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猴痘病毒A29L、B6R、M1R蛋白的表达纯化及其在痘苗病毒免疫血清检测中的应用分析
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作者 程雪婷 楚巧鸿 +6 位作者 王瑭琪 韩瑞雯 邴佳洛 黄保英 陆柔剑 邓瑶 谭文杰 《国际病毒学杂志》 北大核心 2024年第2期89-95,共7页
目的表达纯化猴痘病毒A29L、B6R以及M1R抗原蛋白并分析三种蛋白在痘苗病毒免疫血清检测中的应用。方法将猴痘病毒A29L、B6R以及M1R抗原按照人源密码子优化合成后插入pVRC载体,转染HEK293T细胞后收获上清,通过Western blot方法验证蛋白表... 目的表达纯化猴痘病毒A29L、B6R以及M1R抗原蛋白并分析三种蛋白在痘苗病毒免疫血清检测中的应用。方法将猴痘病毒A29L、B6R以及M1R抗原按照人源密码子优化合成后插入pVRC载体,转染HEK293T细胞后收获上清,通过Western blot方法验证蛋白表达,通过镍柱和离子交换层析柱纯化蛋白,并采用SDS-PAGE和考马斯亮蓝染色鉴定蛋白纯度。分别以纯化A29L、B6R与M1R作为包被抗原,通过ELISA检测痘苗病毒免疫后的小鼠、恒河猴与人血清中IgG抗体滴度,并分析它们与血清中抗痘苗病毒、抗猴痘病毒中和抗体滴度的相关性。结果猴痘病毒A29L、B6R、M1R蛋白在细胞上清中均可大量分泌表达。经镍柱及离子交换层析柱进行蛋白纯化后,纯度均可达90%以上。痘苗病毒免疫的动物与人血清中均可检出针对三种蛋白特异的IgG抗体,三个抗原检测的IgG滴度显著相关,痘苗免疫血清中A29L、B6R、M1R特异的IgG与抗痘苗病毒中和抗体水平也显著相关,但与抗猴痘病毒特异中和抗体水平相关性较弱。结论在痘苗病毒免疫血清中可检测到与猴痘病毒A29L、B6R、M1R蛋白交叉反应的IgG抗体,且IgG滴度与抗痘苗病毒中和抗体水平显著相关,但与猴痘病毒特异中和抗体水平相关性较弱。该研究可为正痘(包括猴痘)病毒免疫学检测方法的应用及疫苗研发提供参考。 展开更多
关键词 猴痘病毒 a29l、B6R、M1R蛋白 真核表达 蛋白纯化 ELISA
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猴痘病毒A29L蛋白的生物信息学分析
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作者 张郁勃 葛萧 +3 位作者 沈方园 周慧姿 张晓宇 李恒 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2024年第4期373-377,共5页
目的运用生物信息学分析软件对猴痘病毒A29L蛋白的结构和功能进行预测。方法从NCBI网站上获取猴痘病毒A29L基因及编码A29L蛋白的基本信息,利用NCBI、OFR Finder、ProtParam、ProtScaleon Expasy、SignalP 4.1、TMHMM-2.0、NetPhos 3.1 S... 目的运用生物信息学分析软件对猴痘病毒A29L蛋白的结构和功能进行预测。方法从NCBI网站上获取猴痘病毒A29L基因及编码A29L蛋白的基本信息,利用NCBI、OFR Finder、ProtParam、ProtScaleon Expasy、SignalP 4.1、TMHMM-2.0、NetPhos 3.1 Sever、SOPMA、SWISS-MODEL、ABCpred、SYFPEITHI、BLAST等生物信息学工具对猴痘病毒A29L蛋白的结构和功能进行预测。结果A29L蛋白是由110个氨基酸组成的亲水性蛋白,含有19种氨基酸,2个开放阅读框。A29L蛋白相对分子质量为12.55924×10^(3),理论等电点5.73,不稳定系数32.28,是稳定蛋白。A29L蛋白存在10个磷酸化位点,无跨膜区、信号肽;A29L蛋白二级结构中α-螺旋占比最高,占57.27%,无规则卷占32.73%;B细胞有11个(score>0.5)抗原表位,CTL细胞有6个(score≥21)抗原表位,Th细胞有10个(score≥20)抗原表位。A29L蛋白有8个同源性较高的蛋白。结论A29L蛋白是具有多个潜在的T、B细胞抗原表位的稳定亲水性蛋白,可作为猴痘治疗和疫苗的候选蛋白。 展开更多
关键词 猴痘病毒 a29l蛋白 疫苗 生物信息学
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猴痘自组装纳米颗粒候选疫苗的制备及免疫应答特征研究
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作者 谭凌云 王慧 +4 位作者 杨晓岚 汪芳洲 李燕 罗德炎 谷宏婧 《免疫学杂志》 CAS CSCD 2024年第1期96-103,共8页
目的 本研究旨在制备自组装纳米颗粒猴痘候选疫苗并研究其免疫应答特征,为其疫苗设计提供可参考的试验数据。方法 利用原核系统表达纯化抗原蛋白A29L-SpyTag和骨架蛋白Mi3-SpyCatcher,化学组装制备纳米颗粒A29L-Mi3,皮下免疫小鼠,通过EL... 目的 本研究旨在制备自组装纳米颗粒猴痘候选疫苗并研究其免疫应答特征,为其疫苗设计提供可参考的试验数据。方法 利用原核系统表达纯化抗原蛋白A29L-SpyTag和骨架蛋白Mi3-SpyCatcher,化学组装制备纳米颗粒A29L-Mi3,皮下免疫小鼠,通过ELISA测定抗体效价、空斑试验测定抗体中和、流式细胞术测定淋巴细胞分泌细胞因子情况,并描述其免疫应答特征。结果 成功制备A29L-Mi3纳米颗粒,颗粒呈中空笼状均匀分布,其粒径平均为(29±0.19) nm。A29L-Mi3纳米颗粒候选疫苗联合SP01佐剂后,中和抗体效价强于A29L蛋白候选疫苗,且A29L-Mi3纳米颗粒候选疫苗免疫2次即能够获得免疫3次相近滴度的中和抗体。A29L-Mi3纳米颗粒候选疫苗激活的小鼠T淋巴细胞免疫应答水平高于A29L蛋白候选疫苗。结论 成功体外组装制备出结构均一的A29L-Mi3蛋白纳米颗粒,具有较强的免疫原性,联合SP01佐剂后中和能力提高,为免疫程序的优化提供参考数据。细胞免疫应答水平均高于单独的A29L蛋白,为猴痘疫苗的设计与研发提供借鉴。 展开更多
关键词 猴痘抗原a29l 自组装纳米颗粒疫苗 体液免疫 细胞免疫
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An MPXV mRNA-LNP vaccine candidate elicits protective immune responses against monkeypox virus
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作者 Yuxin Tian Mengjun Li +9 位作者 Yang Yang Chunhui Li Yun Peng Haiyin Yang Mengyuan Zhao Pengfei Wu Shaobo Ruan Yuanyu Huang Chenguang Shen Minghui Yang 《Chinese Chemical Letters》 SCIE CAS CSCD 2024年第8期466-470,共5页
The monkeypox virus(MPXV)outbreak,declared a Public Health Emergency of International Concern(PHEIC)by the World Health Organization(WHO)in 2022,continues to pose a significant threat due to the absence of vaccines or... The monkeypox virus(MPXV)outbreak,declared a Public Health Emergency of International Concern(PHEIC)by the World Health Organization(WHO)in 2022,continues to pose a significant threat due to the absence of vaccines or drugs for MPXV infection.In this study,we developed an mRNA vaccine that expressing the A29L antigen,a specific protein of the intracellular mature virus.Our vaccine utilizes a thermostable ionizable lipid nanoparticle(iLNP)platform and has been administered to mice.Our find-ings demonstrate that the MPXV A29L mRNA vaccine candidate induces robust cross-neutralizing immune responses against both vaccinia virus(VACV)and MPXV live virus.Furthermore,immunization with the vaccine candidate provided protection against the VACV challenge in mice.These findings underscore the potential of mRNA-LNP vaccines as safe and effective candidates against monkeypox epidemics.Given the current absence of specific interventions for MPXV infection,our study represents a significant step forward in developing a viable solution to combat this ongoing public health threat. 展开更多
关键词 Monkeypox virus mRNA vaccine Lipid-nano particle a29l VACV
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