PTEN及mTOR在人肺腺癌培美曲塞耐药株A549/PEM中的表达

目的:应用高浓度反复间歇法建立人肺腺癌A549培美曲塞耐药细胞株A549/PEM,探讨PTEN、m TOR在人肺腺癌亲本株A549及培美曲塞诱导人肺腺癌耐药株A549/PEM中的表达变化。方法:采用终浓度为500ng/ml的培美曲塞反复间歇冲击建立人肺腺癌A549培美曲塞耐药细胞株A549/PEM,MTT法检测细胞耐药性。RT-PCR、Western blot分别检测PTEN、m TOR在A549及A549/PEM细胞的mRNA及蛋白表达变化。结果:A549/PEM耐药指数为26.87±1.81,较亲本株A549升高约27倍。RT-PCR检测mRNA表达示A549/PEM的PTEN及m TOR基因表达与A549相比均表达上调(P=0.023;P<0.01);Western blot检测蛋白表达示A549/PEM的PTEN及m TOR蛋白表达与A549相比均表达上调(P<0.01;P=0.04)。结论:高浓度反复间歇法可成功建立人肺腺癌A549培美曲塞耐药细胞株模型;PTEN、m TOR表达变化可能与培美曲塞获得性耐药相关。

AICARFT 及 mTOR 在人肺腺癌亲本株 A549及培美曲塞耐药株 A549／PEM 的表达及意义

目的：探讨AICARFT、mTOR在人肺腺癌亲本株A549及培美曲塞诱导人肺腺癌耐药株A549／PEM中表达变化及意义。方法流式细胞术检测A549及A549／PEM细胞周期分布， RT－PCR、Western blot分别检测AICARFT、mTOR在A549及A549／PEM的mRNA及蛋白表达变化。结果流式细胞术检测细胞周期提示处于S期的A549／PEM较A549明显增多，分别为（36．61±1．36）％和（27．16±1．08）％（ P＝0．001）；RT－PCR检测mRNA示A549／PEM的AICARFT及mTOR基因表达与A549相比均表达上调（P＜0．05）；Western blot检测蛋白示A549／PEM的AICARFT及mTOR蛋白表达与A549相比均表达上调（P＜0．05）。结论人肺腺癌培美曲塞获得性耐药细胞株出现细胞周期重分布，培美曲塞获得性耐药可能与AICARFT、mTOR表达上调相关。

人肺腺癌A549细胞系培美曲塞耐药细胞株模型的建立

目的建立人肺腺癌A549细胞培美曲塞耐药细胞株模型。方法以人肺腺癌A549细胞为亲本株,应用高浓度反复间歇法模拟临床给药模式建立人肺腺癌A549细胞培美曲塞耐药细胞株。MTT法绘制生长曲线、计算倍增时间,同时检测耐药株细胞对顺铂、依托泊苷、紫杉醇、长春新碱的药物敏感性。结果亲本株IC_50为(181.75±12.56)ng/ml,耐药株IC_50为(4930.40±129.71)ng/ml,最终获得耐药指数为27.18±1.16的人肺腺癌A549细胞培美曲塞耐药细胞株,命名为A549/PEM。A549和A549/PEM增殖速度接近,倍增时间分别为(62.78±1.06)h和(62.35±0.89)h(P=0.773)。A549/PEM同时对顺铂、依托泊苷耐药,耐药指数分别为(1.93±0.02)、(8.26±1.55);对紫杉醇、长春新碱敏感,耐药指数分别为(0.89±0.10)、(0.95±0.11)。结论本研究成功建立的人肺腺癌A549细胞培美曲塞耐药细胞株模型。