At7基因在植物内生芽孢杆菌A47中的表达及生物学功能测定

蜡样芽孢杆菌A47菌株(Bacillus cereus A47) 是从植物体内分离得到的对多种作物具有良好防病、促生、改善品质、提高抗逆性等功能的有益内生芽孢杆菌。田涛等人(2004)把来自质粒pAD4412 的启动子和gfpmut3a基因插入大肠杆菌-芽孢杆菌穿梭载体pBE2,构建了芽孢杆菌表达GFP的载体pGFP4412。在本研究中,用PCR的方法将信号肽序列连接到At7基因上,将该基因连同含有4412 启动子的载体pGFP4412连接,构建了重组载体 pSAt7-4412。用重组载体转化野生型生防芽孢杆菌A47菌株,获得转基因工程菌株。经过对工程菌株质粒遗传稳定性研究表明,重组质粒pSAt7-

蜡样芽孢杆菌A47鞭毛蛋白基因的克隆及其定殖相关性初探

植物内生细菌是指能定殖在健康植物组织内, 并与寄主植物建立一定和谐关系的一类微生物。诸多研究结果表明,部分植物内生细菌对植物是有益的,因此,目前对植物内生细菌的研究已成为国内外研究的热点之一。蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)A47是本实验室从小麦根部分离的一株内生增产细菌。它可以在小麦的根围和根内定殖,但其定殖机理目前尚不清楚,本研究从该菌的鞭毛蛋白基因入手,克隆该基因并采用插入突变方法获得突变菌株,再比较突变菌株与野生菌株之间的差异,为明确细菌的定殖因子做一些初步探索。由鞭毛蛋白基因的同源序列设计引物,以蜡样芽孢杆菌A47的基因组DNA为模板,扩增获得了两个鞭毛蛋白基因,分别命名为flaA和flaB;

痘苗病毒A47L缺失对细胞免疫反应的影响

目的以去除A47L表位的痘苗病毒为载体，导人外源基因OVA，研究去除A47L后对细胞免疫和免疫记忆效应的影响，以期通过去除痘苗病毒载体中对外源抗原的免疫性具有显著抑制作用的表位，提高疫苗的有效性。方法将扩增的OVA基因导入pSC11穿梭质粒，在CV-1细胞中与去除A47L的痘苗病毒重组，通过多轮筛选纯化获得重组病毒。利用重组病毒免疫小鼠，测定针对外源抗原的细胞免疫反应和免疫记忆效应。结果外源性OVA基因导人痘苗病毒后，对痘苗病毒的生物学特性无明显影响，且具有良好的表达；去除A47L的重组病毒能够引起有效的针对OVA的细胞免疫反应和免疫记忆效应。结论去除A47L的痘苗病毒可更好地表达外源性基因。通过去除病毒本身的抑制性表位，可望为多价抗原复制性疫苗提供更为有效的痘苗病毒载体。