A2a受体激动剂联合LPD对大鼠供肺组织病理结构的影响

目的观察A2a受体激动剂联合低钾右旋糖苷(LPD)对大鼠供肺组织病理学结构的影响,探讨A2a受体激动剂在供肺组织中的保存作用。方法选择20只健康雄性SD大鼠,体重为350 g左右,采用随机数字表法分为两组(n=10),L组大鼠供肺组织采用常温LPD液进行肺灌注,LC组则在L组的灌注液及保存液中加入A2a受体激动剂CGS21680液,灌注肺离体后置于4℃相应组的保存液里保存6 h后,取两组移植肺组织行光镜下病理学观察并进行积分计算和统计学分析。结果肺组织炎症渗出积分方面LC组为3.5分,低于L组的9.5分,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);肺组织病理评分总分方面,L组为(10.67±1.63)分,LC组为(7.50±1.22)分,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 A2a受体激动剂可减少供体肺组织炎症细胞浸润程度,提高LPD液对供肺组织保存效果。

腺苷A2a受体激动剂对脓毒症急性肾损伤中内质网应激的调节作用

目的:探究腺苷A2a受体激动剂对脓毒症诱导急性肾损伤(AKI)模型大鼠内质网应激(ERS)途径及单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)表达的影响。方法:实验分为4组,包括对照组、腺苷A2a受体激动剂(CGS21680)组、模型(AKI)组、腺苷A2a受体激动剂干预(CGS21680+AKI)组,每组10只SD大鼠,CGS21680组和CGS21680+AKI组腹腔注射CGS21680,接着将除对照组外的其余3组大鼠均制备AKI模型。1周后,全自动生化仪检测血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)水平,酶联免疫吸附(ELISA)法测定血清肾损伤分子-1(KIM-1)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)水平,苏木精-伊红(HE)染色和过碘酸雪夫(PAS)染色观察肾组织病理形态学变化情况,TdT介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)染色观察肾组织内细胞凋亡情况,免疫组化染色检测肾组织内CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)和葡萄糖调节蛋白78(GRP78),蛋白质免疫印迹(Western blot)法测定肾组织X-盒-结合蛋白-1(XBP1)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、真核起始转录因子2α亚基(eIF2α)及磷酸化真核细胞起始因子2α(p-eIF2α)表达水平,免疫组化染色检测肾组织内MCP-1阳性表达情况,Western blot法测定肾组织中MCP-1蛋白表达水平。结果:与对照组比较,AKI组大鼠SCr、BUN、KIM-1、NGAL水平升高(P<0.05),肾组织内可见肾小管扩张、变性及肾小球水肿等病理损伤现象,TUNEL阳性率增加(P<0.05),GRP78、CHOP阳性表达比例升高(P<0.05),肾组织内XBP1、PERK蛋白相对表达量及eIF2α/p-eIF2α比值均上调(P<0.05),MCP-1阳性表达比例与蛋白相对表达量也升高、上调(P<0.05)。与AKI组比较,CGS21680+AKI组大鼠SCr、BUN、KIM-1、NGAL水平降低(P<0.05),肾组织病理损伤情况明显改善,TUNEL阳性率减少(P<0.05),GRP78、CHOP阳性表达比例降低(P<0.05),肾组织内XBP1、PERK蛋白相对表达量及eIF2α/p-eIF2α比值均下调(P<0.05),同时,MCP-1阳性表达比例与蛋白相对表达量也降低、下调(P<0.05)。结论:腺苷A2a受体激动剂能够减轻AKI大鼠急性肾损伤,这可能与其缓解内质网应激,抑制MCP-1水平有关。

腺苷A2A受体激动剂CGS21680对ConA诱导的小鼠急性肝损伤的影响

目的探讨腺苷A2A受体激动剂CGS21680对伴刀豆球蛋白(ConA)引起的小鼠急性肝损伤的影响及其可能机制。方法雄性C57BL/6小鼠随机分为ConA组和CGS21680+ConA组。ConA组小鼠经尾静经脉注射ConA(20 mg/kg),CGS21680+ConA组小鼠经腹腔注射腺苷A2A受体激动剂CGS21680(2.1 mg/kg)10 min后再经尾静经脉注射ConA(20 mg/kg)。检测小鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、γ干扰素(IFN-γ)、白介素-4(IL-4)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;光学显微镜下观察肝组织病理改变,评估肝损伤程度;采用流式细胞仪检测肝组织单个核细胞(MNCs)中CD4+T细胞IFN-γ和IL-4的表达。结果与ConA组比较,CGS21680+ConA组小鼠血清ALT、AST、IFN-γ、IL-4和TNF-α水平显著降低;肝脏组织中炎症细胞浸润明显减少,肝脏损伤程度较轻;肝组织CD4+T细胞IFN-γ和IL-4的表达减少。结论腺苷A2A受体激动剂CGS21680预处理能够显著减轻ConA引起的小鼠急性肝损伤,这可能与CGS21680激活CD4+T细胞表面的A2A受体进而抑制促炎因子的释放有关。

腺苷A2a受体激动剂(CGS21680)对幼龄大鼠体外循环肝脏损伤的保护作用

目的探讨腺苷A2a受体激动剂(CGS21680)对幼龄大鼠体外循环肝脏损伤的保护作用。方法取健康SD幼年大鼠36只,随机均分为3组:假手术组、CPB组及CGS21680组。建立幼龄大鼠体外循环模型,CPB组与CGS21680组需要使用预充液进行60 min的体外循环,CGS21680组在体外循环前根据药物说明书加入CGS21680(120μg/kg)至预充液中。假手术组仅仅进行抗凝及肝素化。分别于肝素化后转流前(T0)、转流30 min(T1)、转流结束后(T2)以及术后1 h(T3)检测血清白细胞介素(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)。术后1 h取肝脏组织,检测组织中IL-1β、IL-6、TNF-α水平,并行HE染色观察组织形态改变。结果 CPB组幼龄大鼠的血清中不同时间点IL-1β、TNF-α、AST和ALT水平显著高于假手术组(P<0.05),CGS21680组的上述指标则是显著低于CPB组(P<0.05)。CPB组血清中抗氧化指标GSH-PX各时间点显著低于假手术组(P<0.05),CGS21680组中的抗氧化指标则显著高于CPB组。而CPB组肝脏中的IL-1β、IL-6和TNF-α含量显著高于假手术组(P<0.05),CGS21680组中各项指标则显著低于CPB组(P<0.05)。结论腺苷受体激动剂CGS21680可以显著减轻幼龄大鼠体外循环导致的肝脏损伤。

腺苷A2a受体激动剂(CGS21680)对体外循环大鼠心肌功能的影响及其作用机制

目的探讨腺苷A2a受体激动剂(CGS21680)对体外循环(CPB)大鼠心肌功能的影响及其作用机制。方法 45只SD大鼠按照随机数字表法分为对照组、模型组和治疗组。模型组和治疗组进行体外循环2 h。治疗组体外循环后经尾静脉注射腺苷A2a受体激动剂CGS21680 35 mg/kg,对照组和模型组尾静脉注射等体积生理盐水。两组治疗3 d后,测定各组大鼠乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)表达水平;采用试剂盒检测各组血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽氧化物酶(GSH-px)水平;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)染色分析各组大鼠心肌细胞凋亡;采用蛋白质免疫印迹分析内质网应激相关蛋白表达水平。评价3组大鼠神经功能缺失评分;采用试剂盒检测氧化应激指标变化;采用TUNEL染色分析3组大鼠脑组织神经元凋亡比例;采用Western blot分析3组大鼠内质网应激(ERS)标志物葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-12(Caspase-12)表达水平。组间计量资料比较采用t检验。结果治疗组大鼠外周血LDH和CK-MB水平[(410.58±25.22)、(9.44±2.71) mmol/L]明显低于模型组[(812.39±30.91)、(16.23±3.93) mmol/L],差异有统计学意义(t=3.518、4.271,P<0.05)。治疗组大鼠外周血MDA水平[(8.31±1.79) mmol/L]明显低于模型组[(13.48±2.11) mmol/L],差异有统计学意义(t=3.984,P<0.05)。治疗组大鼠外周血SOD活性[(172.12±19.37) U/mg]明显高于模型组[(120.32±15.33) U/mg],差异有统计学意义(t=3.109,P<0.05)。治疗组大鼠外周血肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)水平[(106.81±12.89)、(71.56±7.36) pg/g]明显低于模型组[(186.38±18.93)、(109.49±11.43) pg/g],差异有统计学意义(t=6.008、5.381,P<0.05)。治疗组大鼠心肌细胞凋亡率[(9.32±2.36)%]明显低于模型组[(18.54±4.18)%],差异有统计学意义(t=4.827,P<0.05)。治疗组大鼠心肌细胞GRP78、CHOP和Caspase-12表达水平(0.71±0.11、0.78±0.13、0.62±0.10)明显低于模型组(1.03±0.13、1.24±0.12、0.91±0.10),差异有统计学意义(t=2.891、3.012、2.895,P<0.05)。结论腺苷A2a受体激动剂(CGS21680)可显著改善机体氧化应激反应和炎性因子水平,降低心肌细胞内质网应激,降低心肌细胞凋亡,进而保护心肌细胞功能。