重铬酸钾处理人胚肺细胞A549的Hormesis效应及对某些修复基因表达的影响

目的研究重铬酸钾（K2Cr2O7）对A549细胞的低剂量兴奋效应和修复基因的表达变化。方法 K2Cr2O7作用浓度为0.156、0.312、0.625、1.250、2.500和5.000μmol/L;对照纽K2Cr2O7浓度为0μmol/L;作用时间均为24 h。K2Cr2O7作用浓度为0.312μmol/L时,作用时间分别为12、24、36和48 h;对照组K2Cr2O7作用浓度为0μmol/L,作用时间为0 h。MTT法测人胚肺A549细胞的增殖活性,半定量RT-PCR检测修复基因转录水平。结果 K2Cr2O7浓度在0-0.312μmol/L之间可促进细胞增殖,K2Cr2O7浓度在0.625~5.000μmol/L之间对细胞的增殖抑制率有增大的趋势,各组与对照组和0.312μmol/L组比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）。K2Cr2O7浓度在0-0.312μmol/L之间可促进修复基因hOGG1与hMTH1 mRNA的表达,Cr（Ⅵ）浓度在0.625-5.000μmol/L之间可抑制hOGGl及hMTHlmRNA的表达。K2Cr2O7作用浓度为0.312μmol/L时,随着时间的延长,最终将抑制细胞的增殖和修复基因的转录。结论低剂量K2Cr2O7作用于A549细胞可引起低剂量兴奋作用（Hormesis）效应,并导致hOGGl及hMTHl基因的表达变化。

香烟烟雾对2种肺细胞的DNA损伤与修复

目的探讨经香烟烟雾溶液染毒的人正常肺间质细胞和人肺腺癌细胞的DNA损伤及其修复效应。方法体外培养人胚肺成纤维细胞(HLF)和人肺腺癌A549细胞,以二甲基亚砜(DMSO)和磷酸缓冲液(PBS)作为吸收液,采集香烟主流烟雾。用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定香烟烟雾-DMSO吸收液和香烟烟雾-PBS吸收液(分别简称DMSO烟液和PBS烟液)的1/2、1/4、1/8和1/16倍稀释液和原液对HLF细胞和A549细胞的毒性(分别以DMSO和PBS为阴性对照),以无明显细胞毒性的浓度进行彗星实验(分别以DMSO和PBS为阴性对照,以重铬酸钾为阳性对照),测定细胞的DNA损伤及修复情况。结果DMSO烟液原液及其1/2稀释液染毒的细胞存活率低于80%,而PBS烟液染毒的细胞存活率均高于80%。DMSO烟液的1/4、1/8、1/16倍稀释液以及PBS烟液的1/2、1/4、1/8和1/16倍稀释液和原液对HLF细胞和A549细胞的DNA损伤与阴性对照组相比,差异均具有统计学意义(P<0.01),且存在明显的剂量-效应关系。DNA损伤在两种细胞间差异无统计学意义(P>0.05),但DMSO烟液所致的DNA损伤高于PBS烟液(P<0.01)。细胞在去除受试物后培养30min时开始修复,随着修复时间的延长,拖尾细胞数减少,DNA迁移长度缩短(P<0.05),且A549细胞修复得更快(P<0.05)。结论DMSO烟液的细胞毒性和遗传毒性均高于PBS烟液。香烟烟雾对HLF细胞和A549细胞的DNA损伤差异不明显,A549细胞的DNA损伤修复能力较HLF细胞强。

5，4’-二-正辛烷氧基-7-二氟亚甲基异黄酮对人肺腺癌细胞及其裸鼠异种移植瘤生长的影响

摘要目的研究金雀异黄素(genistein)衍生物5，4'-二-正辛烷氧基-7-二氟亚甲基异黄酮(5，4’-Di-n-octoxyl-7-gem-difluoromethylenegenistein，DOdFMG)对人肺癌细胞系(A549)细胞生长的影响及其作用机制。方法MTT比色法测定5，4'-二-正辛烷氧基-7-二氟亚甲基异黄酮对A549和人胚肺二倍体成纤维细胞(KMB—17)增殖的影响；细胞记数法观察DOdFMG对A549细胞生长曲线的抑制作用；P1染色流式细胞术(FCM)分析DOdFMG对A549细胞凋亡和细胞周期的影响；人肺腺癌(A549)细胞裸鼠异种移植瘤模型治疗实验检测DOdFMG体内抗肺癌作用。结果MTT比色法测定结果显示，DOdFMG对A549细胞增殖有显著抑制作用，呈浓度依赖关系，半数抑制浓度(IC50值)是10．26μmol／L，对KMB-17细胞增殖抑制作用弱，IC50值为163．2μml/L，其对人肺腺癌细胞毒选择指数为15．91。细胞记数法测定结果表明，5，4'-二-正辛烷氧基-7-二氟亚甲基异黄酮对A549细胞生长具有抑制作用，在10．0／μmol/L浓度下，A549细胞群体倍增时间延长到52．7h(溶媒对照组倍增时间为31、4h)。PI染色FCM分析发现，5，4'-二-正辛烷氧基-7-二氟亚甲基异黄酮明显使A549细胞周期停滞于G1期(G1期细胞百分数由52．5％上升到74．7％，P<0．05)。裸鼠异种移植瘤治疗实验结果显示，5，4'-二-正辛烷氧基-7-二氟亚甲基异黄酮对人肺癌异种移植瘤生长具有显著抑制作用，其作用效价强度弱于羟基喜树碱(HCPT)，强于其母体化合物金雀异黄素。结论5，4'-二-正辛烷氧基-7-二氟亚甲基异黄酮具有体内外抗肺腺癌作用，其机制可能与细胞周期G1期阻滞有关。