流感病毒NS1蛋白稳定表达的A549细胞系建立

A型流感病毒的NS1(Nonstructurol 1 protein,NS1)蛋白是病毒复制、毒力等的重要调节蛋白.运用RT-PCR方法扩增A/Beijing/501/2009(H1N1)流感病毒NS1基因,克隆至真核表达载体pCMV-HA,用Lipofectamine2000将线性化pCMV-HA-NS1与neo基因共同转染A549细胞,通过G418筛选获得阳性重组细胞,并采用PCR、RT-PCR、Western blot技术检测重组细胞中NS1蛋白的表达,通过免疫荧光技术观察NS1蛋白在细胞中的定位.PCR、RT-PCR检测显示NS1基因成功整合进入细胞基因组,并转录为mRNA;Western blot检测显示重组细胞系稳定表达NS1蛋白,免疫荧光显示NS1蛋白定位于细胞核内.表明通过G418筛选,成功构建稳定表达NS1蛋白的重组A549-HA-NS1细胞系,且NS1蛋白定位于细胞核内,为进一步研究NS1蛋白的生物学功能奠定基础.

RBM5基因表达载体构建、稳定转染A549细胞系的建立及功能的初步研究

目的:通过构建表达载体、建立稳定转染RNA结合基序5(RNA binding motif 5,RBM5)的A549细胞系,初步研究RBM5基因过表达对A549细胞增殖以及天冬-谷-丙-组氨酸盒多肽15[DEAH box polypeptide 15,DHX15]表达的影响。方法:应用分段克隆法构建pc DNA3.1(+)/RBM5真核表达载体;将测序验证后的重组质粒pc DNA3.1(+)/RBM5转染肺腺癌A549细胞并以G418进行筛选,采用Western印迹鉴定RBM5基因过表达阳性细胞,流式细胞仪分别检测经pc DNA3.1(+)/RBM5稳定转染的A549细胞[pc DNA3.1(+)/RBM5-A549]及pc DNA3.1(+)空白质粒转染的A549细胞[pc DNA3.1(+)-A549]的周期分布;运用RT-PCR技术分别检测pc DNA3.1(+)/RBM5-A549和pc DNA3.1(+)-A549细胞中剪接相关因子DHX15的表达情况。结果:成功构建出pc DNA3.1(+)/RBM5真核表达载体,筛选出RBM5基因稳定转染过表达阳性细胞株;pc DNA3.1(+)/RBM5-A549较pc DNA3.1(+)-A549细胞处于G1期细胞比例增大、S期细胞比例减小(均P<0.01);c DNA3.1(+)/RBM5-A549较pc DNA3.1(+)-A549细胞的DHX15表达上调(P<0.01)。结论:成功构建重组质粒pc DNA3.1(+)/RBM5,并建立了RBM5稳定转染的A549细胞系;初步证实RBM5基因过表达可抑制肺腺癌A549细胞的细胞周期,并使DHX15表达上调。

无线粒体DNA的人肺腺癌A549细胞系的构建

目的:建立无线粒体DNA(mtDNA)的人肺腺癌ρ~0A549细胞系。方法:在含50 ng/mL溴化乙锭(EB)、100μg/mL丙酮酸钠和50μg/mL尿嘧啶核苷的RPMI1640细胞培养基中传代培养A549细胞;用低剂量EB连续诱导培养35 d后,采用光镜观察、TaqMan探针法实时荧光定量PCR(qPCR)和Western印迹鉴定无mtDNA的ρ~0A549细胞系;采用MTT法测定ρ~0A549细胞增殖曲线。结果:倒置显微镜下野生型ρ^+A549细胞为多角形,ρ~0A549细胞形态呈拉长枝状;qPCR结果显示,低剂量EB诱导35 d的ρ~0A549细胞中无mtDNA的存在。Western印迹结果显示,ρ^+A549细胞中能表达核基因编码的线粒体蛋白SDHA和ATP5A,也能表达线粒体基因组编码的蛋白MT-COXI和MT-ATP6;ρ~0A549细胞中无MT-COXI和MT-ATP6蛋白表达,但核基因编码的SDHA和ATP5A蛋白能够正常表达。MTT结果显示,与ρ^+A549细胞相比,ρ~0A549细胞生长速度明显减慢,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:构建和鉴定了无mtDNA的人肺腺癌ρ~0A549细胞系,为后续探讨mtDNA缺失或突变与人肺腺癌发生之间的关系奠定了实验基础。

TTF-1基因过表达慢病毒重组载体的构建及TTF-1过表达A549细胞系的建立

目的构建甲状腺转录因子-1(TTF-1)基因过表达慢病毒重组载体并感染人肺腺癌A549细胞株,建立TTF-1基因过表达的A549细胞系,为进一步研究TTF-1在肺腺癌中的作用机制奠定基础。方法采用PCR拼接TTF-1的cDNA寡核苷酸序列,连入pCDH-CMV-MCS-EF1-CopGFP-T2A-puro,转化至感受态细胞DH-5α,测序鉴定;将携带TTF-1基因的慢病毒过表达载体转染至293T细胞,经包装产生慢病毒,测定病毒滴度,并感染A549细胞,构建稳定表达TTF-1基因的肺腺癌A549细胞系。结果测序结果显示,TTF-1基因过表达慢病毒载体pCDH-CMV-TTF1-EF1-CopGFP-T2A-puro构建成功,测序结果正确;经包装所得病毒上清液滴度为6×107TU/m L,稳定转染的细胞系在荧光显微镜下可见GFP表达; PCR结果显示,A549细胞转染组中TTF-1基因表达量比未转染组提高了381倍。结论成功克隆、扩增TTF-1基因,并建立其慢病毒表达系统,构建了稳定过表达TTF-1基因的人肺腺癌A549细胞系。

miR-1827抑制肺腺癌A549细胞系迁移并调控c-Myc表达的研究

目的探讨miR-1827对肺腺癌A549细胞细胞系迁移功能的影响以及对原癌基因c-Myc是否有调控作用。方法采用生物信息学方法对miR-1827与c-MYC基因mRNA 3'非翻译区(untranslated region,UTR)靶向配对关系进行预测。使用脂质体瞬时转染的方法将miR-1827类似物导入A549肺癌细胞系,使A549过表达miR-1827。Real-Time PCR验证转染后miR-1827以及c-Myc mRNA的表达量。Western blot法检测c-Myc蛋白表达量的变化。细胞划痕实验及Transwell细胞迁移实验检验miR-1827对A549迁移功能的影响。以上均以转染miR-NC序列的A549细胞作为对照。使用双萤光素酶报告基因实验对miR-1827与c-Myc是否存在直接调控关系及具体结合部位进行鉴定。使用GEO数据库的公开芯片数据对miR-1827与肺癌患者的预后之间的关系进行探索。结果在线生物信息学网站Targetscan以及DIANA-LAB显示miR-1827种子序列与c-Myc mRNA 3'UTR区存在完全配对序列。与对照组相比,miR-1827转染组miR-1827表达量显著上调,c-Myc基因mRNA以及蛋白水平均明显下降。双萤光素酶报告基因实验提示miR-1827直接通过与c-Myc mRNA 3'UTR配对结合下调c-Myc的表达。miR-1827可以显著抑制A549的迁移功能。芯片GSE63805显示miR-1827高表达组8年总生存率为56.25%,显著优于miR-1827低表达组的12.5%。结论 miR-1827能调控原癌基因c-Myc的表达并抑制A549细胞迁移。

DCLK1激活FAK/PI3K/AKT/mTOR信号通路促进A549细胞的恶性行为

目的探讨双肾上腺素皮质样激酶1(DCLK1)对A549细胞增殖、迁移、侵袭等恶性生物学行为的影响,并探究可能涉及的相关分子机制。方法慢病毒感染法建立稳定表达DCLK1分子的A549细胞系,反转录-聚合酶链技术和蛋白质印记法进行鉴定。CCK-8与平板克隆实验检测过表达DCLK1后细胞增殖能力变化。Transwell实验观察过表达DCLK1对细胞迁移与侵袭能力的影响。癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析DCLK1对肺腺癌细胞的调控富集通路,蛋白质印记法进行验证。结果DCLK1在A549细胞中过表达可增加细胞的增殖、迁移与侵袭等能力,而抑制FAK/PI3K/AKT/mTOR信号通路可削弱DCLK1对A549细胞的恶性调控。结论DCLK1通过激活FAK/PI3K/AKT/mTOR信号通路,促进A549细胞的恶性生物学行为。

斑蝥酸钠维生素B_6注射液对人肺癌细胞系A549增殖抑制及核因子κB和Caspase3/7的影响

目的探讨斑蝥酸钠(SC)维生素B6注射液对人非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡及核因子κB(NF-κB)、凋亡分子Caspase3/7的影响。方法用不同浓度(0、1.0、2.5、5.0 mg/L)的SC维生素B6注射液处理A549细胞,观察光镜及Hoechst33342荧光染色检测细胞凋亡形态;用噻唑蓝(MTT)比色法检测SC维生素B6注射液对细胞增殖的抑制作用;罗丹明123检测线粒体膜电位;Caspase3/7活性检测试剂盒检测Caspase3/7活性;蛋白印迹检测NF-κB P65、I-κB蛋白表达。结果 SC维生素B6注射液对A549细胞的体外增殖有明显抑制作用,细胞形态出现明显凋亡改变,5.0 mg/L组作用A549细胞72 h后,细胞增殖抑制率最大达到67.37%。细胞线粒体膜电位检测结果显示,随着SC维生素B6注射液浓度的增加及时间的延长,线粒体膜电位逐渐减弱,同时Caspase3/7蛋白活性增强;SC维生素B6注射液作用A549细胞后NF-κB P65蛋白表达水平显著降低(P<0.05),而I-κB蛋白表达水平则无显著变化。结论 SC维生素B6注射液可能通过抑制NF-κB P65表达,激活Caspase-3/7活性,从而抑制A549细胞增殖,诱导细胞凋亡。

rsTRAIL诱导人肺癌细胞系A549的细胞凋亡表达谱变化研究

目的研究一定量的重组可溶性TRAIL作用于人肺癌系A549细胞培养物后,细胞凋亡基因表达谱变化。方法用50μg·L^(-1)的rsTRAIL处理人肺癌系A549细胞培养物,以未经药物处理的A549细胞培养物为对照,应用基因表达谱芯片技术进行细胞凋亡相关基因mRNA表达差异分析。结果经TRAIL处理后,所检测的96个细胞凋亡相关基因中,21个基因表达上调,17个基因表达水平下调。结论经TRAIL处理后,通过细胞凋亡相关的功能基因组群基因表达的正负调控,对人肺癌系A549细胞凋亡信号传导途径进行调控。药物处理不影响p53基因的表达变化。

A549/DDP耐药肺癌细胞系的建立及其与SP细胞的关系

目的:建立耐顺铂(DDP)人肺癌耐药细胞系A549/DDP,初步探讨耐药细胞与肿瘤SP(sidepopulationcell)细胞的关系。方法:以DDP为诱导剂,采用高浓度反复间歇诱导法诱导建立人肺癌耐药细胞系A549/DDP,用MTT法测定药物敏感性,最后将耐药细胞和亲本细胞分别行Hoechst33342染色,用流式细胞仪检测SP细胞含量。结果:成功建立DDP耐药细胞系A549/DDP,对DDP的耐药指数为5.957;耐药谱分析表明其是一个多药耐药细胞系;Hoechst33342染色分析显示:A549和A549/DDP中SP细胞含量分别为1.09%和0.31%。结论:建立了稳定的人肺癌多药耐药耐药细胞系A549/DDP,耐药细胞中SP细胞含量无明显变化。

5⁃杂氮-2’-脱氧胞苷对肺癌A549细胞系中SFRP2基因表达以及细胞迁移侵袭的影响

目的研究肺癌A549细胞系中5-杂氮-2’-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对分泌型卷曲相关蛋白2基因(SFRP2)甲基和基因表达的影响,以及探究5-Aza-CdR对A549细胞迁移和侵袭的影响。方法收集2018年至2019年于南阳市中心医院切除的肺癌样本以及相应的癌旁组织,分为肺癌和癌旁组,通过实时定量PCR(qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测SFRP2基因mRNA和蛋白表达水平。甲基化特异性PCR(MSP)法分别检测60例肺癌组和癌旁组中SFRP2基因甲基化水平;采用对肺癌A549细胞系进行去甲基化处理,得到SFRP2基因去甲基化组。未处理肺癌A549细胞系为对照组。对照组和SFRP2基因去甲基化组通过MSP法检测SFRP2基因基因的甲基化状态;采用划痕实验和侵袭迁移小室法(Transwell小室)分别检测肺癌A549细胞系的迁移和侵袭能力;通过qPCR和Western blot检测SFRP2、GSK3β、p-GSK3β、β-catenin和p-β-catenin的mRNA和蛋白表达水平。结果qPCR和Western blot结果显示,与癌旁组比较,肺癌组中的SFRP2基因的mRNA和蛋白表达量显著降低(P<0.05);MSP结果显示,与癌旁组比较,48例肺癌组的SFRP2基因发生甲基化。MSP结果显示,与对照组比较,SFRP2基因去甲基化组的SFRP2基因甲基化水平显著降低(P<0.05)。划痕实验和Transwell小室结果显示,与对照组比较,SFRP2基因去甲基化组的迁移和侵袭能力显著降低(P<0.05)。qPCR和Western blot结果显示,与对照组比较,SFRP2基因去甲基化组的p-GSK3β、β-catenin的mRNA和蛋白表达显著减少(P<0.05),SFRP2、GSK3β和p-β-catenin的mRNA和蛋白表达显著增多(P<0.05)。结论SFRP2基因基因去甲基化可以恢复SFRP基因转录表达,阻碍Wnt/β-catenin信号通路,从而抑制肺癌A549细胞系迁移和侵袭能力。

雷公藤甲素对非小细胞肺癌细胞系A549增殖的抑制和凋亡的诱导

目的探讨雷公藤甲素(TP)通过调控趋化因子受体4(CXCR4)基因表达对人非小细胞肺癌(A549)细胞增殖和凋亡的影响。方法实验分为4组:对照组、TP组(100 nm/L TP处理细胞)、CXCR4+TP组(转染质粒及TP处理细胞)和NC+TP组(转染空载质粒及TP处理细胞)。RT-qPCR和Western blot检测CXCR4表达以及转染效果;MTT法检测细胞增殖;AnnexinⅤ-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡;Western blot检测增殖及凋亡相关蛋白表达。结果雷公藤甲素能够抑制A549细胞中CXCR4 mRNA和蛋白的表达(P<0. 05)。雷公藤甲素可抑制A549细胞增殖,诱导其凋亡(P<0. 05)。转染pc DNA-CXCR4能够上调CXCR4 mRNA和蛋白的表达(P<0. 05)。上调CXCR4的表达能够部分逆转雷公藤甲素对A549细胞增殖抑制和凋亡诱导的作用(P<0. 05)。结论雷公藤甲素可能通过下调CXCR4的表达抑制A549细胞增殖,诱导细胞凋亡。

LncRNA FEZF1-AS1通过调控EZH2对肺间质细胞增殖、迁移及侵袭的作用

目的研究长链非编码RNA FEZ家族锌指1-反义RNA 1(lncRNA FEZF1-AS1)调控zeste同源物增强子2(EZH2)对肺间质细胞增殖、迁移、侵袭能力及上皮细胞-间质转化(EMT)的影响及其作用机制。方法将人肺腺癌细胞系A549分为对照组(control)和模型组[model,用转化生长因子β1(TGF-β1)20 ng/mL作用48 h,诱导成为肺间质细胞]。用Western blot检测细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)及波形蛋白(vimentin)的蛋白表达。RT-qPCR检测细胞中lncRNA FEZF1-AS1和EZH2基因表达。转染组细胞分为转染si NC组、si lncRNA FEZF1-AS1+OE vector组和si lncRNA FEZF1-AS1+OE EZH2组。CCK-8法检测细胞增殖、细胞划痕检测细胞迁移、Transwell小室法检测细胞侵袭;用Western blot检测细胞中E-cadherin、N-cadherin、vimentin及EZH2的蛋白表达,用RNA免疫沉淀(RIP)测定FEZF1-AS1与EZH2的直接结合作用。结果与对照组比较,模型组E-cadherin的蛋白表达水平减少(P<0.05);N-cadherin及vimentin的蛋白表达水平升高(P<0.05);与对照组比较,模型组lncRNA FEZF1-AS1与EZH2基因的表达水平明显升高(P<0.05);与si NC组相比,si lncRNA FEZF1-AS1+OE vector组细胞增殖、迁移、侵袭能力降低,E-cadherin蛋白表达升高,N-cadherin、vimentin、EZH2蛋白表达降低(P<0.05);与si lncRNA FEZF1-AS1+OE vector组比较,si lncRNA FEZF1-AS1+OE EZHZ组细胞增殖、侵袭、迁移能力升高,E-cadherin蛋白表达降低,N-cadherin、vimentin、EZH2蛋白表达升高(P<0.05);RIP实验进一步证实了lncRNA FEZF1-AS1与EZH2具有结合作用。结论LncRNA FEZF1-AS1通过调控EZH2促进肺间质细胞增殖、侵袭、转移和EMT过程。

人肺腺癌A_(549)多重抗药细胞株生物学特性变化

目的：探讨人肺腺癌Ａ５４９多重抗药细胞株生物学特性变化。方法：采用阿霉素（ＡＤＭ）浓度递增的方法诱导人肺腺癌Ａ５４９细胞系（Ａ５４９／Ｐ），在体外持续培养６个月，获得了具有多重抗药性的Ａ５４９／Ｒ２细胞，该细胞能在０．２μｇ／ｍｌＡＤＭ下持续增殖。通过光镜和电镜观察其增殖及形态结构变化。结果：Ａ５４９／Ｒ２细胞由巨大细胞增殖而来，其微绒毛、线粒体及分泌泡明显增加，有进一步分化趋向。结论：Ａ５４９／Ｒ２细胞的进一步分化特征可能与其抗药性形成有关。

壳寡糖通过降低线粒体膜电位促进A549细胞凋亡

壳寡糖(chitooligosaccharides,COS)分子量小,可溶性好,具有抗肿瘤等多种生物活性。以人肺腺癌A549细胞系为研究对象,探究COS对A549细胞线粒体膜电位、细胞生长与死亡的影响。MTT结果表明COS浓度越高,刺激时间越长,其对A549细胞生长的抑制作用越明显;流式细胞仪检测结果显示,1mg/mL的COS明显地降低了细胞线粒体膜电位水平;活死细胞荧光染色实验表明,COS组死亡细胞比率提高,与对照组相比具有显著性差异。结果提示,COS可能通过降低线粒体的膜电位而促进A549细胞凋亡。

重组TRAIL诱导肺腺癌细胞系细胞凋亡的实验研究

目的研究重组可溶性TRAIL作用于人肺癌系A549细胞培养物后,细胞凋亡的形态变化和凋亡率测定。方法MTT比色法测定重组TRAIL对肺腺癌A549细胞的生长抑制率。TRAIL处理前后细胞核、质的形态学变化。经不同浓度重组TRAIL处理后A549细胞的双色荧光变化。定量重组TRAIL与亚毒性浓度的CDDP联合使用,对肺腺癌A549细胞生长抑制率和凋亡率的影响。结果重组TRAIL对A549细胞生长有明显的抑制作用,TRAIL100μg.L-1作用24h后,抑制率达到41.6%。细胞形态学观察显示,A549肺腺癌细胞经50μg.L-1TRAIL处理24h后,可观察到典型的细胞凋亡特点。3.3mg.L-1的CDDP与50μg.L-1重组TRAIL合用,A549细胞凋亡率高达75.2%。结论重组TRAIL具有明显的诱导多种恶性肿瘤细胞凋亡的作用;化疗药物CDDP能加强重组TRAIL的抗肿瘤活性。

敲减泛素结合酶E2T的表达抑制肺癌细胞A549生长、侵袭和裸鼠成瘤性

目的:探讨敲减泛素结合酶E2T(UBE2T)的表达对肺癌细胞A549生长、侵袭和裸鼠成瘤性的影响,初步阐明其作用机制。方法:靶向UBE2T基因的慢病毒载体(shRNA1、shRNA2、shRNA3)及阴性对照慢病毒载体(shRNA-NC)转染人非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞系,筛选干扰效果较好的shRNA3进行后续实验。CCK-8法、流式细胞术、Transwell小室法检测细胞的增殖、凋亡及侵袭能力,Western blot法检测相关蛋白表达。检测小鼠体内的成瘤质量,免疫组化法检测瘤体组织中Ki67、VEGF蛋白表达情况。结果:与shRNA-NC组相比,UBE2T-shRNA3组各时间点的细胞增殖率、穿膜细胞数及Ki67、VEGF、N-cad蛋白表达明显下降(P<0.05),细胞凋亡率、p21、cleaved cas3/cas3、cleaved cas9/cas9明显上升(P<0.05)。体内实验结果显示,与shRNA-NC组相比,UBE2T-shRNA3组小鼠的瘤体质量及Ki67、VEGF蛋白阳性表达率明显下降(P<0.05)。结论:敲减UBE2T的表达可抑制肺癌细胞A549的增殖、侵袭,促进细胞凋亡,抑制裸鼠成瘤。

RASSF1A基因转染对人肺腺癌细胞株A549增殖的抑制作用

目的:观察外源性RASSF1A基因对人肺腺癌细胞A549增殖及NF κB亚单位P65表达的影响。方法:利用脂质体转染技术将真核表达重组体pcDNA3. 0 RASSF1A质粒和空载体pcDNA3. 0质粒分别导入A549细胞,经G418筛选后获得稳定转染细胞克隆,Westernblotting检测RASSF1A基因表达。采用MTT(四甲基偶氮唑盐)法、流式细胞仪分析转染细胞的生物学行为。RT PCR和Westernblotting检测基因转染对P65表达的影响。结果:经脂质体转染和筛选,建立了稳定表达RASSF1A基因的A549细胞系。与未转染组和转染空白载体组比较,转染RASSF1A基因的细胞生长速度明显减慢(P<0. 05),细胞周期中G1 /G0期比例明显增加(P<0. 05),而S期比例减少;转染组细胞核内P65蛋白表达明显降低(P<0. 05),而全细胞P65蛋白及mRNA表达未见明显变化。结论:RASSF1A基因可能通过抑制P65活性而抑制人肺腺癌细胞A549的生长。

咳尔康颗粒对肺腺癌细胞A549的体外抗肿瘤作用

目的制备咳尔康颗粒并观察其对人肺腺癌细胞A549的体外抗肿瘤作用。方法将处方药材经水提取,减压浓缩,用淀粉和糊精为辅料制备咳尔康颗粒。以黄芩苷为指认成分,采用高效液相色谱(HPLC)法建立咳尔康颗粒质量控制标准。以不同浓度的咳尔康颗粒溶液作用于肿瘤细胞A549,光学显微镜观察细胞形态,4,6-联脒-2-苯基吲哚(DAPI)染色后荧光显微镜观察细胞核固缩的凋亡过程,噻唑蓝(MTT)实验测定细胞增殖,实时定量聚合酶链反应(PCR)测定c-myc、c-fos、bax/bcl-2和caspase-9基因mRNA表达。结果制得咳尔康颗粒并建立HPLC质量控制标准,线性回归系数(r)为0.9929,平均加样回收率为98.03%,RSD为2.571%,指认成分黄芩苷含量为0.3498‰。咳尔康颗粒作用于肿瘤细胞A549后,细胞形态出现体积缩小,与周围的细胞脱离,核质浓缩,核膜破碎,最终形成凋亡小体;细胞增殖受到剂量依赖性抑制,半数抑制浓度(IC50)为74.07 g·L^(-1);原癌基因c-myc和c-fos的mRNA表达量降低,凋亡基因bax/bcl-2和caspase-9的mRNA表达量增加。结论咳尔康颗粒具有体外抗肿瘤作用。

脱氢抗坏血酸在重铬酸钾对A549细胞毒性效应中的作用

铬在自然界中分布广泛,六价铬[Cr（Ⅵ）]已被证实具有致癌性,其所致的肺癌是8种职业性肿瘤之一。有研究[1-3]表明,活体细胞内90%的抗坏血酸（ascorbic acid,Asc）参与Cr（Ⅵ）的还原代谢,且是Cr（Ⅵ）的主要还原剂。机体肺细胞内Asc的平均水平为1.3mmol/L[4],但在体外细胞培养中含量却非常低[5-6],脱氢抗坏血酸（dehydroascorbic acid,DHA）孵育可以使细胞内氧化形成Asc,使其达到或接近机体正常生理浓度[7]。Reynolds等[8]发现DHA孵育H460和IMR90细胞90min后,再用Cr（Ⅵ）染毒细胞,细胞的急性毒性增强。