亚麻木酚素对AAPH诱导的红细胞和肝组织氧化应激的保护作用

探讨了亚麻木酚素的抗氧化活性及机制,测定了亚麻木酚素对DPPH自由基的清除能力,建立AAPH氧化损伤大鼠红细胞和肝组织模型,研究了亚麻木酚素对氧化损伤红细胞溶血率和血红蛋白氧化率的影响,以及其对红细胞和肝组织氧化损伤模型丙二醛(MDA)和抗氧化酶的影响。结果显示:亚麻木酚素对DPPH自由基具有清除作用;亚麻木酚素对红细胞溶血和血红蛋白氧化的保护作用呈现浓度依赖性,与AAPH作用4 h的模型组相比,50μmol/L和100μmol/L亚麻木酚素的保护作用显著提高;在AAPH诱导的红细胞氧化应激模型中,100μmol/L和150μmol/L亚麻木酚素显著降低了AAPH损伤4 h时MDA含量,并显著提高了GSH-Px的酶活,150μmol/L亚麻木酚素显著增加了AAPH损伤2 h和4 h时的SOD和CAT的酶活;在AAPH诱导的肝组织模型中,150μmol/L亚麻木酚素能有效降低不同AAPH损伤时间(1~4 h)所增加的MDA含量,增加AAPH损伤4 h时降低的SOD和CAT酶活。说明亚麻木酚素具有抗氧化活性,能够抑制脂质过氧化,保护红细胞和肝组织内抗氧化酶系的活性。

AAPH体外诱导小鼠睾丸间质细胞氧化应激模型建立与评价

目的:利用偶氮二异丁脒盐酸盐(AAPH)作为刺激源,建立体外小鼠睾丸间质细胞(LCs)氧化应激损伤模型,并进行生理功能评价。方法:实验一将小鼠睾丸间质细胞(TM3)随机分为6组,分别加入0、1、5、10、50和100mmol/L AAPH,分别作用4、8、24 h。测定TM3细胞活性(MTS法)、衰老情况(β-半乳糖苷染色法)、线粒体膜电位(JC-1荧光法)、线粒体DNA拷贝数(QPCR法)。实验二在实验一筛选得出AAPH作用浓度区间(≤10 mmol/L)基础上,将TM3细胞随机分为9组,分别加入0、0.1、0.5、1、2、4、6、8和10 mmol/L AAPH,分别作用24、48、72 h。测定TM3细胞活性、ROS水平、衰老情况。筛选出AAPH诱导TM3细胞氧化应激损伤的最佳作用浓度和作用时间。结果:实验一表明,4 h 50 mmol/L、8 h 10 mmol/L、24 h 5 mmol/L AAPH组TM3细胞存活率均≥50%,AAPH初步浓度应≤10mmol/L,作用时间可≥24 h。实验二表明,24 h 6 mmol/L AAPH组TM3细胞存活率≥70%、ROS阳性率为56.88%、线粒体膜电位正常、mtDNA拷贝数上升、未出现衰老,可以作为诱导TM3细胞氧化损伤模型的适宜条件。结论:AAPH浓度6 mmol/L,作用时间24 h,可作为诱导TM3细胞氧化损伤模型的适宜条件。

羊栖菜褐藻糖胶对AAPH诱导的斑马鱼氧化应激模型的保护作用

目的:探究羊栖菜褐藻糖胶(SFPS)对2,2-偶氮二(2-甲基丙基咪)二盐酸盐(AAPH)诱导氧化应激斑马鱼模型的保护作用。方法:通过检测SFPS对2,2'-联氮-双-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)及1,1-二苯基-2-苦基肼(DPPH)自由基的清除能力,来评价及验证SFPS的体外抗氧化能力,优化AAPH诱导斑马鱼氧化应激模型,并分别以三个表型指标胚胎存活率、卵黄囊大小和心跳速率以及斑马鱼体内细胞死亡率和活性氧(ROS)生成率来评价SFPS的体内抗氧化活性。结果:SFPS主要由75.30%±1.77%的总糖、21.39%±1.07%的硫酸根,1.78%±0.19%的蛋白质以及1.47%±0.02%的多酚组成,对DPPH、ABTS自由基清除的IC50值分别为0.59、0.69 mg/mL。此外,SFPS在50~200μg/mL范围内对斑马鱼胚胎无毒性,并对AAPH诱导引起的斑马鱼氧化损伤起到保护作用,且呈剂量依赖型。其中,在最优浓度200μg/mL显著提高斑马鱼胚胎存活率(100%,P<0.05),显著降低心跳速率(101.37%,P<0.05)和卵黄囊大小(111.80%,P<0.05),对斑马鱼体内细胞死亡和活性氧生成的抑制率最高分别可达70.55%和50.68%。结论:SFPS具有较强的体外抗氧化作用,并对AAPH诱导氧化损伤的斑马鱼表现出优越的体内抗氧化能力及氧化损伤修复能力,这表明SFPS作为天然抗氧化剂在保健食品及化妆品领域具有广泛应用前景。

Effect of AAPH oxidation on digestion characteristics of seed watermelon(Citrullus lanatus var)kernels protein isolates

Seed watermelon kernel is a typical complex food with high fat and protein contents.During storage and processing,it is often affected by various factors to undergo interactions between components,which lead to its quality change.In this experiment,seed watermelon kernels were used as research objects,and the effects of 2-Azobis(2-amidinopropane)dihydrochloride(AAPH)on seed watermelon kernel protein isolates(WMP)were investigated.The structure and digestion characteristics of WMP after oxidation were studied.The results showed that with the increase of AAPH concentration(0.05−5 mol/L),WMP showed obvious aggregation,and its solubility decreased from 6.76 mg/mL to 9.59 mg/mL.The free sulfhydryl content of WMP was 18.24 mmol/g decreased to 11.25 mmol/g,α-helix decreased andβ-sheet decreased in secondary structure,and its disulfide bond increased by 43.06 mmol/g from 39.57 mmol/g,enthalpy(H)and denaturation temperature increased(Td)(P<0.05).By mass spectrometry results of simulated gastric digestion products,it was found that oxidation adversely affected the digestion characteristics of WMP.It can be seen that the lipid oxidation product APPH of seed watermelon kernel can significantly affect the structure and function of the protein extracted from the seed kernel.

22种黄酮、酚酸类化合物和9种中药清除AAPH活性考察

目的:考察中药中黄酮、酚酸类成分清除2,2′-azobis(2-methylpropionamidine)dihydrochloride(AAPH)的活性及构效关系,中药提取物清除AAPH的活性与其酚类成分之间的相关性。方法:以中药中常见的22种黄酮、酚酸类化合物和9种中药为研究对象,以Oxygen Radical Absorbance Capacity(ORAC)法对上述31个样品清除AAPH自由基的活性进行评估,以Folin-Ciocalteu法测定中药中黄酮和酚酸类成分的总量,以高效液相色谱-紫外检测技术对中药的抗氧化活性成分进行定性定量检测。结果:茶叶清除AAPH自由基能力最强,ORAC值为4 786.40μmol.g-1;红花醇提物最弱,ORAC值784.04μmol.g-1。有效成分中,槲皮素清除AAPH自由基能力最强,ORAC值为12.90μmol.g-1;(-)-EGC最弱,ORAC值2.47μmol.g-1。中药清除AAPH自由基能力(Y)与总黄酮和酚酸类成分含量(X)之间存在相关性,Y=1 844.8Ln(X)-3 577.5,r=0.867 5。结论:9种中药清除AAPH自由基的有效成分为黄酮和酚酸类成分,这些化合物清除AAPH自由基的能力与其立体构型、是否糖苷化及酯化等因素有关。将ORAC法与高效液相色谱法相结合,对中药抗氧化活性及有效成分进行研究,是一个切实可行的方法。

梓醇对AAPH损伤条件下施万细胞的影响

目的:观察梓醇对AAPH损伤条件下的大鼠施万细胞96(RSC96)抗凋亡的影响。方法:通过体外培养RSC96,建立AAPH损伤时间浓度梯度模型:0、40、80、120、160、200mmol/L AAPH对RSC96损伤2、3、4h,选取合适的损伤浓度和时间,给予不同梓醇浓度0、5、10、50、100、150μmol/L进行干预,选取最佳的浓度。光镜观察RSC96细胞形态结构,CCK-8检测细胞活性程度。结果:AAPH损伤时间浓度模型显示浓度为120mmol/L,时间为3h为最佳浓度和时间,经不同浓度梓醇干预后,10μmol/L为最佳梓醇干预浓度。与正常对照组比较,模型组CCK-8吸光度OD值显著降低(P<0.05),细胞突起显著缩短。药物干预组和模型组比较,梓醇能显著提高细胞存活率与贴壁细胞数(P<0.05),吸光度OD值显著增加(P<0.05),细胞突起长度显著增长。结论:梓醇能减轻AAPH对RSC96的损伤,增加RSC96的细胞存活率,然其作用机制有待进一步探索。

黄酮对AAPH诱导的HepG2细胞氧化应激的作用

研究部分黄酮对AAPH诱导的HepG2细胞氧化应激的作用。建立AAPH诱导HepG2细胞氧化应激的模型,比较对照组和实验组细胞内的氧化自由基ROS的含量。结果表明,用不同浓度的黄酮处理HepG2细胞1h后,经过相同浓度的氧化剂作用后,细胞内自由基ROS的含量相对空白对照组均发生变化。这些选择性的黄酮对于AAPH诱导的HepG2细胞氧化应激具有促进或者抑制作用,其作用机制可能清除HepG2细胞内ROS以及与细胞内氧化酶和抗氧化酶系统的作用有关。

AAPH诱导的氧化应激对小鼠早期胚胎发育的作用及机制研究

哺乳动物胚胎发育是一个受复杂信号通路严格调控的过程,同时受遗传和环境因素等多种因素影响.由体外培养环境破坏活性氧ROS平衡所引起的氧化应激反应被认为是影响体外胚胎发育的重要因素之一,但活性氧影响胚胎的机制仍有待研究.本研究首先观察了叠氮化合物2,2’-偶氮二(2-脒基丙烷)盐酸盐AAPH[2,2-Azobis(2-Amidinopropane)dihydrochloride]处理后对胚胎发育的影响,检测了胚胎的活性氧水平、线粒体膜电位和细胞凋亡情况,同时检测了合子基因组激活相关基因的表达变化,针对活性氧诱导剂AAPH影响小鼠早期胚胎发育的分子机制进行研究.结果表明,AAPH能够提高小鼠胚胎的活性氧水平,影响胚胎发育率,AAPH的作用呈现剂量依赖性,这种影响是通过降低线粒体的膜电位,进而促发细胞凋亡.同时,抑制合子基因组激活相关基因Zscan4d、eIF-1A、Hspa1b、H2afz的表达.本研究探讨了活性氧影响早期胚胎发育过程的机制,为哺乳动物体外受精培养体系的优化提供了依据.

ROO·氧化对核桃蛋白结构的影响

为研究蛋白质氧化对核桃蛋白结构的影响,以核桃分离蛋白为研究对象,用不同浓度AAPH形成的脂质自由基氧化系统对核桃蛋白进行不同程度的氧化修饰。结果表明,巯基含量和表面疏水指数显著降低;回收率和溶解度均先上升后下降,高浓度氧化会产生不溶性聚集物,蛋白结构被破坏;粒径结果表明,高浓度氧化会使核桃蛋白可溶性物质转换成不溶性聚集物;电位结果表明,适当氧化时蛋白体系最稳定,高浓度氧化使得体系的稳定性开始降低;二级结构结果表明,高浓度氧化时蛋白质肽链断裂,结构被破坏;荧光强度降低,最大吸收波长蓝移,说明烷过氧自由基导致分子聚集。

抗氧化能力指数(ORAC)测定原理及应用

目的介绍抗氧化能力指数测定方法的原理、应用及发展前景。方法被译为抗氧化能力指数的oxygenradicalabsorbancecapacity(ORAC)方法,是目前抗氧化研究领域中为人们所关注的一个评价方法。该方法以偶氮类化合物AAPH作为过氧自由基来源,SodiumFluorescein为荧光指示剂,维生素E水溶性类似物Trolox为定量标准,使用荧光微孔板分析仪进行分析。结果方法的专属性、线性、精密度、准确度及重复性等与其他抗氧化能力分析方法相比具有诸多显著的优点。结论该方法目前已成功应用于生物样品、植物或食品提取物和纯化合物等多种样品的体内外抗氧化能力分析,并有希望在研究氧化与疾病发生关系等方面发挥重要的作用。

几种重组别藻蓝蛋白的抗氧化活性

藻胆蛋白是某些藻类特有的捕光色素蛋白,其中天然别藻蓝蛋白、藻蓝蛋白的抗氧化活性已经被证明。实验以2,2-盐酸脒基丙烷(AAPH)为自由基生成者,应用藏红花素退色反应为检测清除氢过氧自由基的方法,探讨了在大肠杆菌(Escherichia coli)中表达并纯化的带有6×His(6×组氨酸)标签和带有麦芽糖结合蛋白(MBP)标签的重组别藻蓝蛋白及其α、β亚基的抗氧化活性。结果表明,带有His标签的6×Hisα-APC、6×Hisβ-APC和6×His-APC均显示出一定的清除氢过氧自由基的能力,其中6×Hisβ-APC清除氢过氧自由基的IC50值可达到27.2 mg/L,Ka/Kc(氢过氧自由基与重组别藻蓝蛋白和藏红花素反应的速度常数比)达到1.24,大于带有色素基团的天然APC清除氢过氧自由基能力(IC5057.5 mg/L);而带有MBP标签的重组别藻蓝蛋白亚基MBPα-APC和MBPβ-APC和MBP-APC(rAPC)则无明显的清除能力。结果首次证实了脱辅基蛋白具有清除氢过氧自由基能力,因而在天然藻胆蛋白中脱辅基蛋白是清除自由基的贡献者之一,这为进一步研究重组别藻蓝蛋白的抗肿瘤机理提供了线索。

有机非线性光学晶体──甲氧苯亚甲基苯乙酮的研究

本文报道了有机非线性光学材料甲氧苯亚甲基苯乙酮（ＡＡＰｈ）单晶生长条件。采用蒸发法在乙醇溶剂中培养出６ｍｍ×１１ｍｍ×３５ｍｍ大尺寸的单晶。测定了晶体组成、质谱、红外光谱和晶体的透过波段，用１０６４ｎｍ的Ｎｄ￣（３＋）：ＹＡＧ激光照射晶体产生５３２ｎｍ的倍频光，其倍频光强度约是ＫＤＰ的５～６倍。

石榴皮、金银花、牡丹复配物体外抗氧化作用评价

评价复配物体外抗氧化活性。采用DPPH和ABTS自由基清除法评价复配物的自由基清除能力;建立AAPH氧化损伤大鼠红细胞模型,研究复配物对红细胞溶血及对丙二醛(MDA)和抗氧化酶活力的影响。复配物对DPPH和ABTS自由基的清除作用与浓度呈正比,IC_(50)分别为0.065 mg/mL和0.13 mg/mL。复配物对红细胞溶血具有保护作用,并显著降低AAPH损伤4 h时MDA含量,提高谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)酶活。本实验的复配产物具有良好的体外抗氧化活性。

β-谷甾醇对脂质体抗氧化性及膜结构稳定性的影响

以旋转蒸发-超声法制备脂质体,比较了以β-谷甾醇为助膜材料的脂质体(PC/Sito脂质体)、以胆固醇为助膜材料的脂质体(PC/Chol脂质体)和不加助膜材料的脂质体(PC脂质体)在抵抗超声作用、AAPH(2,2-偶氮二(2-甲基丙基咪)二盐酸盐)引发的氧化作用、紫外线引发的氧化作用过程中的区别。结果表明:相比PC脂质体,PC/Sito脂质体和PC/Chol脂质体具有明显抵抗超声作用和推迟由AAPH引发的脂质体氧化反应发生的作用,并能有效维持脂质体在超声和氧化过程中脂质体的稳定性;在维持脂质体稳定性的效果上,β-谷甾醇优于胆固醇;在抵抗紫外线引发的脂质体氧化的过程中,3种脂质体未表现出明显区别。

卵转铁蛋白和乳铁蛋白的氧化稳定性的比较研究

分析比较了卵转铁蛋白（Ovotransferrin,OVT）和乳铁蛋白（Lactoferrin,LF）的氧化稳定性。采用SDS-PAGE、蛋白溶解度、总巯基含量及羰基含量等检测方法,研究了OVT和LF在AAPH（2,2＇-azobis（2-amidinopropane）hydrochloride）作用下的结构变化,以及其对ABTS和DPPH自由基的清除率。SDS-PAGE的结果表明：当AAPH浓度为5 mmol/L时,LF在较高分子量区域开始出现新条带;当AAPH浓度为20 mmol/L时,OVT在较低分子量区域（31-43 ku）才出现新条带;随着AAPH浓度进一步增大,OVT和LF主要条带密度明显降低,经AAPH作用后出现的新条带的密度都逐渐增高。当AAPH（20 mmol/L）作用1 h时,LF即在较高分子量区域出现新条带;在4 h时,OVT才在较低分子量区域出现新条带。当OVT和LF的浓度为2 mg/m L时,AAPH（20 mmol/L）可致OVT和LF同时出现新条带;LF随其浓度增大,在较高分子量区域出现的新条带的密度逐渐降低;OVT在4 mg/m L以上时,在较低分子量区域的新长带已不可见。随着AAPH（20 mmol/L）的作用时间延长（1-8 h）,OVT和LF的溶解度、总巯基含量均逐渐下降,羰基含量均逐渐升高（p〈0.05）。OVT和LF对ABTS和DPPH自由基清除率随着蛋白浓度增大而逐渐增大（p〈0.05）。综上所述,LF较OVT更容易被AAPH氧化导致结构改变。

褐藻多糖类化合物对卵磷脂氧化的抑制作用

褐藻多糖类化合物在乳化体系中对卵磷脂（ＰＣ）氧化具抑制作用，通过测定卵磷脂氢过氧化物（ＰＣ－ＯＯＨ）含量，确定各化合物的抗氧化能力。结果表明：在自由基引发剂（ＡＡＰＨ）作用下，褐藻多糖类化合物（褐藻胶ＡＬＧ、磺化褐藻胶ＳＡＬＧ、甘糖酯ＰＧＭＳ、藻酸双酯钠ＰＳＳ，５０μｍｏｌ／Ｌ）对ＰＣ氧化的抑制作用均比ＶＣ（６０μｍｏｌ／Ｌ）好，但不如ＶＥ（３０μｍｏｌ／Ｌ）的效果好；抑制顺序是：ＶＥ＞ＳＡＬＧ＞ＰＧＭＳ＞ＰＳＳ＞ＡＬＧ＞ＶＣ。

FOXO1质粒稳定转染人骨肉瘤细胞的筛选及意义

目的建立稳定表达FOXO1-GFP的人骨肉瘤U2OS细胞系,并验证U2OS-FOXO1-GFP细胞模型对氧化应激损伤的指示作用。方法将pc DNA3-GFP-FOXO1质粒转染到U2OS细胞中,利用G418和FCM筛选稳定细胞系。40mmol/L AAPH处理U2OS-FOXO1-GFP细胞4h,CCK-8检测细胞活力,荧光显微镜观察FOXO1-GFP的分布情况。结果成功获得U2OS-FOXO1-GFP稳转细胞系。经G418和FCM筛选后,FOXO1-GFP阳性细胞占细胞总数的92%。CCK-8结果显示,AAPH处理后,U2OS-FOXO1-GFP细胞存活率下降至0.55±0.04明显低于对照组(P<0.05)。荧光显微镜观察发现,正常情况下,FOXO1-GFP位于细胞质;AAPH处理后,FOXO1-GFP易位到细胞核。结论 U2OS-FOXO1-GFP细胞系能很好的指示细胞氧化应激损伤,为筛选抗氧化应激药物提供了一种有利工具。

2,2’-偶氮二(2-脒基丙烷)二盐酸盐诱导的氧化应激对猪肠上皮细胞活力及线粒体功能的影响

本试验旨在评估2,2’-偶氮二(2-脒基丙烷)二盐酸盐(AAPH)诱导的氧化应激对猪肠上皮细胞(IPEC⁃J2细胞)活力及线粒体功能的影响,以期建立一种稳定的体外研究肠道氧化应激的模型。以不同浓度(0、30、32、34 mmol/L)AAPH处理IPEC⁃J2细胞24 h后,检测细胞活力、细胞增殖、细胞内总活性氧(ROS)含量、线粒体膜电位、线粒体DNA(mtDNA)拷贝数以及线粒体功能相关基因[线粒体转录因子A(TFAM)、线粒体转录因子B1(TFB1M)、线粒体转录因子B2(TFB2M)、解耦连蛋白1(UCP1)、解耦连蛋白2(UCP2)、解耦连蛋白3(UCP3)]表达的变化。结果表明:AAPH对IPEC⁃J2细胞活力的影响呈剂量及作用时间依赖关系。与0 mmol/L AAPH处理相比,不同浓度(30、32、34 mmol/L)AAPH处理均显著抑制了IPEC⁃J2细胞增殖(P<0.05),细胞活力显著下降(P<0.05),细胞内总ROS含量显著升高(P<0.05),细胞线粒体功能相关基因(TFAM、TFB1M、TFB2M、UCP1、UCP3)表达显著下调(P<0.05),mtDNA拷贝数显著降低(P<0.05)。综上所述,AAPH诱导的氧化应激通过增加IPEC⁃J2细胞内总ROS含量引起细胞线粒体功能损伤,进而导致细胞活力下降,抑制细胞增殖。

利用斑马鱼模型研究琼胶寡糖抗氧化机制

为进一步实现琼胶寡糖的高值化利用,探究琼胶寡糖(Agaro-oligosaccharides,AOS)对2,2-偶氮二(2-甲基丙基咪)二盐酸盐(AAPH)诱导损伤后斑马鱼的抗氧化作用及机制。采用高效液相色谱法对酸法制备的琼胶寡糖组分进行分析。优化建立AAPH诱导的斑马鱼模型,并以斑马鱼胚胎存活率、活性氧生成率和细胞死亡率评价不同浓度琼胶寡糖的抗氧化活性。结果表明,琼胶寡糖主要由琼二糖(51.60%)、琼四糖(28.40%)和琼六糖(14.50%)组成,对斑马鱼胚胎添加琼胶寡糖浓度低于200μg/m L时无致畸、致死毒性;琼胶寡糖(25、50、100μg/m L)对最优AAPH诱导浓度(15 mmol/L)引起的氧化应激损伤斑马鱼模型有保护作用,且呈剂量依赖性。其中最优浓度100μg/m L琼胶寡糖能显著提高斑马鱼胚胎存活率(96.88%,p <0.05),显著降低AAPH引起的斑马鱼体内活性氧生成率(100.53%,p <0.05)和细胞死亡率(101.69%,p <0.05)。本研究通过斑马鱼模型首次揭示了琼胶寡糖可通过清除体内大量活性氧生成和阻止细胞死亡损伤的抗氧化机制实现提高其体内抗氧化活性,为其作为保健功能食品等应用提供了理论基础。

核桃叶多糖对脂质和DNA氧化损伤的作用研究

采用Cu^(2+)/H_(2)O_(2)和2,2′-偶氮二(2-甲基丙基咪)二盐酸盐[2,2′-azobis(2-methylpropionamidine)dihydrochloride,AAPH]两种不同的反应体系,分别诱导SD大鼠肝匀浆和脑匀浆、卵磷脂、亚油酸以及pBR322质粒DNA产生氧化损伤,建立脂质和DNA氧化损伤模型,考察核桃叶多糖对脂质和DNA氧化损伤的作用。通过硫代巴比妥酸法检测脂质过氧化程度;利用琼脂糖凝胶电泳检测pBR322质粒DNA氧化损伤程度。结果表明:核桃叶多糖在一定的浓度范围内对Cu^(2+)/H_(2)O_(2)诱导的脂质和DNA氧化损伤有明显的保护作用;在AAPH诱导体系中,核桃叶多糖能明显抑制脂质和DNA氧化损伤,且呈浓度依赖性。