β-榄香烯对人肺腺癌A549细胞株裸鼠移植瘤放疗增敏作用的研究

目的建立人肺腺癌A549细胞株裸鼠移植瘤模型,用增敏剂量的β-榄香烯联合放疗对移植瘤进行干预,探讨放疗增敏机制是否与抑制葡萄糖转运蛋白1(GLUT-1)表达有关。方法采用细胞悬液接种法建立裸鼠移植瘤模型,将肿瘤体积达到75 mm^(3)左右的20只裸鼠随机分为空白对照组(NS组)、β-榄香烯单药组(ELE组)、β榄香烯联合放疗组(ELE+RAD组)和单纯放疗组(RAD组)。监测干预后各组裸鼠肿瘤体积的变化,获得各组裸鼠的肿瘤生长曲线。通过计算增敏系数,检测45 mg·kg^(-1)β-榄香烯是否发挥增敏作用,采用Real-Time PCR、Western blotting及免疫组化染色检测各组移植瘤中GLUT-1的表达水平。结果成功建立A549细胞株裸鼠移植瘤模型,依据各组移植瘤体积变化绘制生长曲线。测得增敏系数(EF)为2.44,提示β-榄香烯的剂量已达到增敏效果。与NS组相比,实验组移植瘤GLUT-1 mRNA及蛋白表达水平均显著降低(P<0.01);ELE组与RAD组GLUT1 mRNA及蛋白表达水平无显著差异(P>0.05);与ELE组、RAD组相比,ELE+RAD组GLUT-1 mRNA及蛋白表达水平均显著降低(P<0.01)。免疫组化结果显示,与NS组比较,实验组GLUT-1的表达均被显著抑制(P<0.05);其中ELE组和RAD组GLUT-1的表达抑制作用相对较弱,RAD组的抑制作用略强于ELE组,但两组差异无统计学意义(P>0.05);而ELE+RAD组GLUT-1的表达抑制作用较强(P<0.05)。结论增敏剂量的β-榄香烯与放疗联合应用可显著抑制裸鼠移植瘤中GLUT-1 mRNA及蛋白表达,明显增强放疗对肺癌裸鼠移植瘤的生长抑制效果,提示β-榄香烯可能通过抑制GLUT-1表达发挥放疗增敏作用。

虎杖提取物对人肺癌A549细胞株抑制增殖和诱导凋亡作用的研究

目的:研究虎杖提取物对人肺癌A549细胞株的抑制增殖及诱导凋亡作用,并探讨其作用机制,为新药开发提供实验和理论依据。方法:应用末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的脱氧核苷酸缺口末端标记(TdT-mediated dUTP nick endlabeling,TUNEL)法检测虎杖提取物对细胞诱导凋亡的情况;采用流式细胞仪检测A549细胞株的细胞周期分布相和细胞凋亡率;通过免疫细胞化学S-P法测定凋亡关键酶Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9与凋亡相关基因产物bcl-2,以及与细胞周期有关的p21ras、Ki-67蛋白的表达情况,深入探讨虎杖提取物对人肺癌细胞株诱导凋亡的机制。结果:(1)TUNEL法检测结果:虎杖提取物40μg/mL作用细胞后凋亡细胞数目随时间延长而增多;加药组凋亡率与对照组相比有显著差异,同时凋亡指数呈时间依赖性和剂量依赖性;(2)流式细胞仪检测结果显示:虎杖提取物可以诱导A549细胞凋亡,加药组出现G0/G1期和G2/M期细胞比例显著增加(P<0.01),而S期细胞比例则明显下降,将细胞阻滞在G0/G1期;(3)免疫细胞化学结果表明:虎杖提取物作用后加药组Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9表达增强,Ki-67、p21ras蛋白随提取物浓度表达均降低,与对照组相比较均有显著性差异(P<0.01)。结论:1.虎杖提取物在体外对人肺癌A549细胞株有显著的抑制增殖和诱导凋亡作用。2.虎杖提取物抑制增殖作用机制可能与下调Ki-67、p21ras蛋白表达,细胞周期发生G0/G1期阻滞有关。3.虎杖提取物诱导凋亡作用机制可能与下调bcl-2蛋白表达,上调Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9蛋白表达,经由细胞凋亡的死亡受体和线粒体通路完成凋亡的启动和执行。

人参皂苷CK对人肺腺癌A549细胞株的增殖抑制作用及其机制

目的:探讨人参皂苷CK对人肺腺癌A549细胞增殖的影响及其作用机制。方法:不同浓度的人参皂苷CK作用于人肺腺癌A549细胞株,MTT比色法测定细胞增殖抑制率;倒置显微镜观察细胞形态学变化;流式细胞术分析细胞周期及细胞凋亡;ELISA法检测细胞内源性VEGF含量的变化。结果:人参皂苷CK对A549细胞增殖有抑制作用,其抑制作用呈浓度和时间依赖关系;倒置显微镜下可观察到细胞明显的形态学改变;流式细胞仪可检测到实验组细胞出现明显的凋亡峰,且细胞周期被阻滞在G0/G1期;实验组细胞培养液中的VEGF低于对照组(P<0.05),且随着人参皂苷CK浓度增加和作用时间的延长,VEGF的含量降低(P<0.05)。结论:人参皂苷CK可抑制人肺腺癌A549细胞的增殖并诱导其凋亡,并能抑制其内源性分泌VEGF。

虎杖粗提物对人肺癌A549细胞株诱导凋亡作用的形态学观察

应用MTT法检测虎杖提取物对体外培养的人肺癌A549细胞株的抑制增殖作用的影响,通过倒置显微镜、HE染色、AO/EB荧光显微镜的方法观察肿瘤细胞的形态改变。结果显示,虎杖提取物在体外对A549人肺癌细胞株有明显的抑制增殖作用,而且这种抑制作用呈现浓度和时间的依赖性。细胞的形态学观察发现,虎杖提取物作用后出现凋亡细胞。认为虎杖提取物在体外对人肺癌A549细胞株有显著的抑制增殖和诱导凋亡作用。

核因子-κB抑制剂联合顺铂对A549细胞株的影响

目的 探讨核因子κB(NF κB)抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)与顺铂(DDP)联合应用治疗肺癌的效应及其机制。方法 培养人肺癌A5 4 9细胞株,分为对照组、PDTC组、DDP组及PDTC +DDP组,观察A5 4 9细胞的生长情况,MTT比色法检测细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Westernblot检测caspase 3表达。结果 DDP及PDTC均可有效抑制A5 4 9细胞的生长、诱导凋亡,二者联用具有协同作用;PDTC +DDP组caspase 3表达显著高于PDTC组和DDP组(P <0 0 1) ,三组均显著高于对照组(P <0 0 1)。结论 PDTC和DDP均可抑制肺癌细胞的生长、诱导凋亡,联合后有协同作用,其机制可能与caspase

榄香烯乳对人肺腺癌A549细胞株凋亡蛋白表达的影响

目的:探讨榄香烯乳对人肺腺癌A549细胞株凋亡蛋白表达的影响。方法:体外培养人肺腺癌A549细胞株,四甲基偶氮唑蓝比色试验法(MTT法)测定不同浓度榄香烯乳在不同作用时间下对A549细胞株的生长抑制作用。IC软件计算10%的细胞抑制浓度(IC10)。免疫细胞化学染色观察榄香烯乳作用24h后A549细胞的Bcl-2、Bax、Survivin及VEGF蛋白的表达变化。结果:榄香烯乳对人肺腺癌A549细胞株增殖具有明显抑制作用,呈时间和剂量依赖性。榄香烯乳作用24h后IC10为43.49μg/ml,Bax蛋白表达增加,细胞质着色增强;Bcl-2蛋白表达下降,细胞质着色减弱;增殖蛋白Survivin和VEGF的表达下降,且具有药物浓度相关性。结论:榄香烯乳对人肺腺癌A549细胞株有明显的抑制作用,榄香烯乳可上调凋亡相关蛋白表达、诱导凋亡。

稳定表达外源性p16基因肺癌A549细胞株的建立及鉴定

为构建稳定表达外源性抑癌基因 p16的肺癌 A5 49细胞株 ,用脂质体介导的基因转染方法 ,借助真核质粒表达载体 (pc DNA 3) ,将抑癌基因 p16转移入此基因缺失的人肺癌细胞株 A5 49细胞中 ,经 G418筛选 ,获得稳定表达的细胞克隆 ,用逆转录聚合酶链反应 (RT- PCR)及免疫组织化学鉴定 p16基因的表达 ,同时对克隆细胞分泌蛋白进行活性检测。结果显示转染 p16基因的 A5 49细胞中可以检测到 p16 m RNA及蛋白的表达 ,说明建立的 p16真核表达载体能在肺肿瘤细胞中分泌表达蛋白 ,表达 P16抑癌蛋白的 A5 49细胞株的建立有助于研究抑癌基因

榄香烯乳对人肺腺癌A549细胞株细胞周期及凋亡的影响

目的:探讨榄香烯乳对人肺腺癌A549细胞株细胞周期及凋亡的作用。方法:体外培养人肺腺癌A549细胞株,四甲基偶氮唑蓝比色法测定不同浓度榄香烯乳在不同作用时间下对A549细胞株的生长抑制作用。用流式细胞术检测榄香烯乳作用24h后A549细胞株的周期及凋亡变化。结果:榄香烯乳作用后人肺腺癌A549细胞株增殖明显受抑制,呈时间和剂量依赖性。作用24h后G2/M期比例明显升高,S期细胞比例显著下降,凋亡率增加。结论:榄香烯乳对人肺腺癌A549细胞株有明显的增殖抑制作用,可引起A549细胞G2/M期阻滞及诱导其凋亡。

构建siRNA慢病毒载体抑制A549细胞株VEGF受体KDR基因的表达

目的构建针对血管内皮生长因子(VEGF)受体KDR基因的siRNA慢病毒载体,鉴定其对肺癌细胞株A549基因干扰效果。方法设计合成针对KDR编码区的三条siRNA序列及阴性对照序列,克隆到PGCL-GFP载体,构建重组质粒,行PCR鉴定、DNA测序分析;转染人肺癌细胞株A549,Real-Time PCR及Western blot分别检测KDR mRNA、蛋白水平变化;细胞计数法绘制细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞周期。结果成功构建pGCL/KDR-siRNA重组质粒。A549干扰组KDR mRNA表达率下降,KDR蛋白表达量明显减少,细胞周期改变。结论构建的pGCL/KDR-siRNA表达载体可在mRNA和蛋白水平上有效抑制A549细胞株KDR基因的表达。

细胞膜上稳定表达融合蛋白CRT/vGPCR A549细胞株的建立

目的将人钙网蛋白(calreticulin,CRT)基因与病毒G蛋白偶联受体(virus G-protein couple receptor,vGPCR)基因进行基因重组,用此重组基因建立细胞膜上稳定高表达CRT/vGPCR融合蛋白的人肺癌A549细胞株。方法从pSG5-vGPCR质粒中获得全长vGPCR基因片段并与CRT全长编码序列的3′端连接形成融合基因,然后将融合基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)中。用此质粒转染人A549肺癌细胞,通过G418筛选建立稳定转染的A549细胞株,用RT-PCR检测重组融合基因的表达,用细胞免疫荧光分析鉴定融合蛋白的表达及其在细胞膜上的定位。结果成功获得重组融合质粒pcDNA3.1(+)-CRT/vGPCR,经DNA序列测定证实融合基因两阅读框(ORF)对接无误。将上述质粒转染A549细胞后,建立了稳定转染CRT/vGPCR的A549细胞株,融合基因在A549细胞中表达并定位到细胞膜上。结论通过与CRT基因融合重组,具有膜定位能力的vGPCR能将CRT蛋白高效包被到肿瘤细胞膜上。

浅谈甲基化抑制剂5-Aza-CdR对肺癌A549细胞株DNA甲基转移酶1及c-myc、MKi-67、p53基因表达的影响

目的探究甲基化抑制剂5-氮杂-2'脱氧胞苷(5-Aza-Cd R)对肺癌A549细胞株DNA甲基转移酶1(DNMT1)及c-myc、MKi-67、p53基因表达的影响。方法选取合适的肺癌A549细胞株作为研究对象,随机将这些细胞分为观察组和对照组,采用不同的方法进行处理,其中观察组采用5-Aza-Cd R进行处理,在对照组的细胞株中不加任何的药物处理,经过3d的药物处理之后,主要采用FQ-PCR的检测技术研究5-Aza-Cd R对肺癌A549细胞株DNMT1及c-myc、MKi-67、p53基因表达的影响。结果研究发现观察组的DNMT1及c-myc、MKi-67m RNA与对照组相比,表达量明显的低于对照组,但p53 m RNA的表达量比对照组高,P<0.05有统计学意义。结论采用甲基化抑制剂5-Aza-Cd R明显的降低了肺癌A549细胞中的DNMT1及c-myc、MKi-67、p53基因表达量,使得p53基因表达量升高,主要的原因可能与基因启动子区域的去甲基化相关,为去甲基化的治疗提供了有利的线索及依据。

西妥昔单抗对肺腺癌A549细胞株辐射增敏作用的研究

目的探讨西妥昔单抗（Cetuximab，C225）对人肺腺癌A549细胞株的辐射增敏作用及其机制。方法体外培养人肺腺癌A549细胞株，经不同浓度的C225作用后，使用CCK-8法测定细胞增殖抑制率，计算mC225的半数抑制浓度（Ic50），并将Ic50的1／5作为后续实验的浓度。采用克隆形成方法观察C225对细胞辐射敏感性的影响，按多靶单击模型拟合细胞存活曲线，计算辐射增敏比（SER）。流式细胞仪检测细胞凋亡以及细胞周期情况。结果C225均抑制了细胞的增殖，并呈现明显的量-效关系，其IC50为18．24μg／mL。与单独照射组相比，加药照射组的sF2、D3D4均下降（P〈0．05），SERoo为1．40。C225联合x线照射明显增强了辐射诱导的细胞凋亡（P〈0．05）。C225使细胞阻滞于G0／G1期（P〈0．05），单独照射组G：／M期细胞比例增加（P〈0．05），C225＋照射组同时出现G0／G1、G2／M期细胞阻滞（P〈0．05）；与对照组相比，C225组、单独照射组以及C225＋照射组s期细胞比例均下降（P〈0．05）。结论C225对A549细胞株具有辐射增敏作用，其机制可能与C225抑制细胞的生长增殖和受照射后亚致死性损伤的修复，增加细胞凋亡以及诱导细胞G0／G1期阻滞有关。

C595对人肺癌A549细胞株增殖及凋亡作用

目的探究C595对人肺癌A549细胞株抑制增殖和诱导凋亡作用。方法 MUC1蛋白核心的重复序列IgG3单克隆抗体(C595)经免疫荧光标记及流式细胞术检测,分析C595对人肺癌A549细胞株抑制增殖和诱导凋亡。结果 A549细胞膜表面覆盖97.3%MUC1表达量,阴性对照组覆盖MUC1表达量1.03%;C595浓度增加,A549细胞株增殖抑制效果越强,凋亡率增加,存活率降低。结论单克隆抗体C595在体外抑制人肺癌细胞A549生长,C595浓度增加,A549细胞存活率降低,凋亡率增加。

蝙蝠葛活性成分对人白血病K562及肺癌A549细胞株的抑制增殖作用

[目的]探讨蝙蝠葛活性成分对体外人白血病K562及肺癌A549细胞株的抑制增殖作用.[方法]利用倒置显微镜及HE染色方法观察给予20mg/L蝙蝠葛活性成分处理后的体外人白血病K562细胞株的形态学变化;采用血清药理学实验方法观察含药(20mg/L蝙蝠葛活性成分)血清对体外人肺癌A549细胞株的抗增殖作用.[结果]倒置显微镜观察结果显示,给予20mg/L蝙蝠葛活性成分后早期K562细胞出现凋亡形态学变化,细胞膜鼓泡,凋亡小体形成,晚期K562细胞出现膜破裂坏死.HE染色结果显示,给予20mg/L蝙蝠葛活性成分后,K562细胞出现典型凋亡形态学变化,凋亡小体形成,细胞核浓缩呈蓝黑色,胞浆呈淡红色,核染色质浓缩呈碎块状.血清药理学实验结果显示,终质量分数分别为10%,20%,25%的灭活的含药大鼠血清对人肺癌A549细胞株的增殖抑制率分别为29.03%,30.55%,41.67%,与空白对照组比较明显增高(P<0.05).[结论]蝙蝠葛活性成分对人白血病K562细胞株具有抑制增殖和诱导凋亡的作用;含蝙蝠葛活性成分血清对体外人肺癌A549细胞株具有抑制增殖作用.

甲基化抑制剂5-Aza-CdR对肺癌A549细胞株DNMT1及c-myc、MKi-67、p53基因表达的影响

目的探讨甲基化抑制剂5-氮杂-2'脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对肺癌A549细胞株中DNA甲基转移酶1(DNMT1)、c-myc、MKi-67和p53基因表达的影响。方法将肺癌A549细胞株分为两组,实验组采用5-Aza-CdR处理,对照组不加药处理;药物处理72 h后,采用FQ-PCR技术检测A549细胞株DNMT1及cmyc、MKi-67、p53基因mRNA的表达,Western blot检测DNMT1及c-myc、MKi-67、p53蛋白的表达。结果实验组DNMT1、c-myc和MKi-67mRNA的表达量明显低于对照组,而p53 mRNA的表达量明显高于对照组,两组比较差异均有统计学意义(P<0.01);实验组DNMT1、c-myc和MKi-67蛋白的表达量明显低于对照组,而p53蛋白的表达量明显高于对照组,两组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。结论甲基化抑制剂5-Aza-CdR可使肺癌A549细胞中DNMT1、c-myc、MKi-67基因表达降低,p53基因表达升高,这可能与基因启动子区域出现的去甲基化有关,可为去甲基化药物临床治疗肺癌提供理论依据。

香附水提液抑制百草枯致A549细胞株中毒反应的实验研究

探讨百草枯(PQ)对肺上皮细胞株A549的毒性作用及香附水提液对该毒性的抑制作用。方法:不同浓度的PQ和香附提取液作用于A549细胞,应用CCK-8方法检测A549细胞增殖;用蛋白质免疫印迹试验(western-blot)法检测A549转录因子NF-κB-P65的表达;ELISA法检测细胞培养上清中TNF-α、TGF-β、FN的表达。结果:自PQ浓度为0.2mM时,PQ开始A549细胞有毒性作用,细胞出现明显死亡现象。不同浓度的香附水提液(1~8mg香附生药/mL)对A549细胞的增殖无明显影响,但对PQ中毒所致A549细胞死亡现象有一定的抑制作用。PQ作用于A549细胞后NF-кB-P65表达在不同时间段变化不明显,香附水提液对PQ中毒A549作用后变化也不明显。香附能促进PQ(浓度0.3mM)中毒A549细胞的TNF-α表达,而TGF-β检测阴性。结论:PQ可直接造成肺上皮细胞株A549的损伤,香附具有缓解PQ的毒性作用,但其机制还需要进行深入研究。

沉默OGFR基因对非小细胞肺癌A549细胞株增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的探讨沉默OGFR基因对非小细胞肺癌A549细胞株增殖、迁移和侵袭的影响。方法取A549细胞株,分为对照组、实验组,分别转染si-NC阴性对照、OGFR特异性的小干扰RNA。采用RT-qPCR和Westernblotting法分别检测细胞中的OGFRmRNA和蛋白,采用CCK-8实验检测细胞增殖能力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力,平板克隆形成实验检测细胞集落形成能力。结果与对照组相比,实验组OGFRmRNA及蛋白相对表达量低,培养24、48、72 h细胞增殖OD值均低,穿膜细胞数少,细胞迁移率低,克隆形成细胞集落数少(P均<0.05)。结论沉默OGFR基因可降低A549细胞株OGFR基因mRNA和蛋白质的表达,在体外减弱了其增殖、迁移和侵袭能力。

维库溴铵对人非小细胞肺癌A549细胞株增殖和转移能力影响分析

目的探讨维库溴铵对非小细胞肺癌A549细胞株增殖能力和转移能力的影响作用。方法2017年1月—2019年2月,将该院44例非小细胞肺癌患者随机等分为两组,每组各22例,分离获取全部入选患者的非小细胞肺癌A549细胞株样本,在体外环境中实施细胞培养处理,为参照组样本运用标准化杜氏高糖培养基实施培养,为研究组运用标准化杜氏高糖培养基联合20.00μg/mL维库溴铵溶液实施培养,对比两组的PI3K/AKT通路相关蛋白表达量指标测算值、A549细胞增殖倍数指标测算值,以及A549细胞凋亡率指标测算值。结果研究组的PI3K表达量指标测算值(0.77±0.04)μg/mL低于参照组(0.90±0.05)μg/mL,差异有统计学意义(t=9.523,P<0.05)。研究组的p-AKT/AKT表达量指标测算值(0.72±0.10)μg/mL低于参照组(0.86±0.08)μg/mL,差异有统计学意义(t=5.128,P<0.05)。研究组的p-mTOR/mTOR表达量指标测算值(0.74±0.09)μg/mL低于参照组(0.80±0.12)μg/mL,差异有统计学意义(t=1.876,P<0.05)。研究组的HIF-1α表达量指标测算值(0.73±0.05)μg/mL低于参照组(0.84±0.08)μg/mL,差异有统计学意义(t=5.469,P<0.05)。研究组的A549细胞增殖倍数指标测算值(3.31±0.37)倍低于参照组(5.50±0.41)倍,差异有统计学意义(t=18.600,P<0.05)。研究组的A549细胞凋亡率指标测算值(19.5±2.2)%高于参照组(4.8±1.0)%,差异有统计学意义(t=28.531,P<0.05)。结论维库溴铵对非小细胞肺癌A549细胞株的增殖能力与转移能力有影响。

miRNA-210对肺癌细胞株A549增殖及凋亡的作用

目的探讨miRNA-210是否通过调控STAT3表达来影响肺癌细胞株A549增殖及凋亡。方法选用肺癌细胞株A549,通过干扰慢病毒敲低miRNA-210表达水平,RT-PCR检测miRNA-210、STAT3基因表达水平,Western blot检测STAT3蛋白水平,CCK-8检测A549细胞增殖水平。结果肺癌A549细胞中miRNA-210、STAT3表达上调(P<0.01);敲低miRNA-210后,STAT3表达水平明显降低(P<0.01),Bax与Bcl-2比值明显升高(P<0.01),而A549细胞增殖被显著抑制(P<0.01)。结论 miRNA-210可能通过调控STAT3表达从而影响肺癌细胞A549增殖和凋亡。

补中益气汤干预肺腺癌A549细胞移植瘤Wnt/β-catenin信号通路对顺铂敏感性的影响

目的 探讨补中益气汤干预肺腺癌A549细胞移植瘤Wnt/β-catenin信号通路对顺铂敏感性的影响。方法 体外培养A549细胞,接种于BALB/cnu裸鼠腋窝皮下,8 d成瘤,隔天开始分别给予低剂量(1.46 g/kg)、中剂量(2.91 g/kg)、高剂量(5.82 g/kg)补中益气汤治疗25 d。30只裸鼠随机分为5组:对照组、顺铂组、顺铂+低剂量补中益气汤组、顺铂+中剂量补中益气汤组、顺铂+高剂量补中益气汤组。测量移植瘤质量并计算药物抑瘤率;Western印迹检测细胞质中p-糖原合成激酶(GSK)-3βser9、p-GSK-3βtyr216、GSK-3β蛋白的表达;实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和蛋白质印迹法检测移植瘤组织β-catenin、Survivin蛋白的表达。结果 给药25 d后,顺铂联合不同剂量补中益气汤使移植瘤质量均显著缩小(P<0.05),抑瘤率均显著增加(P<0.05),且呈剂量依赖性。与对照组相比,顺铂联合不同剂量补中益气汤组可显著下调移植瘤细胞质p-GSK-3βser9蛋白的表达(P<0.05),并显著下调β-catenin、Survivin mRNA和蛋白表达(P<0.05),尤以顺铂联合高剂量补中益气汤组效果最明显。结论 补中益气汤可通过抑制Wnt/β-catenin信号通路增强顺铂对肺腺癌的敏感性。