人肺腺癌耐药细胞株A549/CDDP中相关泛素化蛋白质研究

目的研究肺腺癌中与耐药相关的泛素化或类泛素化蛋白质及其与耐药的关系。方法从经顺铂处理和未处理的A549细胞及其耐顺铂细胞株中分离泛素化、类泛素化蛋白质,通过1D SDS-PAGE和Chip HPLC-MS/MS分析鉴别蛋白,Western blot法验证质谱结果;MTT法检测细胞对顺铂的耐药性。结果鉴定出发生类泛素化修饰蛋白质-PKM2,并发现其在耐药细胞株中低表达;以蛋白酶体抑制剂MG132干预细胞后,PKM2表达上调;CDDP和MG132联合作用细胞后,细胞耐药性下降。结论细胞中PKM2表达水平与肿瘤细胞耐药程度呈负相关,PKM2受蛋白质类泛素化修饰-SUMO化修饰调节,提示PKM2可能与肿瘤耐药的发生密切相关。

托瑞米芬逆转肺癌耐药细胞株A549/cDDP耐药性的研究

目的:探讨托瑞米芬(TOR)对耐顺铂(cDDP)细胞株A549的逆转作用,为临床应用提供实验数据。方法:用不同浓度的托瑞米芬单独及与cDDP联合与耐药细胞A549共同培养,通过MTT法和流式细胞仪法检测其对A549/cDDP的逆转及增敏效果。结果:经不同浓度的托瑞米芬单独及与cDDP联合与耐药细胞A549共同培养后,单独TOR(5μmol/L、10μmol/L)对A549/cDDP细胞的增殖均无明显影响,各组间数据无明显差异(P>0.05)。当cDDP与TOR联合作用时无论TOR终浓度5μmol/L或10μmol/L,均能明显增加cDDP对A549/cDDP细胞的敏感性(P<0.05,P<0.001)。其IC50值分别为39.06μmol/L和30.64μmol/L,逆转倍数分别为2.05倍和2.65倍。cDDP+TOR终浓度5μmol/L与cDDP+TOR终浓度10μmol/L之间除了在cDDP浓度为200μmol/L时两者有差异(P<0.05)外其它均无明显差异。结论:托瑞米芬与DDP联合应用可以提高A549/cDDP的逆转及治疗效果。

大黄酸对耐顺铂A549/cDDP细胞株的耐药逆转作用及机制研究

目的观察大黄酸对耐顺铂(cDDP)A549/cDDP细胞的耐药逆转作用并探讨其可能的作用机制。方法用不同浓度的大黄酸与耐药细胞A549/cDDP共同培养,通过MTT法检测细胞增殖抑制率并确定大黄酸逆转耐药最佳浓度;将对数生长期的细胞随机分成2组,对照组分别加入不同浓度的cDDP,实验组在对照组基础上加入2μg/ml的大黄酸,同时设空白对照组,采用MTT法测算细胞增殖抑制率,计算两组细胞cDDP的半数抑制浓度(IC50)及大黄酸的逆转耐药倍数;将对数生长期的细胞分为2组,对照组加入2μg/ml cDDP,实验组在对照组的基础上加入2μg/ml的大黄酸,同时设空白对照组,流式细胞仪检测各组细胞P蛋白(P-gp)及多药耐药相关蛋白-1(MRP-1)的表达。结果随着大黄酸浓度的增加,其细胞增殖抑制率不断增加(P<0.05),大黄酸逆转耐药的最佳浓度为2μg/ml;对照组IC50为31.642μg/ml,实验组IC50为21.412μg/ml,大黄酸的逆转耐药倍数为1.48倍;大黄酸能下调A549/cDDP细胞P-gp及MRP的表达。结论大黄酸可逆转耐cDDP的A549/cDDP细胞株的耐药性,其作用机制可能与下调P-gp及MRP-1蛋白表达有关。

托瑞米芬逆转肺癌耐药细胞株A549/cDDP耐药性的应用

目的讨论托瑞米芬(TOR)对耐顺铂(cDDP)细胞株A549的逆转作用。方法将不同浓度TOR分别与耐药细胞A549及cDDP进行同时培养,分析A549/cDDP的逆转情况和增敏效果。结果当TOR浓度为10μmol/L或5μmol/L时,A549/cDDP细胞增殖未受到影响(P>0.05);当TOR和cDDP共同应用时,其10μmol/L和5μmol/L浓度均可提升对A549/cDDP细胞的敏感性(P<0.05);TOR联合cDDP的终浓度在5μmol/L和10μmol/L时,除了cDDP浓度处于200μmol/L时存在统计学差异(P<0.05)以外,其余浓度均无统计学意义(P>0.05);IC50值为39.04μmol/L时,其逆转倍数为2.04倍,IC50值为30.61μmol/L时,其逆转倍数为2.61倍。cDDP+TOR终浓度5μmol/L和cDDP+TOR终浓度10μmol/L在cDDP 200μmol/L情况下存在统计学差异(t=2.965,P=0.006),除cDDP 200μmol/L浓度以外,均无统计学意义(P>0.05)。结论TOR联合cDDP应用时,可以有效提升A549/cDDP的转录和治疗效果。

榄香烯乳诱导线粒体凋亡途径逆转肺癌A549/DDP细胞株耐药

目的:探讨榄香烯乳(elemene,ELE)逆转人肺腺癌耐顺铂(cisplatin,DDP)细胞A549/DDP的耐药性及作用机制。方法:采用MTT法检测榄香烯乳单用的细胞毒作用及与DDP合用时耐药逆转作用。荧光探针JC-1结合激光共聚焦显微镜检测线粒体膜电位的变化。DCFH-DA荧光探针结合流式细胞仪检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。用谷胱甘肽试剂盒结合分光光度法检测计算GSH/(GSSG+GSH)比值。蛋白质印迹法检测胞质中Cyto C、Pro-caspase-3、Caspase-3和Bcl-2家族蛋白表达情况。结果:不同浓度榄香烯乳抑制A549/DDP细胞株生长,呈时间-剂量依赖性效应,联合顺铂能提高A549/DDP细胞株对顺铂的敏感性而逆转耐药。不同浓度榄香烯乳联合顺铂使A549/DDP细胞株线粒体膜电位下降,ROS浓度增加,GSH/(GSSG+GSH)比值降低,上调胞质中Cyto C、Caspase-3、Bad蛋白表达,下调Pro-caspase-3、Bcl-2蛋白表达。结论:榄香烯乳逆转A549/DDP细胞株耐药性可能与其损伤线粒体膜,活化胞内氧化还原体系,诱导线粒体凋亡路径有关。

四嗪二甲酰胺对肺癌细胞株A549的体内外作用

为了观察四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)体外抑制肺癌细胞株A549增殖、诱导细胞凋亡和体内抗肿瘤活性的作用及其机制,将不同浓度的ZGDHu-1与A549细胞在体外培养,用台盼蓝染色、SRB法、5′-溴-2′脱氧尿苷-ELISA法,观察ZGDHu-1对A549细胞增殖的作用;用细胞形态学、DNA凝胶电泳、DNA含量及细胞周期分析、AnnexinV/PI双标记、Hoechst33258荧光染色等技术检测细胞凋亡。腹腔注射ZGDHu-1后观察其对裸鼠移植瘤生长的抑制作用。用RT-PCR和流式细胞术观察A549细胞bcl-2,bax,p53基因和蛋白质的表达改变。结果表明,ZGDHu-1能抑制A549细胞的增殖和活力,呈现作用时间和剂量的依赖关系。A549细胞经ZGDHu-1作用后,大部分细胞阻滞于G2-M期;出现DNA片段化,亚G1峰显著增加,AnnexinV+/PI-表达升高,Hoechst33258荧光染色后出现凋亡细胞的特征性改变等。ZGDHu-1以10,20及40mg.kg-1剂量给裸鼠体内用药14d后,移植瘤生长抑制率分别为43.7%,56.9%和60.0%。A549细胞经ZGDHu-1作用后,bcl-2基因和蛋白有所下调,但主要是上调bax基因和蛋白,导致bax/bcl-2比值明显增高,p53基因和蛋白表达也上调,均呈现剂量依赖性。ZGDHu-1在体内能明显抑制移植瘤的生长,体外通过诱导细胞凋亡抑制A549细胞增殖,其机制可能与上调bax和p53基因的表达有关。

吴茱萸碱逆转人肺癌细胞株A549/DDP耐药机理的实验研究

目的观察吴茱萸碱逆转人肺腺癌耐药株A549/DDP细胞耐药性的效果并探讨其与阻断NF-κB信号传导通路的相关性。方法采用MTT法检测单用吴茱萸碱、顺铂(DDP)以及两药联用在不同时间对A549/DDP细胞的增殖影响,计算IC50及耐药逆转倍数。流式细胞仪检测各组细胞的凋亡情况。RT-PCR检测各组MDR1、NF-κB、Bcl-2、MMP-2和VEGF的mRNA表达。Westernblot法检测各组细胞的pIκB-α、pIKKα蛋白表达水平。结果吴茱萸碱0.125mg/L、0.25mg/L针对A549/DDP细胞对DDP的耐药逆转倍数分别为3.668和11.48。RT-PCR显示在吴茱萸碱作用下检测基因的mRNA表达随着吴茱萸碱浓度的增加和时间的延长其表达逐渐下降。当吴茱萸碱与DDP联用时,可明显提高A549/DDP细胞对化疗药的敏感性,凋亡细胞显著增加(P<0.05)。Westernblot法结果提示A549/DDP细胞中pIκB-α的表达水平随着吴茱萸碱作用时间的延长逐渐下降,pIKKα表达则无显著变化。结论吴茱萸碱可以通过抑制IκB-α的磷酸化阻断NF-κB信号通路,促进细胞凋亡,抑制细胞增殖,增加耐药细胞对DDP的敏感性。

榄香烯诱导人肺癌细胞株A549凋亡研究

目的:探索榄香烯对体外培养人肺癌细胞株的作用及其原因。方法:设不同浓度(0.5、1、2、8、16μmol/L)的榄香烯实验组和一个空白阴性对照组,应用MTT方法分析榄香烯对肺癌细胞株A549生长的影响。免疫细胞化学及流式细胞仪检测bcl-2、p53表达。结果:榄香烯能明显抑制肺癌细胞生长。透射电镜超微结构证实榄香烯能诱发肿瘤细胞凋亡的典型形态变化;流式细胞仪检测到Bcl-2蛋白表达降低,p53蛋白表达增多;RT-PCR检测bcl-2 mRNA水平下降。结论:榄香烯能诱导肺癌细胞凋亡,其作用机制可能与癌基因bcl-2表达减少、抑癌基因p53表达增多有关。

miRNA765高表达对胃癌耐药细胞株BGC-823/CDDP耐药性的影响

目的观察miRNA765高表达对胃癌顺铂(CDDP)耐药细胞株BGC-823/CDDP耐药性的影响。方法将PCR扩增的包含miRNA765前体的基因序列克隆至真核表达载体,构建miRNA重组表达载体;阳离子脂质体转染重组质粒到BGC-823/CDDP细胞。转染后48 h,Real-Time PCR和Western blotting法分别检测细胞中miRNA765和细胞因子诱导的凋亡抑制因子1(CIAPIN1)蛋白的相对表达量;采用不同浓度CDDP处理转染后48 h的BGC-823/CDDP细胞,24和48 h后MTT法检测细胞活性并计算细胞对于CDDP的半抑制浓度(IC50)。采用终质量浓度为1μg/mL的CDDP处理基因干预后的BGC-823/CDDP细胞,双染法检测细胞凋亡率。结果 BGC-823/CDDP细胞内miRNA765的相对表达量明显低于其亲本细胞BGC-823,CIAPIN1蛋白相对表达量则明显高于其亲本细胞株(均P<0.01)。在BGC-823/CDDP细胞内高表达miRNA765可明显抑制CIAPIN1蛋白的表达,转染后48 h的CIAPIN1蛋白表达量明显低于未转染组(P<0.01);miRNA765高表达可明显降低BGC-823/CDDP细胞的耐药能力,48 h后IC50值从(18.27±3.92)μg/mL降至(1.50±0.43)μg/mL(P<0.05)。转染48 h后,BGC-823/CDDP细胞的凋亡率从(10.1±1.7)%上升至(53.4±7.9)%(P<0.01)。结论 miRNA765高表达可以明显降低胃癌耐药细胞株BGC-823/CDDP的耐药能力。

榄香烯乳剂对肺癌A549/DDP细胞株耐药逆转作用及其机制

目的:探讨榄香烯乳(elemene,ELE)逆转人肺腺癌A549/DDP细胞株耐药性及其机制。方法:采用MTT法检测榄香烯乳单用的细胞毒作用及与顺铂(cisplatin,DDP)合用时耐药逆转作用;采用流式细胞术检测榄香烯乳对A549/DDP细胞内罗丹明-123(rhodamine-123,Rh123)蓄积的影响;采用Western blot检测榄香烯乳对耐药细胞A549/DDP细胞膜上P-gp蛋白表达的影响。结果:不同浓度榄香烯对A549/DDP细胞均有一定的抑制作用,呈时间-剂量依赖性效应。单用DDP的IC50为15.46μg/ml,合用20μg/ml榄香烯24h,IC50为4.15μg/ml,逆转耐药倍数为3.63。同时,榄香烯增加A549/DDP细胞内Rh123的蓄集,降低细胞膜上Pgp的表达,且呈剂量依赖性,表明榄香烯能减少A5 4 9/DDP细胞对药物的外排和抑制P-gp蛋白的表达。结论:榄香烯在体外逆转肿瘤细胞耐药性可能与其抑制P-gp的功能和表达有关。

虎杖提取物对人肺癌A549细胞株抑制增殖和诱导凋亡作用的研究

目的:研究虎杖提取物对人肺癌A549细胞株的抑制增殖及诱导凋亡作用,并探讨其作用机制,为新药开发提供实验和理论依据。方法:应用末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的脱氧核苷酸缺口末端标记(TdT-mediated dUTP nick endlabeling,TUNEL)法检测虎杖提取物对细胞诱导凋亡的情况;采用流式细胞仪检测A549细胞株的细胞周期分布相和细胞凋亡率;通过免疫细胞化学S-P法测定凋亡关键酶Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9与凋亡相关基因产物bcl-2,以及与细胞周期有关的p21ras、Ki-67蛋白的表达情况,深入探讨虎杖提取物对人肺癌细胞株诱导凋亡的机制。结果:(1)TUNEL法检测结果:虎杖提取物40μg/mL作用细胞后凋亡细胞数目随时间延长而增多;加药组凋亡率与对照组相比有显著差异,同时凋亡指数呈时间依赖性和剂量依赖性;(2)流式细胞仪检测结果显示:虎杖提取物可以诱导A549细胞凋亡,加药组出现G0/G1期和G2/M期细胞比例显著增加(P<0.01),而S期细胞比例则明显下降,将细胞阻滞在G0/G1期;(3)免疫细胞化学结果表明:虎杖提取物作用后加药组Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9表达增强,Ki-67、p21ras蛋白随提取物浓度表达均降低,与对照组相比较均有显著性差异(P<0.01)。结论:1.虎杖提取物在体外对人肺癌A549细胞株有显著的抑制增殖和诱导凋亡作用。2.虎杖提取物抑制增殖作用机制可能与下调Ki-67、p21ras蛋白表达,细胞周期发生G0/G1期阻滞有关。3.虎杖提取物诱导凋亡作用机制可能与下调bcl-2蛋白表达,上调Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9蛋白表达,经由细胞凋亡的死亡受体和线粒体通路完成凋亡的启动和执行。

虎杖粗提物对人肺癌A549细胞株诱导凋亡作用的形态学观察

应用MTT法检测虎杖提取物对体外培养的人肺癌A549细胞株的抑制增殖作用的影响,通过倒置显微镜、HE染色、AO/EB荧光显微镜的方法观察肿瘤细胞的形态改变。结果显示,虎杖提取物在体外对A549人肺癌细胞株有明显的抑制增殖作用,而且这种抑制作用呈现浓度和时间的依赖性。细胞的形态学观察发现,虎杖提取物作用后出现凋亡细胞。认为虎杖提取物在体外对人肺癌A549细胞株有显著的抑制增殖和诱导凋亡作用。

人参皂苷CK对人肺腺癌A549细胞株的增殖抑制作用及其机制

目的:探讨人参皂苷CK对人肺腺癌A549细胞增殖的影响及其作用机制。方法:不同浓度的人参皂苷CK作用于人肺腺癌A549细胞株,MTT比色法测定细胞增殖抑制率;倒置显微镜观察细胞形态学变化;流式细胞术分析细胞周期及细胞凋亡;ELISA法检测细胞内源性VEGF含量的变化。结果:人参皂苷CK对A549细胞增殖有抑制作用,其抑制作用呈浓度和时间依赖关系;倒置显微镜下可观察到细胞明显的形态学改变;流式细胞仪可检测到实验组细胞出现明显的凋亡峰,且细胞周期被阻滞在G0/G1期;实验组细胞培养液中的VEGF低于对照组(P<0.05),且随着人参皂苷CK浓度增加和作用时间的延长,VEGF的含量降低(P<0.05)。结论:人参皂苷CK可抑制人肺腺癌A549细胞的增殖并诱导其凋亡,并能抑制其内源性分泌VEGF。

榄香烯乳对人肺腺癌A549细胞株凋亡蛋白表达的影响

目的:探讨榄香烯乳对人肺腺癌A549细胞株凋亡蛋白表达的影响。方法:体外培养人肺腺癌A549细胞株,四甲基偶氮唑蓝比色试验法(MTT法)测定不同浓度榄香烯乳在不同作用时间下对A549细胞株的生长抑制作用。IC软件计算10%的细胞抑制浓度(IC10)。免疫细胞化学染色观察榄香烯乳作用24h后A549细胞的Bcl-2、Bax、Survivin及VEGF蛋白的表达变化。结果:榄香烯乳对人肺腺癌A549细胞株增殖具有明显抑制作用,呈时间和剂量依赖性。榄香烯乳作用24h后IC10为43.49μg/ml,Bax蛋白表达增加,细胞质着色增强;Bcl-2蛋白表达下降,细胞质着色减弱;增殖蛋白Survivin和VEGF的表达下降,且具有药物浓度相关性。结论:榄香烯乳对人肺腺癌A549细胞株有明显的抑制作用,榄香烯乳可上调凋亡相关蛋白表达、诱导凋亡。

肺癌细胞株中GEM和CDDP药物敏感性相关基因的研究

背景与目的筛选小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)和非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞株中与健择(gemcitabine hydrochloride,GEM)和顺铂(cisplatin,CDDP)药物敏感性相关的基因,有助于进一步阐明抗癌药物作用机制,为克服抗癌药物的耐药性、研制开发新的抗癌药物提供新线索,同时也将为临床的个体化治疗提供理论依据。方法采用MTT比色分析法测定4株SCLC细胞株和6株NSCLC细胞株对CDDP和GEM的药物敏感性,同时应用cDNA macroarray技术检测10株肺癌细胞株中1291个药物敏感性相关基因的表达状态,分析二者之间的相关性。结果与GEM药物敏感性呈明显正相关(r≥0.632,P<0.05)的基因有6个;与CDDP药物敏感性关联的基因共有45个;与GEM、CDDP敏感性关联(r≥±0.4)的基因有41个;肺癌细胞系中与GEM和CDDP两类药物敏感性呈明显相关的基因是Metallothinein(信号转导分子)、CathepsinB(组织蛋白酶B)和TIMP1(生长因子);肺癌细胞系中与GEM、CDDP药物敏感性相关联的基因主要分布于Metallothinein、Cathepsin B、生长因子TIMP1等类别。结论SCLC和NSCLC细胞株中GEM、CDDP存在药物敏感性相关基因,其中Metallothinein、Cathepsin B和TIMP1基因与GEM药物敏感性呈正相关,与CDDP药物敏感性呈负相关。

核因子-κB抑制剂联合顺铂对A549细胞株的影响

目的 探讨核因子κB(NF κB)抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)与顺铂(DDP)联合应用治疗肺癌的效应及其机制。方法 培养人肺癌A5 4 9细胞株,分为对照组、PDTC组、DDP组及PDTC +DDP组,观察A5 4 9细胞的生长情况,MTT比色法检测细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Westernblot检测caspase 3表达。结果 DDP及PDTC均可有效抑制A5 4 9细胞的生长、诱导凋亡,二者联用具有协同作用;PDTC +DDP组caspase 3表达显著高于PDTC组和DDP组(P <0 0 1) ,三组均显著高于对照组(P <0 0 1)。结论 PDTC和DDP均可抑制肺癌细胞的生长、诱导凋亡,联合后有协同作用,其机制可能与caspase

扶正消积胶囊对人肺癌细胞株A549增殖抑制及凋亡的影响

目的:研究扶正消积胶囊在体外对人肺癌细胞A549增殖抑制及凋亡的影响。方法:应用MTT法检测扶正消积胶囊对A549细胞增殖的影响,应用流式细胞仪检测扶正消积胶囊对A549细胞凋亡的影响,应用Western bolt检测扶正消积胶囊对A549细胞凋亡相关基因表达的影响。结果:与空白组比较,扶正消积胶囊作用A549细胞24h后,能显著抑制A549细胞的增殖,且这种抑制成浓度依赖关系。Annexin-V/PI双染法结果显示扶正消积胶囊能诱导A549细胞的凋亡,且呈现浓度依赖关系。Western bolt结果显示,扶正消积胶囊能上调Bax表达,下调Bcl-2表达,激活caspase-3、caspase-9、PARP的活性。结论 :扶正消积胶囊能有效抑制人胃癌细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制可能是通过激活caspase家族蛋白酶活性以及上调Bax、下调Bcl-2表达而实现的。

人肺腺癌耐顺铂细胞A549/CDDP获得侵袭转移能力的分子机制

目的:研究人肺腺癌耐顺铂细胞A549/CDDP获得侵袭转移能力的分子机制。方法:细胞划痕实验和Transwell侵袭实验比较A549和A549/CDDP的转移侵袭能力的差别,以及LY294002对A549/CDDP侵袭转移能力的影响。蛋白质免疫印迹技术检测AKT,NF-κB,STAT3信号通路的激活情况,MTT法检测A549和A549/CDDP对顺铂的敏感性,以及PI3K/AKT通路抑制剂LY294002对A549/CDDP细胞对顺铂的敏感性的影响。结果:A549/CDDP对顺铂的耐药性以及侵袭转移能力相对于A549有明显增强。Western blot结果表明:A549/CDDP细胞AKT通路被激活,NF-κB,STAT3通路没有明显变化。LY294002能够明显抑制A549/CDDP的侵袭转移能力并且能够提高A549/CDDP对于顺铂的敏感性。结论:A549/CDDP细胞相对于A549细胞的侵袭转移能力明显增强,其机制与PI3K/AKT信号通路的激活有关。

奥曲肽对人肺癌细胞株A549的增殖抑制作用

目的:探讨奥曲肽对于人肺癌细胞株A549生长的抑制作用。方法:以体外培养的人肺癌细胞株A549为靶细胞,运用四氮唑盐法(MTT法)观察奥曲肽作用48h后对于人肺癌细胞株生长的影响。以流式细胞仪分析其对细胞周期的影响。结果:MTT法结果显示奥曲肽作用48h可抑制A549的生长,并呈剂量依赖性,IC50=1.62mg/L。流式细胞仪测定结果显示:G0/G1期细胞比例增加,G2/M期细胞比例减少,且奥曲肽质量浓度增高到1.60mg/L以上时,G2/M期比例均降为0,细胞周期直接阻滞在G0/G1期,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:奥曲肽可抑制体外培养的人肺癌细胞株A549增殖,机制可能是将肺癌细胞阻滞于G0/G1期。