微细胞介导人14号染色体自A9细胞转移至DT40细胞

为了获得含人14号染色体的DT40细胞,用于人抗体基因的表达研究.本研究利用微细胞介导的染色体转移技术,将A9细胞中的人14号染色体转移至DT40细胞中.首先,摸索秋水仙胺诱导A9细胞微核形成最佳浓度与最佳时间,以终浓度为10 mg/mL的细胞松驰素B破坏细胞骨架,离心分离微细胞,获得的微细胞依次经8μm、5μm、3μm滤膜过滤后与受体细胞DT40融合,细胞铺板后加入G418筛选.然后,对长出的抗性克隆进行基因组DNA检测及FISH杂交,分析人14号染色体在DT40杂合细胞克隆中的存在情况.结果显示,成功获得含人14号染色体的DT40(#14)细胞,三轮试验共获得抗性克隆30个,人14号染色体有效转移率为1×10-6.实验结果表明,人14号染色体完整的自A9细胞转移至DT40细胞,获得的DT40(#14)细胞可用于制备含人抗体基因的人类人工染色体,用于人抗体基因的表达研究.

溶血、脂血和黄疸血对血清细胞角蛋白18-3A9检测的影响

细胞角蛋白18-3A9（CK18-3A9）是一种分化特异的蛋白质,广泛存在于上皮细胞,是组成细胞骨架的蛋白质之一[1]。在上皮细胞恶性转化过程中激活的蛋白酶加速CK 18的降解,使得大量CK 18片段释放入血液循环,造成组织液。

两种细小病毒MVM宿主细胞的比较研究

ＭＶＭ属自主性细小病毒，对相当多种类的体内外生长的肿瘤细胞和转化细胞有抑制作用。本文对ＮＢＫ细胞的软琼脂克隆形成率和染色体进行了分析，确认ＮＢＫ细胞为转化细胞，且对ＭＶＭ敏感。在此基础上，比较了两种细小病毒ＭＶＭ宿主细胞ＮＢＫ和Ａ＿９的细胞存活率、单位体积培养液中的细胞产量和病毒产量，认为Ａ＿９细胞更适合于作为细小病毒ＭＶＭ的宿主细胞进行病毒的制备和生产。

一种适用于生产转染色体动物的微细胞制备方法(英文)

微细胞介导的染色体转移技术(MMCT)是一项将外源染色体转入哺乳动物细胞的技术,具有广阔的应用前景.与体细胞核移植技术结合,MMCT可用于生产具有重要医学药用价值和优良农业生产性状的转染色体动物.制备高质量的微细胞是关系MMCT技术成功的关键步骤之一.通过荧光染色和吉姆萨染色分析,结果表明,A9(neo12)细胞经0.2mg/L秋水仙素酰胺处理48h后,89%的细胞产生微核化,每个细胞平均形成10个微核.微核化的细胞在含有20mg/L细胞松弛B的Percoll密度梯度介质中,经39000g高速离心后,包含微细胞、完整细胞、细胞核和细胞碎片的混合液,依次通过8μm和5μm孔径的滤膜过滤后可获得纯化的微细胞溶液.通过光学显微镜和吉姆萨染色观察,可见微细胞为一群直径约为3～5μm的类细胞核的球形物质.微细胞PCR技术首次用于检测微细胞溶液的质量,检测结果显示,所制备的溶液中均匀分布着带有目的染色体的微细胞,适用于进一步作转染色体动物实验.

L615细胞双微体DNA的转化研究

用L615细胞的双微体(DM)转化A9细胞,得到了转化的A9t3细胞系。A9t3与A9细胞在细胞形态上有显著差异。A9t3细胞含有双微体,具有较高的抗氨甲喋呤能力,二氢叶酸还原酶活性增加,出现了A9细胞所没有的蛋白质电泳带。

卡培他滨联合顺铂治疗晚期胃癌中血清细胞角蛋白18-3A9、糖链抗原19-9、糖链抗原72-4的变化及临床价值研究

目的探讨卡培他滨联合顺铂治疗晚期胃癌前后血清细胞角蛋白18-3A9(CK18-3A9)、糖链抗原19-9(CA19-9)、糖链抗原72-4(CA72-4)的变化及对疗效评估价值。方法收集2016年7月-2018年10月住院诊治晚期胃癌患者98例,均接受卡培他滨联合顺铂治疗,检测患者治疗前后血清CK18-3A9、CA19-9、CA72-4水平,对治疗前后及不同疗效肿瘤标志物水平进行分析。结果治疗后与治疗前比较,患者血清CK18-3A9、CA19-9、CA72-4水平均有所降低,差异有统计学意义(P<0.05);部分缓解组与稳定组、进展组比较CA72-4和CK18-3A9水平差异有统计学意义(P<0.05)。结论血清CK18-3A9、CA19-9、CA72-4水平的变化可用于监测卡培他滨联合顺铂治疗晚期胃癌的临床疗效,CK18-3A9的判断价值优于CA19-9、CA72-4。

响应面法优化鼠细小病毒悬液制备及滴度测定

[目的]研究鼠细小病毒(MMV)感染性滴度测定方法,同时制备高滴度的MMV。[方法]通过Box-Behnken设计-响应面法优化A9细胞制备MMV及MMV感染性滴度测定工艺。[结果]A9细胞的最佳接种浓度、病毒培养时间及病毒吸附时间分别为9×10^(3)个/孔、12 d及0 h,所建立的检测方法精密性较好;A9细胞沉淀中病毒滴度高于上清,且随病毒MOI值的升高而逐渐增加,在MOI为0.5时,感染后72 h收获,病毒滴度最高。[结论]Box-Behnken设计-响应面法适用于A9细胞制备MMV及MMV感染性滴度测定工艺。制备的病毒液的平均滴度为6.35TCID_(50)/0.1 mL。

鼠细小病毒感染性滴度测定方法的建立及病毒制备

目的建立鼠细小病毒(MMV)感染性滴度测定方法,并制备高滴度的MMV,为生物制品病毒清除/灭活工艺的验证奠定基础。方法通过分析NB324K细胞接种量、培养时间及病毒吸附时间等参数,建立MMV病毒滴度测定的半数细胞感染剂量法(CCID5)0,并分析其精密性;以A9细胞制备MMV,分析感染复数(MOI)、收获时间及收获样本对病毒滴度的影响,并检测病毒的稳定性。结果NB324K细胞的最佳接种浓度、培养时间及病毒吸附时间分别为5×103个/孔、48h及2h,所建立的检测方法精密性较好;A9细胞沉淀中病毒滴度高于上清,且随病毒MOI值的升高而逐渐增加,在MOI为10时,感染后48h收获,病毒滴度最高。制备的病毒液的平均滴度为8.69CCID50/ml,4℃和37℃保存7d及反复冻融5次,稳定性良好。结论已建立了MMV感染性滴度测定方法,并制备了高滴度的病毒,为以MMV为指示病毒进行病毒清除/灭活工艺验证奠定了基础。