿童难治性肺炎支原体肺炎的相关性

目的 探讨23S核糖体RNA(rRNA)结构域Ⅴ区位点A2063G、A2064G突变与儿童难治性肺炎支原体肺炎的相关性。方法 将184例肺炎支原体肺炎患儿分为难治性肺炎组56例和非难治性肺炎组128例。比较两组患儿白细胞和中性粒细胞计数,降钙素原、C反应蛋白(CRP)、血沉、ALT、AST、乳酸脱氢酶(LDH)水平,以及23S rRNA结构域Ⅴ区位点A2063G、A2064G突变情况。分析相关指标与难治性肺炎支原体肺炎的相关性,并采用多因素Logistic回归模型分析难治性肺炎支原体肺炎的危险因素。结果 难治性肺炎组的CRP、血沉、LDH水平,中性粒细胞计数,以及A2063G和/或A2064G位点突变的比例均高于非难治性肺炎组(均P<0.05)。CRP、血沉、LDH水平,中性粒细胞计数,以及A2063G和/或A2064G位点突变情况均与难治性肺炎支原体肺炎具有相关性(均P<0.05)。Logistic回归模型分析结果显示,CRP、血沉、LDH水平升高,以及A2063G或/和A2064G位点突变均是难治性肺炎支原体肺炎的危险因素(均P<0.05)。结论 存在23S rRNA结构域Ⅴ区位点A2063G、A2064G突变的肺炎支原体肺炎患儿发展为难治性肺炎支原体肺炎的可能性增大,检测23S rRNA结构域Ⅴ区位点A2063G、A2064G的突变情况对判断肺炎支原体肺炎患儿病情和制定治疗方案具有重要意义。

探针ASPCR检测肺炎支原体微量耐药突变A2063G方法的建立

目的 建立能够特异性检测微量肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae, MP)A2063G耐药突变基因的特异性扩增等位基因的探针法实时定量PCR(probe-based allele-specific real-time PCR,探针ASPCR)方法。方法 建立特异性检测A2063G耐药突变位点的探针ASPCR方法,并验证其灵敏度、特异度及准确度等性能。结果 特异性扩增2063G和非特异性扩增2063A/G的引物/探针组合分别扩增105拷贝野生基因型(2063A)模板的Ct值的差(△Ct)高达10.93,能够特异性检测A2063G突变。探针ASPCR方法检测2063G基因型占总MP的比例的准确度可低至1%;检测MP的灵敏度低至10拷贝,检测A2063G耐药突变比例的灵敏度低至0.01%。探针ASPCR方法与前期建立的染料ASPCR方法检测临床样本的MP感染结果一致,MP阳性检出率均为94.83%(55/58),高于传统巣式PCR联合测序方法的检测结果(75.86%,44/58);染料ASPCR方法检测MP耐药率为70.91%(39/55),高于探针ASCR方法的检测结果 63.64%(35/55)。结论新建探针ASPCR方法是一种具有高特异度、准确度和灵敏度的快速检测MP微量A2063G耐药突变的方法;与染料ASPCR方法相比,探针ASPCR方法检测耐药MP的灵敏度略低,但其临床样本检测复查率也低于染料ASPCR方法,且其结果判读简单,更适合在临床中应用推广,能够为临床制定MP及耐药MP感染的治疗方案提供理论依据。

RT-PCR法探讨支原体23S rRNA基因突变与支原体肺炎病情的关系

目的采用RT-PCR法检测支原体23S rRNA基因突变,探讨23S rRNA基因突变与患儿病情的临床关系。方法选取本院2017年9月-2018年9月在本院儿科就诊的支原体肺炎患儿90例,所有患者均经咽拭子收集病原体标本,采用RT-PCR检测支原体大环内酯类常见耐药基因位点A2063位点基因突变,若A2063G出现突变则定为观察组,未突变定为对照组,分析基因突变与支原体感染患者病情的关系,采用Logistic回归分析重症支原体肺炎的危险因素。结果A2063G突变组患者发热时间、最高体温、呼吸道症状时间、白细胞总数、住院时间、住院费用、红霉素耐药率均明显高于非突变组患者,A2063G突变组患者对各种抗生素耐药率明显高于A2063G非突变组患者,入院前发热时间(P=0.03)、A2063G突变(P=0.02)、既往使用大环内酯类药物的使用(P=0.01)是支原体感染患儿重症肺炎的独立危险因素。结论支原体23S rRNA基因突变,探讨23S rRNA基因突变与患儿病情的临床关系。

成人社区获得性肺炎患者分离的肺炎支原体对大环内酯类药物耐药性和机制研究

目的了解本地区成人社区获得性肺炎(CAP)患者分离的肺炎支原体(MP)对大环内酯类药物耐药性和机制。方法收集273例CAP患者呼吸道样本进行MP分离培养,测定MP对3种大环内酯类药物的最低抑菌浓度(MICs),巢式PCR扩增MP临床菌株23SrRNA基因片段并测序,分析23SrRNA基因2063和/或2064 A→G点突变与大环内酯类药物耐药相关性。结果273例样本,MP阳性45例,阳性率为16.5%,不同性别MP感染阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。18株MP对3种大环内酯类药物均敏感,目的基因均无突变发生,26株至少对一种大环内酯类药物耐药。18株对3种大环内酯类抗生素均敏感和1株只对红霉素耐药(MIC=1μg/ml)的菌株均无突变发生。1株对3种大环内酯类药物均耐药的菌株存在A2064G突变,其余25株至少对2种大环内酯类抗生素耐药株均发生A2063G突变。结论肺炎支原体对大环内酯类药物耐药严重,耐药机制是23S rRNA基因2063和/或2064 A→G点突变。