人A549肺腺癌细胞中甲状旁腺激素相关蛋白的表达及其与性激素状态相关性的研究

目的探讨人A549肺腺癌细胞中甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)的表达,以及性激素对其表达的影响。方法将人A549肺腺癌细胞培养48 h后,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测其雌激素受体(ER)-α、β,雄激素受体(AR),PTHrP mRNA的表达。再分别以不同浓度(0、0.5、1、5、10 nmol/L)的雌二醇和睾酮处理人A549肺腺癌细胞48 h,采用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测其PTHrP mRNA的表达。结果在人A549肺腺癌细胞中有ERβ-、AR及PTHrP mRNA表达,而ER-α不表达。再以不同浓度的17β-雌二醇及睾酮处理人A549肺腺癌细胞48 h,17β-雌二醇处理后未检测到PTHrP mRNA的表达;浓度为0、0.5、1、5、10 nmol/L睾酮处理后PTHrP的表达量分别为100%、90%、75%、60%、25%。结论人A549肺腺癌细胞中有ERβ-、AR及PTHrP mRNA表达,性激素可调节PTHrP mRNA的分泌,其中AR对PTHrP mRNA起负调节作用。

Ku80基因在人A549肺腺癌细胞照射前后表达的对比研究

目的 探讨Ku80基因在人A549肺腺癌细胞中的表达水平.将A549肺腺癌细胞接种裸鼠,以不同强度的射线照射,探求Ku80蛋白和Ku80 mRNA在放射治疗前后水平变化.方法 利用免疫组化、荧光定量PCR方法检测经过不同强度的射线照射前后的A549肺腺癌细胞的Ku80蛋白含量和Ku80 mRNA的表达.结果 接种在裸鼠的A549肺腺癌细胞经过射线照射后同等时间（24、48h）,Ku80蛋白和Ku80 mRNA随着照射强度1、4、8Gy的增强而增加（P＜0.05）;经过4、8Gy射线照射后48h,测得A549肺腺癌细胞中的Ku80蛋白和Ku80 mRNA较同样强度射线照射后24h而增加（P＜0.05）.结论 人A549肺腺癌细胞的Ku80蛋白和Ku80 mRNA在一定的照射强度范围内随着照射强度的增强而增加,并在一定的时间范围内随着照射后时间的延长而表达增多,推测Ku80基因可能与肺腺癌细胞放射损伤修复有密切关系.

黄芩苷对A549肺腺癌细胞增殖的抑制作用及机制

目的探讨黄芩苷对A549肺腺癌细胞株增殖的抑制作用及其相关机制。方法将浓度为0、25、50、100、200、400μmol/L的黄芩苷作用于经体外培养的A549人肺腺癌细胞株24、48、72 h,采用噻唑蓝(MTT)法检测黄芩苷对A549肺腺癌细胞的抑制率;收集30μmol/L黄芩苷孵育24 h后的A549肺腺癌细胞,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定细胞周期蛋白(Cyclin)D1、增殖细胞核抗原(PCNA)及p21 mRNA的表达水平,采用Western印迹法检测Cyclin D1、PCNA及p21蛋白的表达水平。结果不同浓度的黄芩苷对A549肺腺癌细胞的增殖均具有不同程度的抑制作用,并且呈剂量效应、时间效应关系。30μmol/L黄芩苷(实验组)作用于A459肺腺癌细胞24 h后,Cyclin D1、PCNA及其蛋白表达水平低于对照组,p21及其蛋白表达水平高于对照组(P<0.05)。结论通过抑制Cyclin D1、PCNA的表达以及促进p21的表达,黄芩苷抑制A549肺腺癌细胞增殖。

沙利度胺联合顺铂对A549肺腺癌细胞株的体外实验

目的观察沙利度胺与顺铂(DDP)联合应用对A549人肺腺癌细胞凋亡的影响,观察沙利度胺对肺腺癌A549细胞VEGF、BFGF蛋白表达的影响。方法采用PI单染法流式细胞检测细胞凋亡率;采用免疫细胞化学方法检测沙利度胺处理后肺腺癌A549细胞VEGF、BFGF蛋白表达的变化。结果在一定浓度范围内,沙利度胺联合DDP处理组细胞凋亡率明显高于单药组;沙利度胺(7.5mg/L)作用于人肺腺癌A549细胞后,处理组的VEGF、BFGF蛋白表达与未加药组比较差异显著。结论沙利度胺DDP联合,可增加A549人肺腺癌细胞的凋亡率;沙利度胺可抑制A549人肺腺癌细胞VEGF、BFGF的蛋白表达。

β3GnT8基因对A549肺腺癌细胞增殖侵袭的影响

目的探讨β1,3-N乙酰氨基葡萄糖基转移酶8(β3GnT8)基因对A549肺腺癌细胞增殖、侵袭的影响。方法将β3GnT8正义真核表达载体(pEGFP-C1-β3GnT8-Sense)和空载体(pEGFP-C1)分别转染A549肺腺癌细胞,分别命名为A549-S组及A549-0组,未转染细胞为A549组。分别采用荧光定量PCR和Western blot检测β3GnT8的mRNA水平表达和蛋白水平的表达;采用MTT法、Transwell侵袭实验分别检测β3GnT8对A549细胞增殖、侵袭能力的影响;Western blot检测浸润转移相关的功能基因基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)在蛋白质水平的表达变化。结果随着β3GnT8表达增高,细胞增殖和侵袭能力均高于A549组,MMP-2、MMP-9在蛋白质水平的表达增高,差异有统计学意义(P<0.05)。A549-0组与A549组差异无统计学意义(P>0.05)。结论β3GnT8高表达可促进A549细胞增殖、侵袭转移。

槐耳清膏对耐顺铂人肺腺癌细胞系A_(549)^(DDP)逆转的实验研究

目的:探讨槐耳清膏对耐顺铂的人肺腺癌细胞A_(549)^(DDP)化疗敏感性的逆转作用及其效能。方法:以体外培养的对耐顺铂的人肺腺癌细胞A_(549)^(DDP)为实验模型,运用MTT法研究经不同浓度的槐耳清膏作用后,该模型所需顺铂IC_(50)的变化,并运用流式细胞仪研究相同作用条件下A_(549)及A_(549)^(DDP)的凋亡发生率。结果:槐耳清膏对A_(549)和A_(549)^(DDP)的细胞毒性作用相似,并可致凋亡,其IC_(50)分别为(1.84±0.52)mg·ml^(-1)和(2.01±0.44)mg·ml^(-1)两者无显著性差异(P>0.05)。经槐耳清膏作用后A_(549)及A_(549)^(DDP)的顺铂IC_(50)均呈下降趋势,并与槐耳清膏有剂量依赖性。给予1mg·ml^(-1)槐耳清膏作用40h后再经相应的顺铂作用的A_(549)及A_(549)^(DDP)细胞凋亡的发生率无显著性差异(P>0.05);但较同剂量的顺铂单独作用于A_(549)及A_(549)^(DDP)凋亡率有极显著差异(P<0.01)。结论:槐耳清膏除自身有凋亡作用外,亦可以逆转人肺腺癌细胞对顺铂的耐药作用,提高顺铂对A_(549)^(DDP)化疗的敏感性。

肉桂酸对A_(549)人肺腺癌细胞增殖和核仁组成区的影响

目的 :探讨低毒性的食品添加剂肉桂酸对A54 9人肺腺癌细胞的抑制作用。方法 :应用 1mmol/L和 3mmol/L的肉桂酸作用于人肺腺癌A54 9细胞 ,观察细胞增殖情况 ,进行核仁形成率的测定。结果 :1mmol/L和 3mmol/L肉桂酸能使A54 9人肺腺癌细胞增殖受到明显抑制 (P <0 0 5 ,P <0 0 1) ,同时细胞的核仁形成率明显下降 ,核仁内核仁组成区嗜银颗粒明显减少 (P <0 0 1,P <0 0 0 1)。结论 :肉桂酸是A54 9人肺腺癌细胞有效的抑制剂 ,在抗癌作用方面具有潜在的应用价值。

黄芪多糖降低A549/DDP肺腺癌细胞顺铂耐药机制研究

目的:研究黄芪多糖对A549/DDP肺腺癌细胞顺铂耐药的影响及可能机制。方法:将A549/DDP顺铂耐药肺腺癌细胞分为CON组(未行黄芪多糖及顺铂处理)、APS组(仅用黄芪多糖处理)、DDP组(仅用顺铂处理)及A+D组(黄芪多糖联合顺铂处理),比较四组细胞增殖、细胞周期及凋亡率和耐药基因表达的差异。结果:A+D组细胞d 1-d 7吸光度、S期、G 2/M期和PI均显著低于CON组、APS组和DDP组细胞(均P<0.05),G 0/G 1期和凋亡率均显著高于CON组、APS组和DDP组细胞(均P<0.05);APS组和A+D组细胞MDR1和MRP基因mRNA表达无明显差异(均P>0.05),且均显著低于CON组和DDP组(均P<0.05)。结论:黄芪多糖可显著改善A549/DDP肺腺癌细胞对顺铂耐药性,可能与黄芪多糖显著降低MDR1和MRP有关。

胰岛素对人肺腺癌细胞A549的化疗增敏作用

目的探讨用胰岛素提高人肺腺癌细胞A549生长代谢水平后对其化疗敏感性的影响。方法采用MTT法检测顺铂对A549细胞抑制率达30%时的药物浓度(IC30),检测胰岛素促进细胞增殖的最佳作用浓度和最佳作用时间,并检测不同浓度及不同时间胰岛素作用后对A549细胞化疗敏感性的影响。用流式细胞仪测定胰岛素对A549细胞周期的影响。结果顺铂的IC30约为36.87μg/ml;胰岛素促进细胞增殖的最佳作用浓度为4.0～16mU/ml,取8mU/ml为终浓度时,胰岛素促进细胞增殖的最佳作用时间为8～16h;胰岛素(2.0～16.0mU/ml,8～16h)可增强顺铂(36.87μg/ml)的细胞毒作用(P<0.01)。流式细胞仪分析显示,胰岛素(8mU/ml)作用4～12h,S期细胞随作用时间延长而逐渐增多,但作用16h后S期细胞数目又逐渐接近于对照组水平。结论胰岛素可通过提高人肺腺癌细胞A549的生长代谢水平而提高顺铂对该细胞的抑制率,且该作用呈时间和浓度依赖性。

人肺腺癌细胞A549放射前后蛋白质组测定及分析

筛选了人肺腺癌细胞A549放射前后的差异蛋白质,并探讨了其在放射中的作用。用双向凝胶电泳对人肺腺癌细胞A549放射前后的蛋白质谱进行分析,寻找差异蛋白质,并用MALDI-TOF-MS进行蛋白质鉴定。检测出25个差异蛋白质点,对其中差异2倍以上的7个蛋白质点用MALDI-TOF-MS鉴定,鉴定出锰超氧化物歧化酶B亚型前体、角蛋白8、角蛋白9、dystrobrevin、不均一核糖核蛋白1(HNRPH1)、烯醇化酶1等6种蛋白质。用双向凝胶电泳筛选细胞系放射前后差异蛋白质,筛选的蛋白质与抗氧化、辐射防护、信号转导、RNA加工和转运、能量代谢及细胞凋亡有关,对于揭示放射的分子机制有一定的意义。

桔梗总皂苷对人肺腺癌细胞系A549移植裸鼠瘤生长和STAT2的影响

目的探讨桔梗总皂苷体内抑制人肺腺癌细胞系A549裸鼠移植瘤生长及其对肿瘤细胞信号传导与转录激活因子2(signal transducer and activatorot transcription2,STAT2)的影响。方法将荷人A549移植瘤BALB/c裸小鼠随机分为模型组、环磷酰胺组、桔梗总皂苷组1(5 mg/kg·d)、桔梗总皂苷组2(10 mg/kg·d)、桔梗总皂苷组3(20 mg/kg·d)、桔梗总皂苷组4(25 mg/kg·d),分别治疗观察30 d,测量瘤体积与质量,并用HE染色观察各组移植瘤组织的病理形态结构,用免疫组化法检测瘤体细胞STAT2蛋白的表达。结果模型组与桔梗总皂苷各组对人肺癌细胞系A549移植瘤抑制作用比较,差异均有统计学意义(P<0.05);桔梗总皂苷对移植瘤体积与抑瘤率均显示出较好作用,桔梗总皂苷组4移植瘤的体积明显小于模型组、桔梗总皂苷其它各组,差异均有统计学意义(P<0.05);桔梗总皂苷各组移植瘤体积大于环磷酰胺组,差异有统计学意义(P<0.05);桔梗总皂苷各组STAT2表达由强到弱随浓度的增加而减弱,成剂量依赖关系,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论桔梗总皂苷对A549肺移植瘤组织生长有较好抑制作用,可能通过下调移植瘤组织STAT2蛋白表达来抑制瘤组织的生长。

莪术油对人肺腺癌细胞A549增殖的影响

目的探讨莪术油对人肺腺癌细胞A549增殖的抑制作用。方法体外培养肺腺癌细胞A549,MTT比色法测定莪术油对A549细胞作用24、48、72 h后抑制率;流式细胞术分析莪术油对A549细胞作用24 h后细胞周期的变化;AnnexinⅤ-FITC/PI双染检测莪术油对A549细胞作用24 h后细胞凋亡与坏死情况。结果莪术油对A549细胞增殖的抑制率随时间延长明显升高,随药物浓度增加抑制作用增强;莪术油对A549细胞作用24 h后,细胞周期停滞在G0/G1期,阻止其进入S期;细胞的早期凋亡、晚期凋亡和坏死比例随着莪术油浓度的增加而增加,且坏死细胞的比例高于凋亡细胞。结论莪术油对A549细胞的增殖具有抑制作用,并呈时间、浓度依赖,其作用是通过阻滞细胞周期及诱导凋亡和坏死来实现的。

H5N1亚型禽流感病毒NS1基因的克隆及其诱导肺腺癌细胞A549凋亡的研究

通过RT-PCR的方法克隆H5N1亚型禽流感病毒NS1基因,并构建了真核表达载体pCMV-Myc/NS1。将此真核表达质粒转染肺腺癌细胞A549,48 h后,经Western印迹检测,NS1基因能在细胞中正确表达。经荧光显微镜、透射电镜观察和流式细胞仪检测,发现该株流感病毒的NS1蛋白可诱导肺腺癌细胞A549凋亡。

白藜芦醇抑制A549人肺腺癌细胞增殖与IGF-ⅠR的关系

目的探讨白藜芦醇对人肺腺癌A549细胞增殖的抑制效应及其与IGF-ⅠR的关系。方法以人肺腺癌A549细胞株为研究对象,采用MTT方法测定细胞增殖,用RT-PCR与免疫印迹方法测定IGF-Ⅰ受体mRNA与蛋白表达水平。结果 2.5～15 nmol/L IGF-Ⅰ可显著促进A549细胞增殖(P<0.05),给予12.5、25.0、50μmol/L白藜芦醇对A549细胞增殖具有明显抑制作用(P<0.05)。白藜芦醇(6.25～50μmol/L)与10 nmol/L IGF-Ⅰ共作用于A549细胞,均可抑制IGF-Ⅰ的促A549细胞增殖作用,其中尤以25、50μmol/L白藜芦醇的抑制增殖作用显著(P<0.05),白藜芦醇可有效降低IGF-ⅠR mRNA与蛋白表达。结论白藜芦醇可通过降低IGF-ⅠR mRNA与蛋白表达有效抑制IGF-Ⅰ介导的A549肺癌细胞增殖。

制滴菌素A治疗人肺腺癌细胞A549裸鼠移植瘤的实验研究

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂制滴菌素A (trichostatinA ,TSA)对人肺腺癌细胞A5 4 9裸鼠移植瘤的治疗作用。方法 建立人肺腺癌细胞A5 4 9裸鼠模型 ,瘤内注射TSA和 0 9%生理盐水 (NS) ,对治疗前后的裸鼠进行瘤重量、瘤体积、细胞形态和凋亡的观察。结果 在实验组和对照组之间 ,瘤重量差异有显著性 (P <0 0 5 ) ;TSA治疗 1周和 2周后瘤体积与治疗前瘤体积相比 ,差异无显著性 (P >0 0 5 )。NS治疗 1周后瘤体积与治疗前相比差异无显著性 ,而治疗 2周后瘤体积与治疗前相比 ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。电镜下可见肿瘤细胞的凋亡现象经TSA干预后明显增多。结论 TSA治疗人肺腺癌细胞A5 4 9裸鼠模型有效。

胰岛素对人肺腺癌细胞A549化疗增敏作用机制的研究

目的探讨胰岛素对化疗药物顺铂(DDP)敏感性的影响和机制。方法选用人肺腺癌细胞A549为靶细胞,采用MTT法检测顺铂对A549细胞抑制率达30%时的药物浓度(IC30),检测胰岛素不同浓度或作用不同时间后,对A549细胞化疗敏感性的影响。流式细胞仪检测不同加药处理组的周期时相变化情况。Western Blot印迹方法检测不同加药处理组的细胞周期蛋白CyclinA和CyclinD1的表达情况。结果顺铂的IC30约为36.87μg/mL;胰岛素(2.0～16.0mU/mL;8h～16h)可增强顺铂(36.87μg/mL)的细胞毒作用(P<0.01)。流式分析显示DDP能引起A549的S期细胞阻滞,胰岛素可增加DDP对A549的S期细胞阻滞。Western Blot印迹方法检测显示单用顺铂组较对照组比较,CyclinA的表达明显增强,CyclinD1的表达变化不明显。胰岛素联合顺铂组较单用顺铂组比较,CyclinA、CyclinD1的表达变化均不明显。结论胰岛素具有化疗增效作用,胰岛素用药的时机选择是实现增效的关键。其机制可能为:胰岛素能够使A549的S期细胞比例增加,与DDP有协同作用。顺铂对人肺腺癌细胞株A549细胞周期的影响表现为S期的阻滞,CyclinA的表达增强在其作用机制上起着重要的作用。

白藜芦醇对人肺腺癌细胞A549增殖及迁移的抑制作用

目的探讨白藜芦醇对人肺腺癌细胞A549增殖及迁移的抑制作用。方法取对数生长期A549细胞,分别应用0、10、30、50、100、300及500μmol/L的白藜芦醇进行干预,24 h、48 h及72 h后检测各组人肺腺癌细胞A549的增殖抑制率。分别应用0、10、30、50、100、300μmol/L白藜芦醇干预A549细胞,24 h、48 h、72 h后测定各组细胞迁移能力。结果在10~100μmol/L浓度范围内,相同作用时间下A549细胞增殖抑制率随着白藜芦醇浓度的增加而提高,且在相同的白藜芦醇浓度下A549细胞增殖抑制率随着白藜芦醇作用时间延长而提高(P<0.05)。在大于100μmol/L浓度范围时,相同作用时间下不同浓度白藜芦醇对人肺腺癌A549细胞增殖抑制率比较,差异无统计学意义(P>0.05),但同一浓度下A549细胞增殖抑制率随着白藜芦醇作用时间延长而提高(P<0.05)。相同作用时间下10~300μmol/L白藜芦醇浓度组细胞的划痕宽度较0μmol/L白藜芦醇组增大,且10~300μmol/L白藜芦醇浓度组的划痕宽度随作用时间延长而增大(P<0.05)。结论白藜芦醇对人肺腺癌A549细胞增殖及迁移有较好的抑制作用,在一定的浓度范围内抑制率呈时间和剂量依赖性。

8-Br-cAMP联合顺铂作用于肺腺癌细胞A549的初步研究

目的:观察8-溴-环腺苷酸(8-Br-cAMP)联合顺铂(DDP)对人肺腺癌细胞A549生长及其表皮生长因子受体(EGFR)表达的影响。方法:MTT法测定不同浓度8-Br-cAMP、DDP以及两药联用处理人肺腺癌细胞A549后细胞增殖活性的差异;应用RT-PCR技术检测EGFR mRNA表达水平的变化;Western blot技术检测EGFR蛋白表达水平的变化;利用流式细胞术测定细胞周期的改变。结果:8-Br-cAMP及DDP均能抑制人肺腺癌细胞A549的增殖,并呈浓度及时间依赖性;DDP联合8-Br-cAMP细胞抑制率显著高于相应浓度单药组(P<0.05),两者呈现出相加的抗瘤效果。8-Br-cAMP可下调人肺腺癌A549细胞EGFR mRNA和蛋白的表达。8-Br-cAMP将细胞周期阻滞在G2/M期(P<0.05)。结论:8-Br-cAMP、DDP均可抑制A549细胞增殖。8-Br-cAMP可显著提高顺铂的细胞毒作用,增强化疗效果,并将细胞阻滞于G2/M期。8-Br-cAMP可以下调EGFR表达,可一定程度地逆转化癌细胞。

羟基喜树碱对A549人肺腺癌细胞增殖的影响

目的观察羟基喜树碱对体外A549人肺腺癌细胞增殖的影响。方法采用细胞培养及MTT比色法检测羟基喜树碱对体外A549人肺腺癌细胞的抑制作用。结果低浓度羟基喜树碱作用24h对A549人肺腺癌细胞没有明显影响,当药物浓度达到50μg/mL时,抑制作用明显增强,抑制率达44.17%,药物浓度达到100μg/mL时抑制率达50.28%;随着药物作用时间的延长,抑制更明显,100μg/mL药物组作用48h抑制率达70.98%。结论羟基喜树碱具有抑制A549人肺腺癌细胞增殖的作用,抑制作用具有明显的浓度和时间依赖性。

RASSF1A基因转染对人肺腺癌细胞株A549增殖的抑制作用

目的:观察外源性RASSF1A基因对人肺腺癌细胞A549增殖及NF κB亚单位P65表达的影响。方法:利用脂质体转染技术将真核表达重组体pcDNA3. 0 RASSF1A质粒和空载体pcDNA3. 0质粒分别导入A549细胞,经G418筛选后获得稳定转染细胞克隆,Westernblotting检测RASSF1A基因表达。采用MTT(四甲基偶氮唑盐)法、流式细胞仪分析转染细胞的生物学行为。RT PCR和Westernblotting检测基因转染对P65表达的影响。结果:经脂质体转染和筛选,建立了稳定表达RASSF1A基因的A549细胞系。与未转染组和转染空白载体组比较,转染RASSF1A基因的细胞生长速度明显减慢(P<0. 05),细胞周期中G1 /G0期比例明显增加(P<0. 05),而S期比例减少;转染组细胞核内P65蛋白表达明显降低(P<0. 05),而全细胞P65蛋白及mRNA表达未见明显变化。结论:RASSF1A基因可能通过抑制P65活性而抑制人肺腺癌细胞A549的生长。