AAMDC激活mTOR通路促进肝细胞癌转移

目的:探讨脂肪形成相关Mth938结构域蛋白(AAMDC)在肝细胞癌(HCC)中的表达、临床意义及生物学功能。方法:通过免疫组化、肿瘤数据库分析AAMDC在HCC中的表达丰度、临床病理特点及患者预后的相关性;使用qRT-PCR和Western blot检测正常肝细胞和肝癌细胞中AAMDC的mRNA和蛋白表达;使用Transwell等实验检测AAMDC对HCC细胞迁移和侵袭能力的影响;通过免疫荧光确定AAMDC在HCC细胞的定位;通过Co-IP和高效液相质谱联用绘制AAMDC的相互作用蛋白质网络;采用转录组测序揭示AAMDC调控HCC的细胞通路。结果:AAMDC在HCC组织中高表达,与患者不良的无病生存期相关。AAMDC在HCC细胞中的mRNA和蛋白质表达水平显著高于正常肝细胞。过表达AAMDC促进HCC细胞迁移和侵袭能力,敲低AAMDC则具有相反效应。免疫共沉淀联合高效液相质谱结果显示AAMDC和脂肪酸合成酶FASN相互作用。转录组测序和体外实验显示过表达AAMDC激活mTOR通路。结论:AAMDC在HCC中表达上调,通过与脂肪酸合成酶FASN相互作用,激活mTOR信号通路,进而促进HCC侵袭转移,发挥癌基因功能。

环状RNA AAMDC靶向微小RNA-1197调控非小细胞肺癌细胞A549的凋亡

目的:探讨环状RNA(circRNA)AAMDC调控非小细胞肺癌细胞A549凋亡的分子机制。方法:在非小细胞肺癌细胞A549中过表达circRNA AAMDC后,膜联蛋白染色分析A549细胞的凋亡水平。通过CSCD在线分析circRNA AAMDC的潜在靶标miRNA。过表达circRNA AAMDC后,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测潜在靶标miRNA的水平。敲低潜在靶标miRNA,膜联蛋白染色分析A549细胞的凋亡水平。通过miRDB分析靶标miRNA的潜在靶标mRNA。过表达靶标miRNA后,实时荧光定量PCR检测潜在靶标mRNA的水平。敲低和过表达靶标mRNA,膜联蛋白染色检测A549细胞的凋亡水平。组间差异通过Student’s t检验分析两组单向方差分析。结果:在非小细胞肺癌细胞A549中,过表达circRNA AAMDC后A549细胞的凋亡水平下降(0.31±0.01,0.08±0.02,t=17.820,P<0.05),在A549细胞中miR-1197(1.53±0.51比0.35±0.11,t=3.917,P<0.05)和miR-205-3p的表达下降(1.23±0.24比0.20±0.02,t=7.408,P<0.05)。分别敲低miR-1197和miR-205-3p后,发现敲低miR-1197的A549细胞凋亡水平下降(0.31±0.04比0.12±0.04,t=5.818,P<0.05),而敲低miR-205-3p的A549细胞凋亡水平无明显变化(0.31±0.04比0.33±0.05,t=0.541,P>0.05)。荧光素酶报告系统发现circRNA AAMDC靶向miR-1197(102.00±6.02比16.02±5.49,t=18.280,P<0.05)。过表达miR-1197后,发现TIAF1的mRNA水平下降(2.53±0.57比0.45±0.09,t=6.243,P<0.05)。通过荧光素酶报告系统发现miR-1197靶向TIAF1的3’端非编码区(3’UTR)(101.01±6.02比25.02±5.49,t=16.370,P<0.05)。在非小细胞肺癌细胞A549中,过表达TIAF1后A549细胞的凋亡水平下降(0.31±0.04比0.05±0.01,t=10.920,P<0.05)。敲低TIAF1后A549细胞的凋亡水平上升(0.31±0.01比0.68±0.22,t=2.910,P<0.05)。通过回补实验,发现circRNA AAMDC-miR-1197-TIAF1调控A549的细胞凋亡。结论:circRNA AAMDC靶向miR-1197后导致miR-1197的表达水平降低,而miR-1197靶向TIAF1 mRNA导致TIAF1的蛋白水平降低。因此,circRNA AAMDC促使TIAF1水平升高,降低了非小细胞肺癌A549的凋亡水平。