miR-141-3p靶向调控HMGB1对LPS诱导的A549细胞损伤的影响

目的探讨miR-141-3p通过靶向调控高迁移率族蛋白1(HMGB1)对脂多糖(LPS)诱导的A549细胞损伤的影响。方法以Ⅱ型肺泡上皮细胞来源的A549细胞作为研究对象,将miR-141-3p mimics、mimics NC、HMGB1基因过表达质粒(pcDNA3.1-HMGB1)和空载质粒(Vector)分别或共转染至A549细胞中,再采用10μg/ml LPS处理24 h。细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测各组细胞增殖活性;比色法检测各组细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性;流式细胞术检测各组细胞凋亡水平;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组细胞中白介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-141-3p与HMGB1之间的靶向调控关系。结果LPS干预后,A549细胞增殖活性及细胞中miR-141-3p表达水平降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05),细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α水平及上清液中LDH活性升高(P<0.05)。过表达miR-141-3p可增强LPS处理后的A549细胞增殖活性(P<0.05),降低细胞凋亡率及细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α水平和上清液中LDH活性(P<0.05)。然而,HMGB1基因过表达可逆转miR-141-3p对LPS诱导A549细胞损伤的改善作用。双荧光素酶报告基因实验证实,HMGB1是miR-141-3p下游靶基因。结论miR-141-3p可抑制LPS诱导的A549细胞凋亡,降低炎症因子表达水平,改善A549细胞损伤,其作用机制可能与靶向调控HMGB1表达有关。

探讨HMGB1对诱导人肺腺癌上皮细胞(A549)上皮间质转化的影响

目的研究HMGB1对诱导人肺腺癌上皮细胞(A549)上皮间质转化的影响。方法通过不同浓度rHMGB1(0、0.5、1、2、4μg/mL)体外刺激A549细胞,western blot检测各浓度组vimentin蛋白相对表达量,得出rHMGB1体外刺激的最佳作用浓度。然后分三组实验,HMGB1组、TGF-β组(阳性对照)、control组(阴性对照),分别以2μg/mL rHMGB1、2μg/mL TGF-β、RPMI1640培养基体外刺激A549细胞。37℃、5%CO_(2)培养48 h或96 h后,MTT检测各组细胞增殖率、transwell检测各组细胞迁移能力,western blot检测各组细胞E-cadherin、vimentin和snail1蛋白相对表达量。结果HMGB1组和TGF-β组分别与control组比较,细胞增殖率显著增加(分别为P<0.0001和P<0.01);细胞迁移数量明显增加(P<0.0001);胞内snail1、vimentin蛋白相对表达量明显增加(P<0.0001),E-cadherin蛋白相对表达量明显降低(P<0.0001)。结论HMGB1体外有诱导人肺腺癌上皮细胞(A549)上皮间质转化的作用。

肺复方通过PI3K/Akt/Nrf2信号通路对A549/DDP细胞耐药性的影响

目的观察肺复方对人肺癌顺铂耐药株A549/DDP细胞耐药性的作用及对PI3K/Akt/Nrf2信号通路的影响。方法选用A549/DDP细胞设立不含药血清的空白对照组、肺复方组、顺铂组、联合组,流式细胞术检测各组细胞周期分布和细胞中活性氧(ROS)的变化,Western blotting和RT-PCR检测PI3K/Akt/Nrf2信号通路及下游血红素氧合酶1(HO-1)、NAD(P)H:醌氧化还原酶1(NQO1)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)的表达变化。结果与空白对照组、顺铂组相比,联合组引起细胞G1期阻滞,增加细胞内活性氧的累积,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与空白对照组比,肺复方组和联合组能减少Nrf2核转位,下调p-Akt、HO-1、NQO1、MRP1蛋白表达和mRNA表达水平,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论肺复方能够通过调控PI3K/Akt/Nrf2信号通路增加A549/DDP细胞对顺铂的敏感性。

LRRC15影响A549细胞自噬的作用研究

特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)是一种致病原因不明、进行性、慢性不可逆的间质性肺疾病。为探讨富含亮氨酸重复蛋白15(leucine-rich repeat-containing protein 15,LRRC15)在IPF的作用及调节机制,本研究构建了博来霉素(bleomycin,BLM)诱导的小鼠肺纤维化和A549细胞损伤模型,检测了LRRC15的表达变化。转染siLRRC15后分别采用MTT、GFP-RFP-LC3双荧光标记系统和免疫印迹等方法检测了细胞活性和自噬的变化。结果表明:BLM处理后,小鼠肺组织和A549细胞中LRRC15表达显著上调;将设计和合成的siLRRC15转入A549细胞,LRRC15的表达极显著降低,可以部分恢复BLM引起的细胞损伤;BLM处理A549细胞后,LC3-Ⅱ和P62蛋白呈现上升的趋势;GFP-RFP-LC3双荧光标记检测发现,BLM处理后自噬体数量明显增多;进一步用siLRRC15处理A549细胞后发现,自噬关键蛋白LC3-Ⅱ、ATG5、ATG7的表达增加,P62蛋白表达下调,自噬流的强度增加。以上研究结果说明LRRC15是IPF中上皮细胞损伤的指示剂,可能通过调节自噬参与纤维化过程中的调节,本研究为进一步阐明IPF的机制提供了必要的理论依据。

DCLK1激活FAK/PI3K/AKT/mTOR信号通路促进A549细胞的恶性行为

目的探讨双肾上腺素皮质样激酶1(DCLK1)对A549细胞增殖、迁移、侵袭等恶性生物学行为的影响,并探究可能涉及的相关分子机制。方法慢病毒感染法建立稳定表达DCLK1分子的A549细胞系,反转录-聚合酶链技术和蛋白质印记法进行鉴定。CCK-8与平板克隆实验检测过表达DCLK1后细胞增殖能力变化。Transwell实验观察过表达DCLK1对细胞迁移与侵袭能力的影响。癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析DCLK1对肺腺癌细胞的调控富集通路,蛋白质印记法进行验证。结果DCLK1在A549细胞中过表达可增加细胞的增殖、迁移与侵袭等能力,而抑制FAK/PI3K/AKT/mTOR信号通路可削弱DCLK1对A549细胞的恶性调控。结论DCLK1通过激活FAK/PI3K/AKT/mTOR信号通路,促进A549细胞的恶性生物学行为。

沉默MPZL1调控β-catenin对A549/Tax细胞干性及耐药性的影响

目的探讨髓磷脂蛋白零样蛋白1(MPZL1)沉默后是否通过调控β-catenin表达对A549/Tax耐药性和细胞干性产生影响。方法采用不同浓度阿霉素和紫杉醇处理A549和A549紫杉醇耐药性(A549/Tax)细胞,观察两种细胞的耐药性差异。实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和Western blot检测A549和A549/Tax细胞中MPZL1的表达量差异。对A549/Tax细胞沉默或者过表达MPZL1,进一步将细胞分为对照(control)组、短发卡RNA阴性对照(sh-NC)组、MPZL1沉默(sh-MPZL1)组、过表达阴性对照(OE-NC)组、MPZL1过表达(OE-MPZL1)组,运用细胞计数试剂盒8(CCK-8)和平板克隆实验分别检测MPZL1的表达变化对A549/Tax细胞增殖和克隆形成能力的影响。Western blot检测Wnt/β-catenin抑制剂XAV939和激活剂CHIR-99201处理细胞后,不同蛋白的表达变化。结果A549/Tax细胞对阿霉素和紫杉醇的半数抑制浓度(IC 50)较A549细胞明显增加(P<0.01)。MPZL1在A549/Tax中呈更高的表达趋势。MPZL1敲除后A549/Tax对阿霉素和紫杉醇的IC 50分别为2.731 mg/ml和4.939μg/ml,较阴性对照组的4.541 mg/ml和13.55μg/ml降低(P<0.01)。CCK-8和克隆形成实验结果显示,MPZL1敲除抑制肺癌A549/Tax细胞的增殖活力和克隆形成能力(P<0.05);Western blot结果显示,与阴性对照组相比,MPZL1、肿瘤干性相关蛋白(CD44和CD133)、多药耐药蛋白1(MDR1)、肺耐药相关蛋白(LRP)和β-catenin在sh-MPZL1中的表达水平明显减少(P<0.01)。此外,XAV939可抑制MPZL1、CD44、CD133、MDR1、LRP和β-catenin的表达。CHIR-99201处理细胞后部分逆转敲除MPZL1对上述蛋白的抑制作用。结论MPZL1在肺癌A549/Tax细胞中高表达。敲除MPZL1可抑制肿瘤干性和细胞增殖,增强肺癌A549/Tax细胞对阿霉素和紫杉醇的敏感性。

黏蛋白13在肺腺癌组织中的表达及其对A549细胞恶性生物学行为的影响与可能的机制

目的:探讨黏蛋白13(MUC13)在肺腺癌组织中的表达及其对A549细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及EMT的影响与可能的机制。方法:通过癌症基因组图谱(TCGA)和高通量基因表达(GEO)数据库分析MUC13在肺腺癌组织与正常肺组织、癌旁组织中的差异表达。qPCR法和WB法检测人肺腺癌细胞NCI-H1395、NCI-H1975、H1299、A549和人正常肺上皮细胞BEAS-2B中MUC13 mRNA和蛋白的表达水平。利用si RNA技术敲低A549细胞中MUC13表达,实验分为si-MUC13组、NC组和si-MUC13+IGF-1组。通过克隆形成实验、流式细胞术和Transwell实验分别检测敲低MUC13对A549细胞增殖、细胞周期、凋亡、迁移和侵袭的影响,WB法检测敲低MUC13对A549细胞上皮钙黏素(E-cadherin)、神经钙黏素(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、EGFR、p-EGFR、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT等蛋白表达的影响。结果:MUC13 mRNA和蛋白在肺腺癌组织和细胞中均呈高表达(均P<0.01),选取表达水平较高的A549细胞进行后续实验。敲低MUC13后,A549细胞的增殖能力显著降低,G0/G1期的细胞数量显著增多、G2/M期及S期的细胞数量显著减少,细胞凋亡率显著升高,细胞迁移及侵袭能力均显著降低(均P<0.01);A549细胞中E-cadherin表达显著上调,N-cadherin、vimentin表达显著下调,p-EGFR/EGFR、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比值均显著降低(均P<0.01);再加入IGF-1处理后,A549细胞中p-EGFR/EGFR、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比值均显著升高(均P<0.01)。结论:MUC13在肺腺癌组织和细胞中均呈高表达,其可能通过激活EGFR/PI3K/AKT信号通路促进A549细胞增殖、迁移、侵袭和EMT。

miR-33a-5p靶基因分析验证及对人肺腺癌A549细胞增殖的影响

目的研究miR-33a-5p过表达对人肺腺癌A549细胞增殖的影响及探索其可能的机制。方法在A549细胞中瞬时转染miR-33a-5p mimics,CCK-8和BrdU实验检测细胞增殖能力,转录组测序(RNA-seq)检测mRNA表达水平,targetscan(8.0)、miRDB(2020)、miRWalk(release_2022_01)和ENCORI(starbase,v2.0)联合筛选miR-33a-5p的潜在靶基因,并与RNA-seq的下调表达的基因取交集,RT-qPCR进行基因表达验证。结果RT-qPCR结果显示,miR-33a-5p在A549细胞中高表达(P<0.05);CCK-8实验和BrdU实验结果显示,细胞增殖能力受到抑制(P均<0.05);RNA-seq结果显示,差异基因共494个,其中上调266个,下调228个;GO功能富集主要在细胞外区组成、质膜的组成、受体复合物、细胞外泌体、细胞外基质结构组成、钙离子结合等,KEGG富集主要在补体和凝血途径、胰岛素抵抗、ABC转运途径、IL-17途径、NOD样受体途径和NF-κB信号通路等;靶基因预测分析和RT-qPCR表达验证显示,MTHFD2、OSBPL6、HADHB、HMGCLL1、GUCY1A2和DEPTOR是miR-33a-5p的潜在靶基因(P均<0.05)。结论miR-33a-5p可能通过调控MTHFD2、OSBPL6、HADHB、HMGCLL1、GUCY1A2和DEPTOR基因转录后表达水平来抑制A549细胞的增殖。

右美托咪定通过调控miR-1307表达对肺癌A549细胞生物学行为的影响

目的通过检测miR-1307表达水平,分析右美托咪定(dexmedetomidine,Dex)对肺癌A549细胞生物学行为影响的可能机制。方法人肺癌A549细胞接种后培养24h,采用数字表法随机分为4组:肺癌A549细胞组、Dex20μg/ml组、Dex 40μg/ml组及Dex 80μg/ml组;每组每孔设6个平行样,各组细胞培养结束后,通过CCK-8法测定细胞增殖能力,应用Annexin V-FITC/PI双染法观察细胞凋亡,Matrigel膜及Transwell法测定细胞侵袭力及迁移水平,采用实时荧光定量PCR检测各组细胞中miR-1307的表达水平。结果Dex能抑制肺癌A549细胞活力,且作用呈浓度依赖性及时间依赖性;Dex可诱导肺癌A549细胞凋亡,当Dex浓度达到80μg/ml,其凋亡率可升至22.23%;Dex可抑制肺癌A549细胞的迁移与侵袭能力,且呈浓度依赖性。此外,与对照组比较,Dex处理后A549细胞中miR-1307的相对表达量明显下降,且随着Dex浓度的增加下降更为明显。结论Dex能有效抑制肺癌A549细胞的增殖、侵袭、迁移,促进其凋亡,并呈剂量依赖性,其作用可能与其调控miR-1307的表达有关。

黄芩苷通过抑制IL1R2表达对A549肺癌细胞增殖、迁移及凋亡的作用及机制研究

目的探究黄芩苷通过抑制IL1R2在A549肺癌细胞增殖、迁移及凋亡中的作用,并探究可能作用机制。方法体外培养A549肺癌细胞,转染si-IL1R2质粒分为对照组、低表达IL1R2组、黄芩苷+低表达IL1R2组、过表达IL1R2组、黄芩苷+过表达IL1R2组,对照组正常培养细胞,含有黄芩苷的实验组采用200mol/L的黄芩苷处理24h。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法测定IL1R2表达;采用CCK-8法、Transwell、流式细胞法分别观察细胞增殖、迁移能力及凋亡情况;采用Western Blotting法观察各组白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-ɑ(TNF-ɑ)表达。结果IL1R2低表达组干扰后A549细胞的增殖受到抑制,IL1R2过表达组则明显促进细胞增殖;低表达IL1R2组较对照组细胞迁移个数降低,过表达IL1R2组细胞迁移个数较对照组升高,与低表达IL1R2组细胞迁移个数相比,黄芩苷+低表达IL1R2组细胞迁移个数降低明显;与过表达IL1R2组迁移个数相比,黄芩苷+过表达IL1R2组细胞迁移个数降低;与对照组相比,过表达IL1R2组、黄芩苷+过表达IL1R2组细胞凋亡率均降低;黄芩苷+过表达IL1R2组较过表达IL1R2组细胞凋亡率升高;低表达IL1R2组IL-1β、IL-6、TNF-α等细胞因子表达明显下降,过表达IL1R2组各组细胞因子表达明显升高,黄芩苷+过表达IL1R2组各组细胞因子表达较过表达IL1R2组降低。结论黄芩苷通过抑制IL1R2表达抑制肺癌细胞的A549肺癌细胞增殖、迁移,促进肺癌细胞凋亡。

苍术素通过激活RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路诱导非小细胞肺癌A549细胞程序性坏死并抑制裸鼠移植瘤生长

目的:探讨苍术素(ATR)通过调节受体相互作用蛋白激酶(RIPK)1/RIPK3/混合谱系激酶结构域样(MLKL)信号通路对非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞程序性死亡及裸鼠移植瘤生长的影响。方法:使用0~160μmol/L的ATR处理A549细胞,MTT法检测细胞存活率以确定后续实验给药浓度。使用ATR和/或RIPK1抑制剂Nec-1(necrostatin-1)、caspase抑制剂Z-VADFMK处理A549细胞,验证ATR是否诱导A549细胞发生程序性坏死。将A549细胞分为对照组、ATR-L组、ATR-M组、ATR-H组(分别用0、10、20、40μmol/L ATR处理)、ATR+Nec-1组(40μmol/L ATR+50μmol/L Nec-1处理),处理24 h后,采用PI单染及Hoechst33342/PI双染法检测细胞死亡情况、透射电镜观察细胞死亡形态、DCFH-DA荧光探针法检测细胞内ROS水平、JC-1染色法检测线粒体膜电位、WB法检测细胞中RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路相关蛋白质的表达水平。构建A549细胞裸鼠移植瘤模型,用10 mg/kg ATR(溶于玉米油中)对裸鼠灌胃给药5周,观察ATR对移植瘤生长的影响,WB法检测移植瘤组织中RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路相关蛋白质的表达水平。结果:10~160μmol/L的ATR可显著抑制A549细胞增殖,选择10、20、40μmol/L的ATR进行后续实验。ATR组A549细胞存活率显著低于对照组(P<0.01)和ATR+Nec-1组(P<0.01),而ATR+z-VAD组细胞存活率显著低于z-VAD组(P<0.01),说明ATR可诱导A549细胞发生程序性坏死而非凋亡。与对照组比较,ATR处理组A549细胞发生肿胀,线粒体内脊消失呈空泡化,细胞内容物向外泄漏,细胞核聚集,表现为坏死特征,ATR-L组、ATR-M组、ATR-H组A549细胞死亡率、ROS水平及p-RIPK1、p-RIPK3、p-MLKL表达水平均显著升高,线粒体膜电位显著降低(均P<0.01),且呈药物浓度依赖性;与ATR-H组比较,ATR+Nec-1组细胞死亡率、ROS及p-RIPK1、p-RIPK3、p-MLKL表达水平降低,线粒体膜电位显著升高(均P<0.01)。裸鼠移植瘤实验结果显示,与对照组比较,ATR组裸鼠移植瘤体积、移植瘤质量均降低(P<0.05,或P<0.01),而与瘤组织中p-RIPK1、p-RIPK3、p-MLKL蛋白表达水平均显著升高(均P<0.01)。结论:ATR可能通过激活RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路诱导A549细胞发生程序性坏死,抑制A549细胞及其裸鼠移植瘤的生长。

基于JAK2/STAT3通路研究周氏固金消瘤汤含药血清对人肺腺癌A549细胞侵袭迁移能力的影响

目的:探讨周氏固金消瘤汤(ZSGJXLT)含药血清对人肺腺癌A549细胞侵袭迁移能力的影响及其机制。方法:应用健康SD大鼠制备ZSGJXLT含药血清与空白血清,将0%(空白血清)及5%、10%、20%、30%、40%ZSGJXLT含药血清作用于A549细胞,CCK-8法测算细胞活性抑制率和半数抑制浓度(IC_(50))。用0%ZSGJXLT(空白对照组)、5%ZSGJXLT(ZSGJXLT低剂量组)、10%ZSGJXLT(ZSGJXLT中剂量组)及20%ZSGJXLT(ZSGJXLT高剂量组)含药血清培养A549细胞,细胞划痕实验及高内涵细胞成像技术观察细胞运动情况;Transwell侵袭及迁移实验观察细胞侵袭及迁移情况;Western blot法检测A549细胞JAK2/STAT3通路相关蛋白表达情况。结果:与空白对照组相比,不同浓度ZSGJXLT含药血清组A549细胞活性受到不同程度的抑制,与时间及浓度呈正相关性,24 h的IC_(50)为25.42%。与空白对照组相比,ZSGJXLT中、高剂量组A549细胞划痕愈合率、细胞移动速度均显著下降(均P<0.05),不同浓度ZSGJXLT含药血清组A549细胞侵袭及迁移数量明显减少(均P<0.05)。与空白对照组比较,ZSGJXLT中、高剂量组A549细胞的p-JAK2、p-STAT3、VEGFA蛋白表达水平显著降低(均P<0.05);不同浓度ZSGJXLT含药血清组MMP-2、MMP-9、N-cadherin蛋白表达有下调趋势,而E-cadherin蛋白表达有上调趋势,呈剂量依赖性,其中ZSGJXLT高剂量组与空白对照组比较差异有统计学意义(均P<0.05)。结论:周氏固金消瘤汤含药血清能抑制A549细胞侵袭迁移能力,其机制可能与调控JAK2/STAT3通路有关。

基于生信分析探索STARD8表达对肺癌A549细胞生物学功能的影响

目的探讨STARD8对肺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡生物学功能的影响。方法从美国国家生物技术信息中心(NCBI),获取两份公开的基因芯片数据集(GSE18842和GSE68571),运用limma R包识别差异表达基因(DEGs)。采用最小绝对收缩和选择算子(LASSO)回归法结合SVM-RFE算法对候选基因进行筛选,构建受试者工作特征(ROC)曲线,应用CIBERSORT工具进行免疫浸润分析。通过RT-qPCR和Western blot分析STARD8在对照组及肺癌组的mRNA及蛋白水平,通过细胞平板克隆、Transwell、细胞划痕及流式细胞实验分析STARD8对A549细胞的增殖、侵袭、迁移及凋亡能力的影响。结果共筛选出285个上调基因和377个下调基因,取交集得到1个诊断标志物基因STARD8,免疫分析显示CD4 T细胞、NK细胞出现免疫抑制。肺癌组中STARD8的mRNA及蛋白表达均下调(P均<0.05)。STARD8过表达时肺癌A549细胞的增殖、侵袭及迁移能力降低,凋亡能力增加(P均<0.05)。结论STARD8可抑制肺癌A549细胞增殖、侵袭及迁移,促进细胞凋亡。

芹菜素通过AMPK/mTOR通路调控肺癌A549细胞自噬

目的 探讨芹菜素(APG)对肺癌A549细胞增殖及自噬的影响及其与AMPK/mTOR通路的关系。方法 体外培养肺癌A549细胞,采用CCK-8法检测不同浓度芹菜素处理A549细胞不同时间后对细胞增殖的影响。后续实验分为空白对照组(0μmol/L APG),低、中、高浓度实验组和抑制剂组5组,采用MDC染色法检测各组对细胞自噬的影响,免疫印迹法检测自噬相关蛋白以及AMPK/mTOR通路相关蛋白表达情况。结果 芹菜素可显著抑制A549细胞增殖,且呈浓度依赖性(P<0.05);20、40、80μmol/L芹菜素组随作用时间延长,对A549细胞的增殖抑制率逐渐增加,呈时间依赖关系(P<0.05)。与空白对照组比较,实验组A549细胞中含高亮点状荧光的自噬小泡数量及IOD值逐渐增加(P<0.05),芹菜素可浓度依赖性上调LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、p-AMPKα蛋白表达水平及p-AMPKα/AMPKα比值(P<0.05),下调p-mTOR、p62蛋白表达水平及p-mTOR/mTOR比值(P<0.05)。与高浓度实验组比较,抑制剂组细胞中含高亮点状荧光的自噬小泡减少,IOD值下降,LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、p-AMPKα蛋白表达水平及p-AMPKα/AMPKα比值降低,而P62、p-mTOR蛋白表达水平及p-mTOR/mTOR比值升高(P<0.05)。结论 芹菜素能抑制肺癌A549细胞增殖,诱导其自噬,作用机制可能与AMPK/mTOR通路有关。

苦参碱对肺癌细胞A549增殖、凋亡和迁移的作用及机制研究

目的探讨苦参碱对肺癌A549细胞增殖、凋亡和迁移的作用及其机制。方法以不同浓度的苦参碱干预A549细胞,采用CCK-8检测细胞增殖能力变化;Hoechst 33528/PI双染分析细胞凋亡形态变化;划痕实验分析细胞迁移能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力;Western Blot检测Opa1、p53、Bcl-2、Bax、Caspase-3、Cleaved-caspase-3、N-cadherin和Vimentin蛋白的表达。结果苦参碱可以降低肺癌细胞A549的增殖活性、提高A549细胞凋亡率。划痕和Transwell实验证实苦参碱可以抑制A549细胞的侵袭转移能力。Western Blot检测发现苦参碱可以提高A549细胞中p53、Bax和Cleaved-caspase-3蛋白的表达,同时可以抑制A549细胞中Opa1、Bcl-2、Caspase-3、N-cadherin和Vimentin蛋白的表达,且随着浓度变化呈量效关系。结论苦参碱具有抑制肺癌细胞增殖和迁移侵袭,增强细胞凋亡的药理作用,其中药理学机制与其对Opa1/p53/Bcl-2/Bax/Caspase-3信号轴、N-cadherin和Vimentin的调控有关。

补中益气汤含药血清对TGF-β介导的A549/DDP细胞Snail、E-cadherin表达的影响

目的观察补中益气汤含药血清对转化生长因子(TGF)-β1诱导前后,A549/DDP细胞Snail、E-钙黏蛋白(cadherin)表达的影响,探讨补中益气汤对A549/DDP细胞上皮-间充质转化(EMT)的干预作用。方法A549/DDP细胞分为:空白组、TGF-β1组(TGF-β15 ng/L,48 h)、中药组(10%补中益气汤含药血清)、干扰组(Snail干扰)。采用siRNA技术,运用免疫细胞化学法、Western印迹法、实时荧光定量PCR法,检测补中益气汤含药血清对A549/DDP细胞Snail、E-cadherin及mRNA水平的影响。结果与空白组比较,TGF-β1组E-cadherin及mRNA表达水平显著下调(P<0.05);与TGF-β1组比较,中药组及干扰组E-cadherin及mRNA表达水平显著上调(P<0.05)。而Snail蛋白及mRNA水平的影响呈现相反的变化趋势。结论Snail作为转录因子,可抑制E-cadherin基因的表达,诱导EMT发生,而补中益气汤含药血清可通过干预Snail蛋白及基因的表达,解除其对E-cadherin的抑制作用,从而逆转A549/DDP细胞EMT。

复方丹皮酚纳米乳对A549裸鼠移植瘤生长的影响

目的研究复方丹皮酚纳米乳对人肺腺癌A549细胞裸鼠移植瘤生长的影响。方法建立A549细胞裸鼠移植瘤模型,将小鼠随机分为模型组,康莱特注射液组(1400 mg/kg),复方丹皮酚纳米乳低、中、高剂量组(48、96、192 mg/kg)。从给药当天开始,每5 d测量移植瘤最长径和最短径,计算肿瘤体积,绘制生长曲线。给药结束后取肿瘤组织,HE染色观察其细胞形态变化,免疫组化法检测Bax、Bcl-2、COX-2蛋白表达。结果与模型组比较,复方丹皮酚纳米乳高剂量组能抑制肿瘤体积的增长;中、高剂量组肿瘤细胞核分裂相减少,细胞坏死和凋亡增多,Bax蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01),Bcl-2、COX-2蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。结论复方丹皮酚纳米乳能促进A549裸鼠移植瘤细胞坏死和凋亡,抑制细胞生长,其作用机制可能是促进Bax蛋白表达,抑制COX-2、Bcl-2蛋白表达。

miR-152-3p对非小细胞肺癌A549细胞顺铂敏感性的作用及分子机制研究

目的:探究miR-152-3p对非小细胞肺癌A549细胞顺铂敏感性的作用及其分子机制。方法:采用顺铂处理体外培养的A549细胞,检测细胞内miR-152-3p、SOS1表达水平的变化;采用荧光素酶活性检测法分析miR-152-3p与SOS1的调控关系。A549细胞转染miR-152-3p慢病毒过表达载体、SOS1慢病毒过表达载体或慢病毒空载体,采用顺铂处理转染的细胞,比较miR-152-3p过表达或SOS1过表达对A549细胞增殖、细胞周期、凋亡及迁移的影响。结果:与正常培养的A549细胞相比,顺铂处理的A549细胞内miR-152-3p表达水平显著降低,而SOS1表达水平显著升高(P<0.05);生物信息学分析显示SOS1是miR-152-3p的一个潜在靶基因,而荧光素酶活性检测法分析显示miR-152-3p具有负调控SOS1的作用。与转染空载体的A549细胞相比,miR-152-3p过表达显著抑制A549细胞增殖及迁移、阻滞细胞周期、促进细胞凋亡(P<0.05)。miR-152-3p过表达的A549细胞内SOS1表达水平显著低于转染空载体的细胞(P<0.05);与单独转染miR-152-3p过表达载体的细胞相比,同时转染miR-152-3p过表达载体和SOS1慢病毒过表达载体的A549细胞增殖、迁移增强,且细胞凋亡受到显著抑制(P<0.05)。结论:miR-152-3p通过抑制SOS1表达增强A549细胞对顺铂的敏感性,继而抑制A549细胞增殖、迁移,阻滞细胞周期以及促进A549细胞凋亡。

丹参酮Ⅱ_(A)对人肺腺癌细胞A549生物学行为的影响初探

目的探讨丹参酮Ⅱ_(A)对人肺腺癌细胞A549增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响。方法实验分为空白对照组(A组,等体积培养基),顺铂组(B组,10μg/mL顺铂),丹参酮Ⅱ_(A)低、中、高剂量组(C1组、C2组、C3组,5,10,20μmol/L),各组细胞以加入相应药物或培养基处理。采用MTT法检测细胞增殖情况,划痕实验法观察细胞迁移情况,Transwell法检测细胞侵袭力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法及Western blot法检测细胞基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、整合素(integrin)α2、integrinβ1、细胞周期蛋白B1(Cyclin B1)、半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)mRNA和蛋白的表达水平。结果与A组比较,B组及C1组、C2组、C3组细胞处理24,48,72 h时的增殖率均显著降低,24 h时的迁移细胞数及侵袭细胞数均显著减少,凋亡率均显著升高(P<0.05)。与A组比较,B组及C1组、C2组、C3组细胞处理24 h的G0/G1期细胞占比均显著升高,S期、G2/M期细胞占比均显著降低(P<0.05)。与A组比较,B组及C1组、C2组、C3组细胞处理24 h的MMP-2,MMP-9,integrinα2,integrinβ1,Cyclin B1的mRNA和蛋白表达水平均显著降低,Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。结论丹参酮Ⅱ_(A)可抑制A549细胞的增殖、侵袭、迁移,并促进其凋亡,其作用机制可能与下调MMP-2,MMP-9,integrinα2,integrinβ1,Cyclin B1的表达和上调Caspase-3的表达有关。

白藜芦醇脂质体对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨白藜芦醇脂质体(RES-LIP)对人肺腺癌A549细胞增殖与凋亡的影响。方法采用薄膜旋转蒸发-超声法,制备RES-LIP。分别用0、5、10、20、40μg/ml RES和RES-LIP处理A549细胞24 h后,采用MTT法检测细胞增殖活性。选取浓度为10μg/ml RES和RES-LIP干预细胞24 h,倒置相差显微镜与荧光显微镜分别观察细胞与细胞核形态;流式细胞术检测细胞凋亡和线粒体膜电位变化情况。结果制备了药物包载率高且粒径小的新型RES-LIP。细胞增殖活性随着药物浓度的增加而降低;与RES组相比,RES-LIP组A549细胞增殖活力明显降低(P<0.05)。药物组细胞形态改变,细胞数目减少;细胞核固缩,出现明显的凋亡现象。RES-LIP组上述细胞形态变化比RES组更为显著。RES和RES-LIP处理可以明显促进A549细胞凋亡,显著降低细胞线粒体膜电位;且RES-LIP组变化比RES组更为显著。结论RES-LIP可以通过降低线粒体膜电位,有效抑制A549细胞增殖、诱导细胞凋亡,RES-LIP对A549作用显著强于游离药物组。