利用生物信息学技术探索人卵巢癌细胞株A2780对顺铂耐药基因的研究

目的:利用生物信息学技术探索人卵巢癌细胞株A2780对顺铂耐药基因的可能机制,为临床化疗提供有效的依据。方法:①通过GEO在线GEO2R工具从两组数据库(GSE15372和GSE33482)中,分别比较对顺铂耐药的A2780与对顺铂敏感的A2780中的基因表达差异,并筛选出高表达基因和低表达基因;使用维恩图确定两组数据库中耐药的高表达共同差异基因和低表达的共同差异基因。②利用GO分析和KEGG通路富集分析耐药基因的生物学功能。③利用蛋白质-蛋白质互作(PPI)网络及Cytoscape软件筛选出A2780对顺铂耐药核心靶基因。④利用Kaplan-Meier Plotter工具对Hub基因进行总生存期分析。结果:①两组数据集的高表达共同耐药基因共37个,低表达共同耐药基因共2个。②GO分析结果显示:生物学过程(BP)分析结果表明,耐药基因主要参与着细胞间信号传导、趋化作用等;细胞组成(CC)分析表明,耐药基因主要位于细胞外区域、细胞间隙、细胞表面;分子功能(MF)分析表明,耐药基因参与着趋化因子相结合等作用。KEGG通路富集分析显示,耐药基因主要在细胞因子与细胞因子受体相互作用的信号通路、趋化因子信号通路上发挥作用。③PPI网络及Hub基因筛选结果显示:CCR5、POSTN、LOX、DACT1、RTN1、CCR1、CXCL6、PITX2、SNCA、AREG是核心耐药基因。④Hub基因中POSTN、LOX、DACT1、RTN1、PITX2的高表达与卵巢癌的不良预后有关(P<0.05)。结论:人卵巢癌细胞株A2780中顺铂耐药基因的异常表达,在卵巢癌化疗耐药中发挥着重要的作用,需要进一步的体外实验研究来证实其在临床化疗耐药中的作用。

丹参酮ⅡA对人卵巢癌A2780细胞增殖、迁移和自噬的影响

目的探讨丹参酮ⅡA对人卵巢癌A2780细胞增殖、迁移和自噬的影响。方法用不同浓度丹参酮ⅡA作用于卵巢癌A2780细胞24 h,CCK-8法测定不同浓度丹参酮ⅡA对A2780细胞增殖的影响,计算其IC_(50)值;依据IC_(50)值将卵巢癌A2780细胞分为4个组:0 mg/L组(即对照组)、0.3 mg/L组、0.6 mg/L组、1.2 mg/L组;应用划痕实验检测丹参酮ⅡA对A2780细胞迁移能力影响;Western Blot实验检测丹参酮ⅡA对A2780细胞凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2)和自噬相关蛋白(Beclin-1、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ)表达的影响。结果CCK-8实验结果显示,丹参酮ⅡA能够抑制卵巢癌A2780细胞的增殖,且抑制作用呈现浓度依懒性,其IC_(50)值为(2.97±0.09)mg/L;划痕结果显示,与对照组相比,丹参酮ⅡA能够抑制卵巢癌A2780细胞的迁移能力,呈剂量依赖性关系;Western Blot结果显示,丹参酮ⅡA可抑制Bcl-2蛋白表达,增强Bax蛋白表达,且Bax/Bcl-2比值增高,自噬相关蛋白Beclin-1表达增加,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值增高。结论丹参酮ⅡA可抑制人卵巢癌A2780细胞的增殖、迁移及促进细胞凋亡和自噬的发生。

雷帕霉素联合紫杉醇诱导卵巢癌细胞A2780和SKOV3凋亡及其分子机制

背景与目的:研究表明,哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)在恶性肿瘤发生发展中起重要作用,本研究观察特异性mTOR抑制剂雷帕霉素联合紫杉醇对卵巢癌细胞A2780和SKOV3的作用,并探讨其内在的分子机制。方法:A2780、SKOV3细胞经雷帕霉素和紫杉醇处理后,以MTT法检测细胞的增殖情况,金正均法计算q值判断两药的相互作用。以流式细胞仪检测细胞凋亡,逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测survivin的表达。结果:雷帕霉素联合紫杉醇可抑制A2780和SKOV3细胞增殖,且随时间延长抑制作用越显著,当两药合用72h时抑制率分别达到34.9%(A2780)和37.1%(SKOV3),与单独用药组相比差异有显著性(P<0.01),金正均法显示各时间点q值均>1.15,显示二者有协同作用。雷帕霉素和紫杉醇可使A2780和SKOV3细胞发生凋亡,并且在两者联用时凋亡率达到最高。经雷帕霉素和紫杉醇作用后的A2780和SKOV3细胞表达survivin较处理前明显下降。结论:体外雷帕霉素和紫杉醇可抑制A2780和SKOV3细胞增殖并诱导其发生凋亡,并可使survivin基因的表达下调,且两者联合应用时可显著增加其抑制作用,具有协同作用。

HDAC抑制剂TSA增强卵巢癌细胞株A2780对腺病毒基因转染效率的体外研究

背景与目的:腺病毒感染依赖于靶细胞表面柯萨奇-腺病毒受体(Coxsackie and adenovirus receptor,CAR)的表达,肿瘤细胞CAR表达的缺失和下调是造成腺病毒为载体基因治疗效果不佳的根本原因。本研究通过观察组氨酸去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)抑制剂TrichostatinA(TSA)对卵巢癌细胞株A2780CAR表达水平的影响,探讨HDAC抑制剂在腺病毒载体基因治疗中应用的可能性。方法:分别在TSA作用A2780细胞前后检测CARmRNA和蛋白水平的表达,同时采用流式细胞术测定病毒转染效率,MTT实验评价腺病毒携带的胸苷激酶(ADV/TK)的体外抗瘤效应。结果:TSA处理后,A2780细胞内CARmRNA和蛋白表达明显增高。通过流式细胞仪分析GFP/ADV转染后GFP的表达发现,未处理组细胞转染率为(1.24±0.14)%;5nmol/L和100nmol/LTSA处理48h后,细胞的转染效率分别为(7.58±0.32)%和(7.94±0.28)%。MTT结果表明,ADV/TK介导的体外杀伤作用在5nmol/L和100nmol/LTSA处理组较未处理组增强了4～10倍。结论:TSA可以增强针对卵巢癌细胞的腺病毒基因转染效率,为增强卵巢癌基因治疗效果提供可能的方法。

PI-3K/Akt抑制剂LY294002对卵巢癌细胞A2780/Taxol多药耐药性的逆转作用

背景与目的:磷脂酰肌醇(phosphatidylinositol 3 kinase,PI-3K)可抑制细胞凋亡,对PI-3K抑制剂的研究可以更好地了解PI-3K的促癌机制,为多种癌症如卵巢癌、乳腺癌等的基因治疗提供线索。本研究目的在于探讨PI-3K/Akt信号通路抑制剂LY294002对卵巢癌耐紫杉醇细胞株A2780/Taxol多药耐药的逆转作用。方法:用LY294002处理A2780/Taxol细胞,流式细胞术检测细胞凋亡,MTT法检测细胞对紫杉醇的药物敏感性,RT-PCR检测MDR1mRNA的表达,Western blot方法分析LY294002作用前后磷酸化Akt及P-gp蛋白的表达。结果:10和50μmol/L LY294002干预A2780/Taxol细胞24h后,A2780/Taxol细胞凋亡率分别为(8.84±1.65)%和(20.78±2.47)%,显著高于未干预细胞的凋亡率(1.25±0.78)%(P<0.05);A2780/Taxol细胞对紫杉醇的半数抑制浓度(IC50)显著降低(P<0.01),相对逆转效率最高可达(78.08±0.37)%;MDR-1mRNA、磷酸化Akt及P-gp蛋白均明显降低。结论:PI-3K/Akt信号通路的激活与卵巢癌细胞多药耐药的产生有关,PI-3K/Akt抑制剂LY294002可逆转卵巢癌细胞A2780/Taxol的多药耐药。

丹参酮ⅡA对人卵巢癌A2780细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用

目的研究丹参酮ⅡA(TanⅡA)对人卵巢癌A2780细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用。方法以四甲基偶氮唑蓝(M TT)法测定TanⅡA对人卵巢癌A2780细胞的增殖抑制;流式细胞仪检测细胞周期。结果TanⅡA对人卵巢癌A2780细胞的生长具有抑制作用,其作用强度随药物作用时间及浓度的增加而增强。实验组较对照组G0/G1期细胞数量增多,而S期细胞数量减少。4.0mg/L TanⅡA作用0、24、48、72h后的凋亡率分别为4.52%、19.7%、25.3%、40.4%,随时间的延长而凋亡细胞增多。结论TanⅡA对人卵巢癌A2780细胞有明显的增殖抑制和诱导凋亡的作用,且其作用呈时间-剂量依赖性。

miR-574-3p通过下调CBX2增强了卵巢癌A2780细胞对紫杉醇的敏感性

目的探讨miR-574-3p通过染色体盒同源物2(chromobox homolog 2,CBX2)调控卵巢癌A2780细胞对紫杉醇敏感性的影响。方法采用RT-qPCR方法检测miR-574-3p在正常卵巢上皮IOSE386和IOSE397细胞以及卵巢癌A2780细胞和紫杉醇耐药A2780/Tax细胞中的表达水平。CCK-8检测A2780/Tax细胞增殖活力;Transwell实验检测A2780/Tax细胞侵袭情况;双荧光素酶报告基因验证miR-574-3p与CBX2的调控关系;Western blot检测CBX2蛋白的表达。结果miR-574-3p在A2780细胞和A2780/Tax细胞中低表达,且在紫杉醇耐药A2780/Tax细胞中表达最低。过表达miR-574-3p可显著抑制A2780/Tax细胞增殖和侵袭。双荧光素酶报告基因结果证实miR-574-3p靶向下调CBX2的表达水平。证实过表达miR-574-3p通过下调CBX2抑制A2780/Tax细胞增殖和侵袭。结论miR-574-3p靶向下调CBX2增强了A2780细胞对紫杉醇的敏感性。

TMPyP4-PDT对人卵巢癌A2780细胞的杀伤作用及其对MCM2和CA-Ⅸ mRNA表达的影响

目的:观察四-(N-甲基-4-吡啶基)卟啉(TMPyP4)对人卵巢癌A2780细胞的光动力学杀伤作用及其对微型染色体维持蛋白2(MCM2)和碳酸酐酶Ⅸ(CA-Ⅸ)mRNA表达水平的影响,阐明TMPyP4-PDT(光动力疗法)对人卵巢癌A2780细胞的杀伤作用机制。方法:体外培养人卵巢癌A2780细胞株,按不同处理因素分为空白对照组、单纯TMPyP4组、单纯PDT组和TMPyP4-PDT组。采用CCK-8法检测TMPyP4-PDT对A2780细胞株的增殖抑制作用。流式细胞术测定不同浓度TMPyP4对A2780细胞株凋亡的影响。光镜下观察各组细胞HE染色的形态学变化。实时荧光定量PCR法检测MCM2和CA-IX mRNA表达水平的变化。结果:与空白对照组比较,单纯TMPyP4组随着药物浓度的增加,细胞的增殖抑制率逐渐增加(P<0.05);单纯PDT组细胞增殖抑制率增加不明显(P>0.05);TMPyP4-PDT组细胞增殖抑制率随着药物浓度及激光能量密度的增加而增加(P<0.05)。流式细胞术检测,TMPyP4-PDT可诱导A2780细胞凋亡,在激光能量密度为4J.cm-2的条件下,3、6、15、30和60μmol.L-1 TMPyP4作用4h,A2780细胞凋亡率分别为(9.46±0.04)%、(17.7±0.3)%、(25.4±0.2)%、(30.2±0.2)%和(66.3±0.3)%。光镜下可观察到空白对照组及单纯PDT组贴壁细胞多,无核固缩及核碎裂样改变;单纯TMPyP4组及TMPyP4-PDT组贴壁细胞减少,出现核固缩、空泡及部分胞浆溶解样改变。实时荧光定量PCR法检测,在激光能量密度为4J.cm-2的条件下,3、6、15、30和60μmol.L-1TMPyP4作用4h,MCM2和CA-IX mRNA表达水平明显降低,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:TMPyP4-PDT对人卵巢癌A2780细胞有明显杀伤作用,其机制可能与负性调节MCM2和CA-Ⅸ的表达有关。

下调Beclin1抑制卵巢癌A2780/DDP细胞对顺铂的耐药性

目的:探究敲减Beclin1表达对卵巢癌细胞A2780对顺铂耐药的影响及其相关机制。方法:以Western blotting及qPCR检测卵巢癌细胞株A2780及耐药细胞株A2780/DDP中Beclin1的表达情况;A2780/DDP细胞转染Beclin1 siRNA后,用MTT法检测细胞对顺铂敏感性的变化,克隆形成实验检测各组细胞的克隆形成情况,流式细胞术检测各组细胞的凋亡,MDC荧光染色检测细胞的自噬情况,Western blotting检测自噬相关蛋白、溶酶体相关膜蛋白Lamp-2以及组织蛋白酶Cathepsin B的表达情况。结果:顺铂耐药细胞株A2780/DDP中Beclin1 mRNA及蛋白的表达水平均明显高于A2780细胞株(均P<0.05),在A2780细胞中加入顺铂刺激后Beclin1蛋白的表达水平显著升高(P<0.05)。敲减Beclin1表达可促进顺铂诱导的A2780/DDP细胞的凋亡(P<0.05)、抑制细胞自噬的发生(P<0.05)、减少细胞克隆形成(P<0.05)和增加细胞对顺铂的敏感性(P<0.05);Western blotting结果显示,敲减Beclin1可上调A2780/DDP细胞中cleaved-caspase 3和Cathepsin B的蛋白水平,下调Atg3、Atg7、LC3Ⅱ/Ⅰ、Lamp-2的表达水平(均P<0.05)。结论:敲减Beclin1表达可提高A2780/DDP细胞对顺铂的敏感性,其机制可能与调节自噬相关蛋白表达抑制细胞保护性自噬和影响溶酶体功能,从而促进顺铂诱导耐药细胞凋亡有关。

藤茶双氢杨梅树皮素对Hela细胞及A2780细胞增殖的抑制作用

目的探讨藤茶双氢杨梅树皮素(ampelopsin,APS)的抗肿瘤作用。方法以四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)、克隆形成法观察APS对Hela细胞及A2780细胞的体外抑制作用。结果APS均能明显抑制体外培养的Hela细胞及A2780细胞的生长,MTT法的半数抑制浓度(IC50)分别为24.6μg/mL和1.2μg/mL,集落形成法中APS质量浓度在4.4～22.2μg/mL时抑制率均为100%。结论藤茶APS对体外培养的Hela细胞及A2780细胞均有明显的抑制作用。

核糖体蛋白RPL41对人卵巢癌A2780细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的研究核糖体蛋白RPL41对人卵巢癌A2780细胞增殖和凋亡的影响,并分析其潜在凋亡机制。方法不同浓度RPL41(0μM、20μM、50μM、100μM)处理A2780细胞,分为对照组和RPL41低、中、高剂量组。采用MTT法检测人卵巢癌A2780细胞活力变化;采用Hoechst染色法检测A2780细胞凋亡情况;采用流式细胞仪检测A2780细胞周期;采用蛋白印记(Western Blot)法检测A2780细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达;采用RNA干扰技术沉默RPL41,分为NC组和si RPL41组,Western Blot检测沉默RPL41后A2780细胞中Bcl-2和Bax的表达。结果与对照组相比,糖体蛋白RPL41可以抑制人卵巢癌A2780细胞的增殖,具有剂量依赖性(P<0.05);RPL41剂量依赖性引起A2780细胞凋亡(P<0.05);RPL41可以显著上调Bax的表达、下调Bcl-2的表达,呈浓度依赖性(P<0.05);沉默RPL41表达后,A2780细胞中Bcl-2的表达较NC组显著上升,Bax的表达较NC组显著下降(P<0.05)。结论RPL41可呈剂量依赖性抑制卵巢癌A2780细胞的增殖,并可能通过上调Bax表达、下调Bcl-2表达,参与细胞程序化死亡机制,导致A2780细胞凋亡。

白英对A2780人卵巢癌细胞增殖的抑制作用

目的:探讨白英的抗肿瘤作用。方法:以MTT法、生长曲线法、集落形成法观察白英对人卵巢癌A2780细胞的体外抑制作用。结果:白英能明显抑制体外培养的A2780细胞的生长,MTT法IC50为20.39mg/ml;细胞生长曲线法提示其对A2780细胞的生长也有明显的抑制作用;集落形成法,当药物浓度为14.81mg/ml、9.88mg/ml时,抑制率均为100%;当药物浓度为6.58mg/ml时,抑制率为41.86%。结论:白英对体外培养的A2780细胞有明显的抑制作用。

川芎嗪对人卵巢癌耐药细胞株A2780/ADM逆转作用实验研究

目的探讨川芎嗪(TMP)逆转卵巢癌A2780/ADM细胞对阿霉素(ADM)的耐药作用及机制。方法应用MTT法测定细胞的药敏性;用荧光分光光度法测定细胞内阿霉素浓度的变化;采用流式细胞术检测耐药细胞凋亡率的变化。结果非细胞毒性剂量川芎嗪能显著降低卵巢癌耐药细胞株A2780/ADM的IC50,逆转倍数为2.07倍;非细胞毒性剂量川芎嗪能显著增加耐药细胞内ADM的浓度和耐药细胞的凋亡百分率,显著降低P-gp的表达。结论川芎嗪具逆转卵巢癌耐药细胞株A2780/ADM细胞对阿霉素的耐药性,其逆转机制可能与增加细胞内ADM浓度和抑制该细胞P-gp的表达有关。

白英水提物诱导人卵巢癌A2780细胞bcl-2基因表达的影响

目的:观察白英水提物诱导人卵巢癌A2780细胞凋亡的作用,初步探讨其分子机制。方法:常规方法制备白英水提物,体外培养人卵巢癌A2780细胞,MTT法提示其有较强的体外抑制A2780细胞作用。采用半定量RT-PCR法检测凋亡相关基因bcl-2表达。实验组设白英水提物12.5、25.0、50.0 mg/ml 3种浓度,以顺铂(25.0μg/ml)为阳性对照组。结果:白英水提物对A2780细胞增殖有抑制作用,且呈明显的量效关系,半定量RT-PCR法检测显示bcl-2 mRNA表达下调,诱导其发生凋亡。结论:白英水提物对A2780细胞有较强的增殖抑制和诱导凋亡作用,其诱导A2780细胞凋亡的分子机制可能与下调bcl-2基因表达有关。

曲古抑菌素A对人卵巢癌细胞系A2780细胞周期的影响

目的研究曲古抑菌素A(TSA)对人卵巢癌细胞系A2780细胞周期的影响及其相关机制。方法通过流式细胞仪检测不同浓度和时间的曲古抑菌素A对A2780细胞周期的影响;RT-PCR法检测不同浓度和时间的曲古抑菌素A对p21WAF/CIPI mRNA表达水平的影响。结果 100nmol/L曲古抑菌素A作用于A2780细胞,随着作用时间的延长,G2/M期细胞增加,S期细胞减少,在36hG2/M期细胞增加达到顶峰,S期细胞减少到最低;12h后p21WAF/CIPI mRNA表达水平开始增高,于24h达到顶峰,48h后出现下降;不同浓度的TSA作用于A2780细胞,从100nmol/L浓度开始G2/M期细胞增加,S期细胞减少,p21WAF/CIPI mRNA的表达水平出现升高,并随着浓度的增加而升高(P<0.05)。结论曲古抑菌素A通过增加p21WAF/CIPI mRNA表达,影响细胞周期素依赖的蛋白激酶的活性,使细胞周期阻滞于G2/M期,抑制A2780细胞增殖。

UTP23基因在A2780/Taxol细胞中表达及对紫杉醇化疗耐药的影响

目的探讨上皮性卵巢癌紫杉醇耐药细胞(A2780/Taxol)中UTP23基因表达水平及其对紫杉醇化疗耐药的影响。方法利用Real-Time PCR与Western blot分别从基因与蛋白表达水平检测A2780/Taxol细胞中UTP23的表达水平,通过脂质体在A2780/Taxol细胞中特异性瞬时过表达UTP23基因,利用MTT细胞增殖法观察过表达UTP23基因对A2780/Taxol细胞药物敏感性的影响;通过Real-Time PCR检测A2780/Taxol细胞过表达UTP23后抗凋亡基因Bcl-2蛋白表达水平。结果 A2780/Taxol中UTP23的m RNA表达水平降低,约为A2780细胞的50%,UTP23蛋白表达水平下降,约为A2780细胞的48%(P<0.01);相对于阴性转染组,UTP23基因过表达可显著提高A2780/Taxol细胞中UTP23基因表达水平(P<0.05);相对于阴性转染组,UTP23基因过表达A2780/Taxol细胞对紫杉醇的敏感性显著提高(P<0.01);与阴性转染组相比,过表达UTP23基因后A2780/Taxol细胞Bcl-2基因表达水平显著下降(P<0.05)。结论 UTP23基因在A2780/Taxol细胞中低表达,可能通过促进Bcl-2基因表达,从而参与A2780/Taxol细胞的耐药作用。

COX-2在上皮性卵巢肿瘤的表达及塞来昔布对卵巢癌A2780细胞株凋亡的影响

目的探讨环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)在上皮性卵巢肿瘤的表达及环氧化酶-2抑制剂塞来昔布(celecoxib)在体外对人卵巢癌细胞株A2780凋亡的影响。方法 (1)采用免疫组化SP法检测COX-2在65例上皮性卵巢癌,18例交界性、18例良性上皮性卵巢肿瘤,以及9例正常卵巢组织中的表达。(2)用流式细胞仪测定塞来昔布在体外对A2780细胞凋亡的影响。结果 (1)COX-2在上皮性卵巢癌组(73.8%)及交界性卵巢肿瘤组的表达(66.7%)显著高于良性卵巢肿瘤组(16.7%)及正常卵巢组(11.1%),P均<0.05。(2)流式细胞仪测定结果显示,塞来昔布呈剂量依赖方式诱导人卵巢癌A2780细胞凋亡(P<0.05)。结论 (1)COX-2在交界性及恶性上皮性卵巢肿瘤中的表达明显增强,COX-2可能在交界性及恶性上皮性卵巢肿瘤的发生发展中起一定作用。(2)体外特异性COX-2抑制剂塞来昔布能够诱导人卵巢癌A2780细胞株凋亡,可能成为上皮性卵巢癌化疗的有效药物。

顺铂联合他莫昔芬对卵巢癌A2780细胞增殖及凋亡的影响

目的研究顺铂联合他莫昔芬对卵巢癌A2780细胞周期、细胞凋亡的影响,以期能为临床卵巢癌患者提供新的辅助治疗方案理论依据。方法采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测IC50和细胞生长抑制率,采用流式细胞术检测细胞周期,Hoechst染色检测细胞凋亡。结果 (1)顺铂及他莫昔芬能抑制细胞增殖,顺铂IC50为:2.8μg/mL;他莫昔芬IC50为:12.69μg/mL;(2)顺铂和他莫昔芬对卵巢癌A2780细胞表现出凋亡作用(P <0.01);(3)顺铂及他莫昔芬均使人卵巢癌A2780细胞周期停滞于G0/G1期(P <0.05,P <0.01)。结论顺铂联合他莫昔芬可诱导A2780细胞周期阻滞和细胞凋亡,从而抑制A2780细胞生长。

hTERT基因反义核酸对A2780细胞端粒酶活性影响

目的:检测hTERT基因反义核酸对A2780细胞端粒酶活性的影响及其机制。方法:TRAP法检测端粒酶活性,流式细胞仪检测hTERT蛋白表达。结果:检测端粒酶活性,A2780细胞吸光度A值为(0.492±0.051),hTERT反义核酸作用48 h A值降为(0.351±0.051),hTERT反义核酸作用72 h A值降为(0.238±0.024)检测hTERT蛋白表达,A2780细胞hTERT蛋白阳性率(89.513±3.389)%,hTERT反义核酸作用48hhTERT蛋白阳性率低至77.237±2.872%,hTERT反义核酸作用72 h hTERT蛋白阳性率低至(47.767±1.226)%。而hTERT正义核酸无上述作用。hTERT反义核酸作用A2780细胞48 h、72h对hTERTmRNA表达无影响。结论:hTERT反义核酸降低A2780细胞端粒酶活性,机制可能是降低hTERT蛋白表达量。

hTERT基因反义核酸对A2780细胞端粒酶活性影响

目的检测hTERT基因反义核酸对A2780细胞端粒酶活性的影响及其机制。方法TRAP法检测端粒酶活性,流式细胞仪检测hTERT蛋白表达。结果端粒酶活性检测结果显示,A2780细胞吸光度A值为0.492±0.051,hTERT反义核酸作用48hA值降为0.351±0.047,hTERT反义核酸作用72hA值降为0.238±0.024。hTERT蛋白表达检测结果显示,A2780细胞hTERT蛋白阳性率89.513%±3.389%,hTERT反义核酸作用48h后hTERT蛋白阳性率低至71.237%±2.872%,hTERT反义核酸作用72hhTERT蛋白阳性率低至47.767%±1.226%。而hTERT正义核酸无上述作用。结论hTERT反义核酸能降低A2780细胞端粒酶活性,其机制可能是降低hTERT蛋白表达量。