替芬泰对HepG2 A64细胞基因水平表达的影响

目的探讨替芬泰对HepG2 A64细胞基因水平表达的影响。方法选取HepG2 A64耐药细胞株作为研究对象,根据有无使用替芬泰将其分为观察组与对照组,观察组采用抗乙型肝炎病毒(HBV)效果较好的剂量122.5μg替芬泰,对照组除不加替芬泰外,其余处理同观察组。应用基因芯片的方法,检测并分析两组HepG2 A64细胞中的基因表达水平。结果实验结果提示,观察组细胞与对照组细胞比较,许多基因的表达出现相应的上调或下调,编码基因中表达差异10倍以上的基因有11个,分别为:ZNF503反义RNA 1(ZNF503-AS1)、丝氨酸肽酶抑制剂Kazal 4型(SPINK4)、白介素21受体(IL-21R)、钙与整合素结合家族成员4(CIB4)、糖蛋白NMB(跨膜)(GPNMB)、CELF2反义RNA 2(CELF2-AS2)、酸性磷酸酶5(ACP5)、含有7B的kelch域(KLHDC7B)、突触结合蛋白4(SYT4)、MRPL23反义RNA 1(MRPL23-AS1)、智人H19印迹母系表达的转录本(H19),其中IL-21R与免疫相关;把差异表达倍数在1.5倍以上的基因取出,应用KEGG通路分析,有9个,分别为:层粘连蛋白β3(LAMB3)、肿瘤坏死因子(TNF)、周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(p21)、B细胞慢性淋巴细胞白血病/淋巴瘤2(Bcl2)、周期蛋白依赖激酶6(CDK6)、转录激活因子4(CERB)、蛋白激酶C(PKC)、蛋白酪氨酸激酶2(Pyk2)、小鼠骨肉瘤病毒致癌基因同源(FOS),参与HBV感染相关分子调节网络,从而通过干预胞内信号通路钙依赖性酪氨酸激酶-2(Calcium-Pyk2)传导发挥体外抗HBV作用。结论替芬泰可通过调控HBV复制下游Calcium-Pyk2信号通路和p21因子,从而对HBx蛋白的功能产生影响,达到抑制HBV复制的作用,并可通过影响细胞IL-21、Bcl2等免疫因子,提高细胞抗HBV作用。

恩替卡韦耐药乙型肝炎病毒稳定复制细胞系的转录组学分析

目的分析恩替卡韦耐药乙型肝炎病毒(ETV-r HBV)稳定转染前后宿主细胞转录组水平的基因差异表达,为后续开展HBV感染相关机制研究提供基础数据和参考。方法对ETV-r HBV稳定转染细胞株(HepG2.A64)及其原始背景细胞株(HepG2)进行转录组测序(n=3),利用DESeq2软件以|log2 Fold Change|>2、padj<0.05为差异基因筛选条件对测序结果进行差异基因筛选;利用clusterProfiler软件对差异基因进行GO功能富集分析和KEGG功能富集分析。采用RT-qPCR及Western blotting分别检测HBV稳定转染前后宿主细胞DNA修复相关基因mRNA及蛋白的表达水平。结果转录组测序结果显示,与HepG2细胞系相比,ETV-r HBV稳定转染的HepG2.A64细胞系共有613个基因存在差异表达,其中401个上调,212个下调(padj<0.05),GO和KEGG富集分析结果显示,差异表达基因主要参与炎症反应、PI3K/Akt信号通路、PPAR信号通路、NF-κB信号通路以及免疫相关的生物学过程。RT-qPCR及Western blotting检测结果显示,与HepG2细胞系相比,HepG2.A64细胞系中RAD52和XRCC2 mRNA表达量分别下降68.96%±7.59%、69.58%±6.32%,RAD52和XRCC2蛋白表达量分别下降69.93%±3.88%、26.47%±12.7%,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论与原始细胞系HepG2相比,ETV-r HBV稳定转染的HepG2.A64细胞系在转录水平出现大量差异表达基因,同时HepG2.A64细胞系中DNA修复相关基因表达量出现下调。