pCDNA3-AADC真核表达载体的构建及其在原代培养骨骼肌细胞中的表达

目的 将人类神经元性芳香族氨基酸脱羧酶（AADC）基因构建于含CMV启动子的真核表达载体pCD-NA3上,并检测其在原代培养骨骼肌细胞中的表达。方法 采用分子克隆技术将经测序证实的人神经元性AADC基因片段同真核表达载体pCDNA3连接,酶切鉴定并筛选出正向连接重组体,并采用脂质体转染法将其导入原代培养的骨骼肌细胞,免疫印记检测该基因的表达。结果 酶切证实基因片断正向连接于pCDNA3上,并在原代骨骼肌细胞中获得表达。结论 含人类神经元AADC基因的真核表达重组体可在原代培养的骨骼肌细胞中有效的表达。

人神经元性AADC基因的克隆、测序及其对帕金森病的治疗作用(英文)

背景:帕金森病患者脑内黑质多巴胺能神经元变性导致芳香族氨基酸脱羧酶(aromaticL-aminoaciddecarboxylase,AADC)活性水平的降低及波动是产生帕金森患者临床症状和在L-dopa替代治疗时“症状波动”等不良反应出现的重要原因之一。目的:探讨AADC基因脑内移植对帕金森病的治疗作用及其在左旋多巴治疗过程中的地位,并探讨阳离子脂质体介导的基因治疗方法的有效性。设计:2×2析因设计。地点和材料:中山大学附属第二医院林百欣医学研究中心,材料主要包括人嗜铬细胞瘤组织,TRIzol,真核表达载体质粒pCDNA3,阳离子脂质体,6-OHDA,阿朴吗啡,AADC单克隆抗体,SD大鼠。干预:使用基因克隆、亚克隆技术构建pCDNA3-AADC真核表达载体;将帕金森病模型的SD大鼠随机分为实验组与对照组,分别以pCD-NA3-AADC重组体和pCDNA3空载体进行阳离子脂质体包裹后,注射于帕金森病SD大鼠纹状体内,并在该基础上对两组大鼠分别采用一定浓度的L-dopa进行治疗。采用免疫组化方法确定AADC的表达。主要观察指标:①AADC基因脑内移植后两组大鼠的旋转行为。②采用一定浓度的L-dopa进行治疗对大鼠旋转行为的影响。结果:①阳离子脂质体包裹的pCDNA3-AADC重组体脑内注射后,在3,7,14,21,28d时大鼠的旋转行为获得了一定的改善(P<0.05),分别改善了56.0%。

人AADC基因在cos-7细胞中的表达和活性检测

目的 研究人芳香族左旋氨基酸脱羧酶 (AADC)基因在多巴胺代谢过程中的作用。方法 从人胎儿黑质组织中提取总RNA ,以RT PCR法扩增AADCcDNA片段 ,克隆于 pGEM T载体中。测序正确后再构建真核表达载体 ,转染猴肾成纤维细胞COS 7,原位杂交检测AADC表达 ,加入L DOPA后 ,用高效液湘色谱测定转AADC细胞的多巴胺(DA)生成量 ,以了解转基因细胞AADC基因的功能活性。结果 RT PCR扩增出 144 2bp的cDNA片段与Genbank[NM 0 0 0 790 ]登录的序列相同 ,构建真核表达载体 pBK RSV AADC ,原位杂交证实其在COS 7表达阳性率为 70 % - 80 % ,在AADC活性作用下实验组的DA生成量是对照组的 4倍以上 (P <0 0 1)。结论 所克隆的AADC基因可在真核细胞中表达并具有生物活性。可望用于帕金森病的基因治疗。

卞丝肼对6-OHDA损毁大鼠纹状体AADC活性的影响

目的观察卞丝肼对6-羟多巴胺(6-OHDA)所致帕金森病模型大鼠纹状体芳香L-氨基酸脱羧酶(AADC)活性的影响。方法采用6-OHDA建立帕金森病大鼠模型(黑质纹状体去神经支配),用生理盐水制作假损毁大鼠作为对照;注射卞丝肼60分钟后,处死大鼠,迅速摘除大脑,并取出纹状体,进行匀浆处理。取匀浆上清液加入到培养基中培养后用高效液相色谱柱(HPLC)进行DA含量测试。结果在假损毁大鼠中,10 mg/kg卞丝肼和50 mg/kg卞丝肼可以使纹状体AADC活性明显降低(P<0.01)。在6-OHDA损毁大鼠纹状体中,10 mg/kg卞丝肼和50 mg/kg卞丝肼明显降低AADC活性,分别为对照物组的25%和12%(P<0.01)。然而,10 mg/kg卞丝肼和50 mg/kg卞丝肼组之间无统计学差异。结论卞丝肼降低6-OHDA损毁大鼠黑质纹状体AADC活性,影响L-DOPA代谢。

帕金森病大鼠TH和AADC基因的共转导研究

目的：探讨在多巴胺水平对帕金森病进行直接转基因调控。方法应用腺伴随病毒（ＡＡＶ）载体共转导酪氨酸羟化酶（ＴＨ）和芳香族氨基酸脱羧酶（ＡＡＤＣ）基因于模型大鼠纹状体，以复合感染方式将ＡＡＶＴＨ和ＡＡＶＡＡＤＣ通过立体定向法注射入帕金森病大鼠病损侧纹状体，连续观测转导后大鼠行为改善情况，并以免疫组化方法测定ＴＨ和ＡＡＤＣ表达。结果ＴＨ和ＡＡＤＣ基因共转导较单纯ＴＨ基因转导更明显改善大鼠行为（Ｐ＜００１），组织学证据表明两基因在纹状体内获有效而稳定的共表达。结论ＴＨ和ＡＡＤＣ基因的共转导策略，对提高帕金森病基因治疗疗效有重要意义。

BMSCs移植治疗对PD模型大鼠脑纹状体内AADC表达的影响及其机制研究

为了探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植治疗对PD模型大鼠脑纹状体内芳香族氨基酸脱羧酶(AADC)表达的影响及其可能机制,试验分别提取正常大鼠(N组)、PD模型大鼠(M组)和BMSCs移植治疗大鼠(T组)脑纹状体的总RNA、总蛋白和miRNA,采用RT-PCR和Western-blot方法检测移植治疗前后AADC的mRNA和蛋白表达以及靶向AADC 3'-UTR的miRNA的表达。结果表明:与N组正常大鼠相比,大鼠脑纹状体内AADC mRNA的表达在BMSCs移植治疗前后(M组和T组)均不存在显著差异,但是与mRNA表达不一致的是AADC蛋白表达在M组极显著下降(P<0.01),T组极显著回升(P<0.01)。靶向AADC的miR-3065-5p、miR-7a-1-3p、miR-31a-5p表达在M组极显著上升(P<0.01),但在T组表达极显著下降(P<0.01)。说明BMSCs移植治疗能够增加脑纹状体内AADC蛋白的表达,并且该过程可能受到下调miRNA的转录后调控。

芳香族L-氨基酸脱羧酶缺乏症2例报告及文献复习

目的报道芳香族L-氨基酸脱羧酶缺乏症(AADCD)患儿的临床表现及基因特征。方法分析2例AADCD患儿的临床资料及基因结果,并复习相关文献。结果2例女性患儿,均为新生儿期起病,表现为喂养困难、运动发育落后、眼球震颤、痉挛发作。2例患儿均于1岁余行基因检测,发现DDC基因第13外显子的杂合突变c.1234C>T,例1来源于母亲,例2来源于父亲;同时例1和例2也均携带新的杂合突变c.170A>G(p.I57T)和c.179T>C(p.V60A),临床意义不明。结论2例AADCD患儿均有典型临床表现,早期基因检测识别确诊有助于改善预后。

芳香族氨基酸脱羧酶及其与帕金森病基因治疗的关系

帕金森病 (PD)是一种以黑质纹状体多巴胺能神经元减少为特征的疾病 ,给予左旋多巴可以提高帕金森病人脑内纹状体多巴胺的水平。芳香族氨基酸脱羧酶 (AADC)在脑内多巴胺神经递质合成过程中将L -DOPA转换成为多巴胺 ,它在基因表达和蛋白活性上分别受到调节。PD病程中 ,与L -DOPA的波动相关的AADC基因调节对疾病的治疗有重要作用。

抗高温无固相钻井液技术

针对钻井液易高温变性的特点,通过研制出耐高温增黏剂XCC、降滤失助剂AADC、封堵剂FSCC,设计出一种无固相抗220℃超高温的钻井液配方。具体加量配比为2%XCC+1%AADC+3%SPNH+1%SMP+3%FSCC+0.5%Na2SO3。并对其进行性能表征,SEM显示其页岩层状微裂缝及碎片得到了明显封堵与修饰,在泥页岩表面形成与微裂缝方向平行的致密树状聚合层;FT-IR结果表明,该抗高温钻井液经过220℃高温老化后性能稳定,具有良好的流变性能和滤失造壁性能,抑制和润滑性能满足钻井需要;能抗10%黏土与5%钻屑的污染,同时对10%KCl+20%Na Cl的盐溶液也有较好的抵抗能力;该钻井液EC50的检测结果大于80 000 mg/L,达到了建议排放标准。最终抗220℃超高温钻井液XCC/AADC/SPNH/SMP/FSCC在涩北1号气田24井得到了成功应用。

目的基因选择在帕金森病基因治疗中的研究进展

基因治疗是目前帕金森病治疗研究的热点,主要集中于两类目的基因:一是能增加多巴胺合成的目的基因,如TH、AADC等;二是应用神经营养因子,尤其是GDNF,抑制神经变性,促进神经纤维再生。

N-乙酰基色胺的异源生物合成和抑藻活性研究

目的 用Streptomyces lividans GX28异源合成N-乙酰基色胺,并研究N-乙酰基色胺的抗赤潮藻活性。方法 前期研究发现Bacillus atrophaeus C89芳香族氨基酸脱羧酶(aromatic l-amino acid decarboxylase, AADC)能将L-色氨酸脱羧成L-色胺。氨基酸多序列比对发现S. lividans GX28基因组中存在使色胺乙酰化的酶。通过克隆、重组将aadc基因转入S. lividans GX28中构建重组菌株,HPLC检测目标产物,NMR鉴定化合物的结构。检测化合物对3种赤潮微藻的毒性。结果 S. lividans GX28中的蛋白WP_015609847.1含有芳烷基胺N-乙酰转移酶(alkyl amine N-acetyltransferase, AANAT)的底物结合位点(P_(64)和F_(188))和催化位点(Y_(168)),推测其为AANAT。宿主的发酵产物中分离得到N-乙酰基色胺。N-乙酰基色胺对墨西哥原甲藻的生长具有较强的抑制作用(IC_(50)=9.56mg/L)。结论 推测aadc基因在链霉菌中异源表达。重组链霉菌中检测到N-乙酰基色胺,并对N-乙酰基色胺的生物合成途径进行推测。N-乙酰基色胺对P. mexicanum的生长具有显著的抑制作用。本研究为抑藻化合物的生物合成研究奠定了基础。

模数转换器AD7705及其接口电路

本文介绍了串行16位的ADC芯片AD7705的基本特点及其Σ-Δ工作原理,还阐述了该芯片与单片机8051的接口方法。

AD7794在高精度低功耗测量装置中的应用

采用AD7794,一种典型的仪用ADC,与超低功耗混合信号处理器MSP430F1611,构成了一个测量计量电路。实际使用表明,该电路具有低功耗、高精度和长期稳定性的特点;实测非线性度不大于10-3量级,能满足大多数工业测量计量的要求。

自由工厂——罗·罗公司的研发创新基石

在航空发动机领域一直处于世界领先地位、保持着强大市场竞争力的罗·罗公司,有一个主要的创新研发团队——自由工厂。该工厂提出过很多创新理念,参与了许多新产品的研发和预研计划,极大地扩展了罗·罗公司在北美地区的影响力。从自由工厂的建立背景、参与的研发项目和取得的创新成就等方面对该研发机构进行了探究,剖析了该机构的工作方法和发展思路等,可为我国航空机构的创新发展提供启示。

‘威代尔’葡萄及其优良芽变果实香气物质2-苯乙醇合成变化研究

以‘威代尔’葡萄及其芽变果实为试材,采用氨基酸分析仪和荧光定量分析,研究了‘威代尔’葡萄及其芽变果实中的苯丙氨酸、苯乙胺、苯乙醛和2-苯乙醇动态含量,以及芳香族氨基酸脱羧酶(AADC)的动态相对表达量,以期明确‘威代尔’葡萄优良芽变果实特征香气2-苯乙醇合成变化,为生产提供优良酿造品种(系)原料。结果表明:‘威代尔’葡萄及其芽变果实中不同生育期苯丙氨酸、苯乙胺、苯乙醛和2-苯乙醇含量均呈现规律性变化,芽变果实中苯丙氨酸、苯乙胺、苯乙醛和2-苯乙醇含量均高于同期‘威代尔’果实。荧光定量结果表明,‘威代尔’及其果实中AADC的表达与2-苯乙醇含量均呈正相关。该研究发现的‘威代尔’葡萄芽变有望成为我国酿造优良葡萄酒重要的品种(系)原料。

芳香族氨基酸脱羧酶转基因治疗帕金森病模型大鼠的研究

目的 观察人类神经元性芳香族氨基酸脱羧酶 (AADC)基因修饰的原代培养SD大鼠骨胳肌细胞脑内移植后对帕金森病模型鼠的治疗效果。 方法 将AADC转基因骨骼肌细胞及空骨骼肌细胞分别移植于实验组与对照组帕金森病模型鼠毁损侧纹状体 ,观察其病理性旋转行为的改善 ,并在该基础上对两组大鼠分别采用一定浓度的L dopa进行治疗 ,观察脑内移植AADC基因后对大鼠旋转行为的进一步改善。采用免疫组化方法确定AADC的表达。 结果 AADC转基因骨骼肌细胞脑内移植后 ,帕金森病模型大鼠旋转行为获得了一定的改善 (P <0 0 5 ) ,并可持续至少 15周 ;外源性L dopa治疗后旋转行为有更明显改善 ,以 11周时最为显著 ,由移植前 (10 0± 0 2 )圈 /min减少至(1 8± 0 8)圈 /min ;免疫组化证实转基因骨骼肌细胞在脑内存活可达 15周 ,以及目的基因在脑内的稳定表达。 结论 脑内植入AADC转基因骨骼肌细胞 ,增加了脑内AADC基因的表达 ,有效地改善了帕金森病大鼠的旋转行为 ,增加了L dopa治疗效果 ,有助于在低剂量L dopa维持的疗效。