藁本内酯对AngⅡ诱导的A7r5细胞迁移的影响

目的研究藁本内酯抑制AngⅡ诱导的A7r5细胞迁移的有效浓度及时间。方法采用MTT比色法测定藁本内酯对细胞的毒性;将A7r5细胞铺在6孔板并进行培养,待密度达到70%~80%后,用细胞划痕实验和Transwell细胞迁移实验评估藁本内酯对AngⅡ诱导的A7r5细胞迁移能力的变化,不同浓度（0、2.5、5、10μg/m L）的藁本内酯作用于A7r5细胞,于0、6、12、24 h观察细胞迁移情况,拍照记录,计算细胞迁移速度。结果藁本内酯对AngⅡ诱导的A7r5细胞迁移有明显的抑制作用,在0~10μg/m L浓度范围内呈剂量依赖关系,浓度越高其抑制细胞迁移越明显。同一浓度不同作用时间藁本内酯对AngⅡ诱导的A7r5细胞迁移抑制作用差异具有统计学意义（P〈0.05）;同一时间不同浓度的藁本内酯对AngⅡ诱导的A7r5细胞迁移抑制作用差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论藁本内酯能抑制A7r5细胞的迁移,终质量浓度为10μg/m L藁本内酯作用于1μg/m L AngⅡ诱导的A7r5细胞12 h,其对A7r5细胞迁移抑制作用最明显。

IL-10对AngⅡ诱导的A7r5细胞增殖的抑制作用

目的探讨IL-10对A7r5大鼠胸大动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用及其与p53、bcl-2的变化关系。方法用MTT法测定细胞抑制率;倒置显微镜观察细胞形态;细胞免疫组化法和Western bolt观察细胞内p53、bcl-2基因的表达。结果 IL-10对AngⅡ诱导的A7r5平滑肌细胞增殖有明显抑制作用,但不呈剂量依赖关系;可逆转p53、bcl-2的表达。结论 IL-10对AngⅡ诱导的A7r5平滑肌细胞增殖有明显防治作用,与细胞凋亡基因p53、bcl-2相关。

同型半胱氨酸对A7r5细胞增殖及MMP-9表达的影响

观察同型半胱氨酸(Hcy)对大鼠胸主动脉平滑肌细胞(A7r5细胞)增殖及对基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达的影响。0.25、0.50和1.00 mmol/LHcy分别作用A7r5细胞48 h,倒置显微镜下观察细胞的形态学改变;RT-PCR检测MMP-9 mRNA的表达,Western blot检测MMP-9蛋白的表达。随着Hcy浓度的升高,细胞数目逐渐增多,体积增大,生长旺盛,呈增殖表现。不同浓度Hcy处理组MMP-9 mRNA及蛋白的表达均逐渐增加,各实验组与对照组差异均有统计学意义(P<0.05)。同时显示正常对照组中MMP-9表达相对较少,为(3.60±1.42)%、(1.60±0.82)%。Hcy能促进A7r5细胞增殖,正常A7r5细胞中MMP-9表达较少;Hcy可诱导A7r5细胞MMP-9的表达,这一效应可能是Hcy致心血管疾病的分子机制之一。提示MMP-9可能成为干预心血管疾病的靶点。

去甲肾上腺素对血管平滑肌细胞A7r5基因表达谱的影响

目的探讨去甲肾上腺素刺激后A7r5血管平滑肌细胞基因表达谱的改变。方法应用放射配体结合实验明确A7r5细胞上肾上腺素受体(AR)的表达。采用基因芯片技术观察去甲肾上腺素引起的血管平滑肌细胞基因表达谱的变化。用荧光实时定量PCR验证α1A-AR,α1B-AR的mRNA表达变化。结果A7r5细胞中有α1-AR和β-AR表达,其最大结合容量(Bmax)分别为(450±118)fmol/mg蛋白和(174±25)fmol/mg蛋白。去甲肾上腺素刺激细胞24h后,有75个基因表达发生明显改变,其中涉及细胞结构、防御、代谢及信号转导等多方面的基因。荧光实时定量PCR结果显示去甲肾上腺素刺激细胞24h后α1A-AR和α1B-AR的mRNA表达增加,与基因芯片的结果一致。结论去甲肾上腺素激动AR引起A7r5血管平滑肌细胞多种不同功能的基因表达发生改变,提示在血管平滑肌中AR可能通过基因水平的调控而介导多种生物学功能。

氯化镁对同型半胱氨酸诱导的A7r5细胞增殖及MMP-2、MMP-9表达的影响

观察MgCl2对同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)诱导的大鼠胸主动脉平滑肌细胞(A7r5细胞)增殖及基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和MMP-9表达的影响,旨在探讨镁剂治疗心血管疾病的分子机制。采用细胞培养、MTT法、Western印迹以及RT-PCR等方法,研究0.5mmol/LHcy分别与不同浓度的MgCl2共同作用A7r5细胞48h后,MgCl2对Hcy诱导的A7r5细胞增殖及MMP-2、MMP-9的mRNA及其蛋白质表达的影响。MTT法结果显示,随着MgCl2浓度增加,吸光度值逐渐减少,各实验组与对照组差异均有统计学意义(P<0.05);MgCl2使Hcy诱导的A7r5细胞MMP-2、MMP-9的mRNA和蛋白质表达均减少,其中2.0、3.0mmol/LMgCl2组抑制作用显著(P<0.05)。研究结果表明Hcy促进A7r5细胞增殖的效应能被MgCl2抑制;MgCl2能抑制Hcy诱导的A7r5细胞MMP-2、MMP-9的表达。这一效应可能是镁剂治疗心血管疾病的分子机制之一。

同型半胱氨酸对A7r5细胞凋亡及相关凋亡因子Bcl-2和Bax表达的影响

目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)对体外培养的大鼠胸主动脉平肌滑细胞(A7r5细胞)凋亡的影响及相关机制。方法体外培养A7r5细胞,给予Hcy干预,采用Annexin V-PE/7-AAD双染流式细胞仪测定细胞凋亡率,免疫印迹法(Western Blot)检测相关凋亡因子Bcl-2和Bax的表达。结果给予Hcy干预后,在Hcy不同浓度下(0、200、500、1 000μmol/L)培养24 h后A7r5细胞的凋亡率分别是(1.69±0.19)%、(5.72±1.29)%、(9.42±2.51)%、(17.34±2.86)%;用终浓度(1 000μmol/L)的Hcy培养液分别培养0、12、24、48 h后A7r5细胞的凋亡率分别是(1.78±0.33)%、(8.27±1.45)%、(17.34±2.86)%、(23.72±3.21)%;Hcy诱导A7r5细胞凋亡呈时间及浓度依赖性。给予Hcy干预24 h后,Bcl-2蛋白表达减少,同时Bax蛋白表达增多。结论 Hcy可以诱导A7r5细胞的凋亡,其机制可能与激活线粒体凋亡途径有关。

白芍、赤芍化学成分差异及其对大鼠胸动脉平滑肌A7r5细胞的生物效应比较

目的比较白芍、赤芍水提物中所含化学成分的异同，及探讨白芍、赤芍水提物作用于体外大鼠胸动脉平滑肌株（A7rS）的生物效应差异。方法通过HPLC及质谱分析，比较白芍、赤芍水提物中各单体化学成分的共性与差异。采用体外培养A7r5，利用血小板源生长因子BB（PDGF—BB）诱导A7r5建立细胞增殖病理模型，加入不同剂量的白芍、赤芍水提物，通过MTT比色法和实时细胞分析仪检测细胞活性。结果白芍、赤芍在化学成分上有差别，即使两者拥有共同的成分，含量亦存在差异。在A7r5增殖研究显示，300lag／ml白芍水提液与A7r5对照组相比，细胞增殖显著增加（P〈0．01）；而赤芍水提液对其增殖并不显著（P〉0．05）。100～500μg／ml浓度的赤芍水提物与PDGF-BB病理模型组相比，细胞增殖有显著抑制（P〈0．01）；而白芍水提液对其增殖并不明显（P〉0．05）。结论白芍、赤芍水提物在化学成分上存在差异，并在细胞活性研究中，两者亦表现出不同的生物效应。

阿托伐他汀对氧化低密度脂蛋白诱导的A7r5细胞增殖及Cx43蛋白的影响

目的探讨阿托伐他汀对氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)诱导大鼠胸大动脉平滑肌细胞(A7r5)增殖及缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的影响。方法培养A7r5细胞株,将细胞分4组:对照组,Ox-LDL组,Ox-LDL+二甲基亚砜(DMSO)组及Ox-LDL+他汀组。MTS法细胞毒试验及流式细胞术检测细胞周期,从而检测A7r5的增殖活性;流式细胞术检测各组供体细胞Q3(发绿色荧光)与受体细胞Q4(双阴性)比值(Q3/Q4)的变化,从而分析GJ功能的变化;Western blot法检测A7r5细胞中Cx43表达。结果与对照组相比,Ox-LDL组及Ox-LDL+DMSO组A7r5细胞的增殖活性增加,S期细胞比率增高(P<0.05);与Ox-LDL组及Ox-LDL+DMSO组比较,Ox-LDL+他汀组二者均降低(P<0.05)。与对照组相比较,Ox-LDL组及Ox-LDL+DMSO组A7r5细胞的Q3/Q4比值增大,提示缝隙连接功能增强(P<0.05);与Ox-LDL组及Ox-LDL+DMSO组比较,Ox-LDL+他汀组Q3/Q4比值减小,缝隙连接功能显著降低(P<0.05)。与对照组相比,Ox-LDL组和Ox LDL+DMSO组A7r5细胞的Cx43表达增多(P<0.05);与Ox LDL组及Ox-LDL+DMSO组比较,Ox LDL+他汀组Cx43表达减少(P<0.05)。结论阿托伐他汀可以抑制氧化低密度脂蛋白诱导的A7r5细胞增殖及Cx43蛋白的表达。

缝隙连接在氧化低密度脂蛋白诱导A7r5细胞增殖中的作用

目的探讨氧化低密度脂蛋白(Ox LDL)诱导大鼠胸大动脉平滑肌细胞(A7r5)发生增殖时缝隙连接(GJ)功能及缝隙连接蛋白(Cx)表达的变化。方法培养A7r5细胞株,将细胞分4组,即对照组,Ox LDL组,缝隙连接阻断剂(18α-GA)组和Ox LDL+18α-GA组。MTS法及流式细胞仪检测A7r5的增殖活性;流式细胞仪检测各组发绿色荧光的供体细胞(Q3)与双阴性的受体细胞(Q4)比值(Q3/Q4)的变化,从而分析GJ功能改变;Western blot法检测细胞中Cx43蛋白表达。结果与对照组相比较,Ox LDL组A7r5细胞增殖活性增加,细胞周期S期细胞比率增高(P<0.05),18α-GA组细胞增殖活性及S期细胞比率降低(P<0.05);与Ox LDL组比较,Ox LDL+18α-GA组两者均降低(P<0.05)。与对照组比较,Ox LDL组A7r5细胞的Q3/Q4比值增大,缝隙连接功能增强(P<0.05),18α-GA组Q3/Q4比值减小,缝隙连接功能减弱(P<0.05);与Ox LDL组比较,Ox LDL+18α-GA组Q3/Q4比值减小,缝隙连接功能显著降低(P<0.05)。与对照组相比较,Ox LDL组A7r5细胞的Cx43蛋白表达增强(P<0.05),18α-GA组Cx43表达减弱(P<0.05);与Ox LDL组比较,Ox LDL+18α-GA组Cx43表达减弱(P<0.05)。结论缝隙连接功能的增强参与了由Ox LDL介导的A7r5细胞增殖。

缝隙连接影响氧化低密度脂蛋白诱导A7r5细胞增殖的机制

目的探讨缝隙连接(GJ)是否通过PI3K/Akt信号途径影响氧化低密度脂蛋白(Ox LDL)诱导的大鼠胸大动脉平滑肌细胞(A7r5)增殖。方法培养A7r5细胞株,将细胞分4组,即对照组、Ox LDL组、Ox LDL+二甲基亚砜(DMSO)组和Ox LDL+Akt抑制剂(MK-2206)组。用MTS法及流式细胞仪检测A7r5的增殖活性;流式细胞仪检测各组发绿色荧光的供体细胞(Q3)与双阴性受体细胞(Q4)的比值(Q3/Q4)变化,从而分析GJ功能改变;Western blot法检测细胞中Cx43、Akt、p-Akt蛋白表达。结果与对照组比较,Ox LDL组及Ox LDL+DMSO组A7r5细胞增殖活性增加,细胞周期S期细胞比率增高(P<0.05);与Ox LDL组比较,Ox LDL+MK-2206组两者均降低(P<0.05)。与对照组相比较,Ox LDL组及Ox LDL+DMSO组A7r5细胞的Q3/Q4比值增大,GJ功能增强(P<0.05);与Ox LDL组比较,Ox LDL+MK-2206组Q3/Q4比值减小,GJ功能显著降低(P<0.05)。与对照组相比较,Ox LDL组和Ox LDL+DMSO组A7r5细胞的Cx43、p-Akt蛋白表达增强(P<0.05);与Ox LDL组比较,Ox LDL+MK-2206组Cx43、p-Akt蛋白表达减弱(P<0.05)。与对照组比较,Ox LDL组、LDL+DMSO组及Ox LDL+MK-2206组A7r5细胞的Akt蛋白均变化不明显。结论 GJ可以通过PI3K/Akt信号途径影响Dx LDL诱导的A7r5细胞增殖。

同型半胱氨酸对A_7r_5细胞增殖及MMP-2表达的影响

目的：观察同型半胱氨酸（Hcy）对大鼠胸主动脉平滑肌细胞（A7r5细胞）增殖及基质金属蛋白酶2（MMP-2）表达的影响。方法：分别用0、0.25、0.5、1 mmol/L Hcy作用A7r5细胞48 h后,细胞计数及MTT法检测A7r5细胞的增殖情况,半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测MMP-2 mRNA的表达,免疫印迹法（Western blot）检测MMP-2蛋白的表达。结果：随着Hcy浓度的增加,A7r5细胞数目和吸光度（OD）值呈剂量依赖性增加,其中0.25、0.5、1 mmol/L Hcy组与对照组差异均有统计学意义（P〈0.05-P〈0.01）。MMP-2 mRNA的表达随着Hcy浓度的增加而增加,呈剂量依赖性,各实验组与对照组差异均有统计学意义（P〈0.05）。Hcy呈剂量依赖性上调A7r5细胞MMP-2蛋白的表达,各实验组与对照组差异均有统计学意义（P〈0.05-P〈0.01）。结论：Hcy在一定范围内呈剂量依赖性促进A7r5细胞增殖,可在蛋白及mRNA水平使A7r5细胞MMP-2表达呈剂量依赖性增加,这一效应可能是Hcy致动脉粥样硬化的分子机制之一。

circTCF25抑制mTOR信号通路对TNF⁃α诱导血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

目的探讨环状RNA TCF25(circTCF25)对肿瘤坏死因子α(TNF⁃α)诱导血管平滑肌细胞(A7r5)增殖和迁移的影响和可能机制。方法TNF⁃α(100 ng/mL)诱导A7r5后,RT⁃qPCR检测circTCF25、mTOR mRNA和p70S6k mRNA表达,CCK⁃8法和集落形成实验检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞迁移。将circTCF25过表达载体转染A7r5,检测过表达circTCF25对TNF⁃α处理的A7r5增殖、迁移、mTOR mRNA和p70S6k mRNA表达的影响。结果TNF⁃α诱导后A7r5增殖能力、迁移细胞数显著升高,circTCF25表达显著降低,mTOR mRNA和p70S6k mRNA表达显著升高(P<0.05);过表达circTCF25后,TNF⁃α诱导的A7r5增殖能力、迁移细胞数显著降低,mTOR mRNA和p70S6k mRNA表达显著降低(P<0.05)。抑制mTOR信号通路可减轻过表达circTCF25对TNF⁃α作用的A7r5增殖和迁移的影响(P<0.05)。结论circTCF25能抑制TNF⁃α诱导的血管平滑肌细胞增殖和迁移,其机制可能与阻断mTOR信号通路有关。

黄连素对肿瘤坏死因子TNF-α介导的炎症作用机理研究

[目的]探讨黄连素抑制HUVEC中TNF-α引起的细胞炎症的发生。[方法]分别培养HUVEC和A7r5细胞,不同药物浓度处理后,提取HUVEC mRNA,用实时荧光定量PCR测定VCAM-1表达水平;用虎红染色法检测HUVEC和人单核细胞(THP-1)的黏附性;用细胞迁移和MTT增殖实验分别检测黄连素对A7r5迁移和增殖作用的影响。[结果]黄连素预处理能有效阻止TNF-α诱导的VCAM-1mRNA增高,并减弱由其导致的THP-1对HUVEC的黏附性增加,同时抑制由TNF-α诱导的平滑肌细胞的迁移和增值作用。[结论]黄连素对炎症及心血管疾病有潜在的治疗作用。

血管平滑肌细胞快速牵张损伤后细胞缝隙连接功能的变化

目的:探讨牵张损伤时血管平滑肌细胞(A7r5)缝隙连接功能的改变及其影响因素。方法:采用细胞牵张损伤装置建立A7r5细胞损伤模型,通过细胞培养、荧光显微镜、共聚焦激光扫描显微镜荧光漂白后恢复技术检测对照组,轻度、中度和重度牵张损伤组细胞活性(Hoechst 33342和propidium iodide染色)、细胞内钙(Fluo_4/AM染色)、细胞内氧自由基(H2D-CFDA染色)和细胞间通讯功能(5_CFDA染色)的变化。结果:随着细胞牵张损伤的加重,细胞活性降低、细胞内钙及细胞内氧自由基升高、细胞间通讯功能下调。含钙缓冲液和细胞间通道阻断剂甘珀酸可使细胞通讯功能进一步下调,而Ca2+鳌合剂———乙二醇四乙酸、氧自由基清除剂———超氧化物歧化酶可使细胞通讯功能上调。结论:牵张损伤可通过细胞内钙超载和活性氧的增多来降低平滑肌细胞缝隙连接的细胞通讯功能。

异钩藤碱通过AT1受体调控血管平滑肌细胞时钟基因昼夜节律的研究

【目的】探讨异钩藤碱通过血管紧张素1型受体(AT1R)对血管平滑肌细胞(A7r5细胞)时钟基因昼夜节律改变的调控作用。【方法】采用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导A7r5细胞构建时钟基因节律改变模型。实验分为正常对照组、模型组(AngⅡ剂量为0.1μmol/L)、异钩藤碱组(异钩藤碱剂量为31μmol/L)和异钩藤碱联用缬沙坦(AT1R阻滞剂)组(异钩藤碱31μmol/L、缬沙坦10μmol/L)。采用实时定量聚合酶链反应(q PCR)法检测各个时间点不同组A7r5细胞中AT1R、Per2、Bmal1、Clock基因的表达水平,建立数学模型计算不同参数间的差别。采用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测各个时间点不同组A7r5细胞中Src和p-Src蛋白表达情况。【结果】A7r5细胞经AngⅡ(0.1μmol/L)作用后,AT1R、Per2、Bmal1、Clock基因出现昼夜节律改变,呈现反杓型波动;Src蛋白磷酸化表达增加。异钩藤碱(31μmol/L)作用后,上述时钟基因表达恢复正常的杓型波动。异钩藤碱(31μmol/L)与缬沙坦(10μmol/L)联用后,上述时钟基因的昼夜节律受到一定程度的抑制,各组细胞的中值、振幅和峰相位发生不同程度的改变,Src蛋白磷酸化水平下调。【结论】异钩藤碱通过AT1R-Src信号途径可调控AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞时钟基因表达的昼夜节律改变。

血府逐瘀合剂对PDGF-BB诱导的血管平滑肌细胞增殖、迁移及PI3K/AKT/GSK-3β/β-catenin信号通路的影响

目的:探究血府逐瘀合剂对血小板衍生生长因子(PDGF)-BB诱导的血管平滑肌细胞增殖、迁移及磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶/糖元合成酶激酶3β/β-连环蛋白(PI3K/AKT/GSK-3β/β-catenin)信号通路的影响。方法:利用重组鼠PDGF-BB体外刺激大鼠胸大动脉平滑肌细胞A7R5诱导增殖、迁移模型,分为6组:对照组、PDGF-BB组、低剂量血府逐瘀合剂+PDGF-BB组、高剂量血府逐瘀合剂+PDGF-BB组、PI3K激活剂+PDGF-BB组、PI3K激活剂+高剂量血府逐瘀合剂+PDGF-BB组,CCK-8法检测A7R5细胞增殖活力;流式细胞术检测A7R5细胞周期;细胞划痕实验检测A7R5细胞迁移情况;免疫印迹检测A7R5细胞增殖、迁移相关蛋白及PI3K/AKT/GSK-3β/β-catenin信号通路相关蛋白。结果:与对照组比较,PDGF-BB组A7R5细胞增殖率、迁移面积、S期比例,PCNA、cyclin D1、MMP9蛋白及p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-GSK-3β/GSK-3β、胞核β-catenin/总β-catenin蛋白比值显著增加,G0/G1期比例、E-cadherin蛋白显著减少(P<0.05);与PDGF-BB组比较,低、高剂量血府逐瘀合剂+PDGF-BB组A7R5细胞增殖率、迁移面积、S期比例,PCNA、cyclin D1、MMP9蛋白及p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-GSK-3β/GSK-3β、胞核β-catenin/总β-catenin蛋白比值显著减少,G0/G1期比例、E-cadherin蛋白显著增加,且高剂量血府逐瘀合剂+PDGF-BB组优于低剂量血府逐瘀合剂+PDGF-BB组(P<0.05);与高剂量血府逐瘀合剂+PDGF-BB组比较,PI3K激活剂+高剂量血府逐瘀合剂+PDGF-BB组A7R5细胞增殖率、迁移面积、S期比例,PCNA、cyclin D1、MMP9蛋白,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-GSK-3β/GSK-3β、胞核β-catenin/总β-catenin蛋白比值显著增加,G0/G1期比例、E-cadherin蛋白显著减少(P<0.05)。结论:血府逐瘀合剂可抑制PDGF-BB诱导的血管平滑肌细胞增殖、迁移,可能通过抑制PI3K/AKT/GSK-3β/β-catenin信号通路而实现。

坎地沙坦对高糖诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 观察大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞株A7r5在高浓度葡萄糖作用下的增殖、分泌变化以及不同浓度坎地沙坦（Cand）对其作用的影响。方法 将A7r5细胞培养48 h后随机分组，正常糖组（NG,5 mM D-glucose）、高糖组（HG,15、25、35、45 mM D-glucose）、高糖（25mM）＋Cand10-5mol/L组、高糖（25mM）＋Cand10-6mol/L组、高糖（25mM）＋Cand10-7mol/L组,以MTT法检测细胞增殖；ELISA法检测培养基中细胞分泌血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）的水平； 采用细胞免疫荧光染色法检测A7r5细胞膜上AT1受体的分布量。结果 高糖刺激24、48、72 h后，与NG组相比，HG组吸光度值均明显升高（p〈0.05）且以高糖25mM组增高为甚，与NG组相比差异有统计学意义（p〈0.01）；高糖刺激48 h后，与NG组相比，HG组分泌AngⅡ水平均明显升高（p〈0.05）且以高糖25mM组增高为甚，与NG组相比差异有统计学意义（p〈0.01）；细胞免疫荧光染色法可观察到A7r5细胞膜上AT1受体，且HG组较NG组分布量明显增多；与高糖25mM组相比，中、高浓度Cand组对A7r5细胞增殖有抑制作用,其差异均有统计学意义（p〈0.05）；与高糖25mM组相比，Cand组对A7r5细胞分泌AngⅡ无影响，其差异无统计学意义（p〉0.05）；与高糖25mM组相比，Cand组细胞膜上AT1受体分布量明显减少。结论 高糖可诱导A7r5细胞异常增殖，促使细胞分泌AngⅡ，促使细胞膜上AT1受体分布量增多。Cand可能拮抗了AngⅡ与AT1受体的结合及抑制AT1受体分布量，而发挥抑制高糖诱导的A7r5细胞增殖。

芭蕉花活性成分提取及其体外生物活性研究

目的研究芭蕉花的活性成分及其体外生物活性。方法通过硅胶柱色谱、大孔树脂、TLC分离等对芭蕉花提取物进行分离,并用高效液相色谱,结合质谱分析等方法,进行成分鉴定;采用体外MTT法进行芭蕉花活性组分对抑制肝癌BEL-7402细胞增殖作用的筛选,对抑制AngⅡ诱导的A7r5平滑肌细胞增殖作用进行活性筛选。结果通过液-质分析,从芭蕉花乙酸乙酯提取物和石油醚提取物中发现其中有一种化合物可能为豆甾醇。MTT筛选发现芭蕉花石油醚提取物的4种萃取物组分中,乙酸乙酯相和石油醚相对肝癌BEL-7402细胞具有显著的增殖抑制作用(P<0.01),且呈一定的剂量和时间依赖性;芭蕉花的3种提取物组分中,乙酸乙酯相和石油醚相对AngⅡ诱导的A7r5平滑肌细胞增殖具有显著的抑制作用(P<0.01),且其抑制作用呈一定的剂量和时间依赖性。结论芭蕉花石油醚提取物的石油醚萃取部位和乙酸乙酯萃取部位对肝癌BEL-7402细胞具有显著的增殖抑制作用,72 h的IC50分别为67.4μg/m L和34.5μg/m L,且石油醚提取物和乙酸乙酯提取物对AngⅡ诱导的A7r5平滑肌细胞增殖有抑制作用,72 h的IC50为55.5μg/m L。从芭蕉花提取物中分离出单体豆甾醇,为芭蕉花活性成分的深入研究提供了参考。

氧化应激介导多柔比星导致的大鼠主动脉血管平滑肌细胞损伤

目的探讨氧化应激在多柔比星(Dox)诱导大鼠主动脉血管平滑肌细胞(A7r5细胞)损伤中的作用及其机制。方法A7r5细胞经Dox 0,0.33,1.00和1.33μmol·L^(-1)孵育24 h,MTT法测定细胞存活率;倒置荧光显微镜下观察各组细胞形态;DCFH-DA荧光探针法测定活性氧(ROS)水平;比色法测定过氧化氢酶(CAT)含量;硝酸盐法测定一氧化氮(NO)含量;Western印迹法检测硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸(NADPH)氧化酶2(NOX2)、NADPH氧化酶的胞膜催化亚基p22^(phox)、内皮型NO合酶(eNOS)、诱导型NO合酶(iNOS)、蛋白激酶Cα(PKCα)、PKCβ1和PKCβ2蛋白表达水平。结果与对照组细胞相比,Dox 0.33,1.00和1.33μmol·L^(-1)组细胞存活率显著降低(P<0.05,P<0.01),镜下可见A7r5死细胞数目明显增加,不规则型,细胞核呈碎片状;细胞ROS水平显著升高(P<0.01),CAT含量明显下降(P<0.01),NO含量升高(P<0.01);Dox 1.00和1.33μmol·L^(-1)组细胞内TXNIP,p22^(phox),eNOS和iNOS蛋白表达水平显著升高(P<0.01);Dox 1.33μmol·L^(-1)组细胞内PKCα和PKCβ1蛋白表达水平显著升高(P<0.05);Dox 0.33,1.00和1.33μmol·L^(-1)组细胞内PKCβ2蛋白表达水平显著升高(P<0.05),而NOX2蛋白表达水平呈上升趋势,但未达到统计学差异。结论Dox导致A7r5细胞活力下降和氧化应激损伤,其机制可能与PKC激活NADPH氧化酶和NOS活性,进而诱导ROS大量产生有关。

H3K9me3参与调节高糖诱导大鼠胸主动脉平滑肌细胞增殖

目的:研究H3K9me3在高糖诱导大鼠胸主动脉平滑肌A7r5细胞增殖中的作用,并初步探讨其可能的作用机制。方法:应用MTT法检测高糖刺激下不同浓度的H3K9甲基转移酶SUV39H1特异性抑制剂Chaetocin(0、10、25、50、75、100 nmol/L)和50nmol/L H3K9甲基转移酶SUV39H1特异性抑制剂Chaetocin在不同时间点(24、48、72 h和5 d)对细胞增殖的影响。应用Western bolt法观察50 nmol/L H3K9甲基转移酶SUV39H1特异性抑制剂Chaetocin在高糖浓度下干预A7r5细胞72 h后,对H3K9me3和p53表达的影响。结果:Chaetocin可显著抑制高糖诱导下A7r5细胞的增殖,且抑制作用呈浓度和时间依赖性。与正常糖相比,Chaetocin可显著下调A7r5细胞在高糖诱导下表达增多的H3K9me3,同时显著上调在高糖诱导下表达减少的p53(P<0.05)。结论:高糖可通过H3K9me3下调p53的表达促进大鼠胸主动脉平滑肌A7r5细胞的增殖,H3K9甲基转移酶SUV39H1特异性抑制剂Chaetocin可抑制上述过程,为减少糖尿病大血管并发症提供了治疗的新思路。