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Engineered AAV13 variants with enhanced transduction and confined spread
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作者 Neng-Song Luo Yu-Xiang Cai +7 位作者 Zeng-Peng Han Xiao-Kai Sui Wen-Jia Yuan Zi-Lian Zhang Hao-Dong Guo Jie Wang Kun-Zhang Lin Fu-Qiang Xu 《Zoological Research》 SCIE CSCD 2024年第4期781-790,共10页
Precise targeting of specific regions within the central nervous system(CNS)is crucial for both scientific research and gene therapy in the context of brain diseases.Adeno-associated virus 13(AAV13)is known for its re... Precise targeting of specific regions within the central nervous system(CNS)is crucial for both scientific research and gene therapy in the context of brain diseases.Adeno-associated virus 13(AAV13)is known for its restricted diffusion range within the CNS,making it an ideal choice for precise labeling and administration within small brain regions.However,AAV13 mediates relatively low expression of target genes.Here,we introduced specifically engineered modifications to the AAV13 capsid protein to enhance its transduction efficiency.We first constructed AAV13-YF by mutating tyrosine to phenylalanine on the surface of the AAV13 capsid.We then inserted the 7m8 peptide,known to enhance cell transduction,into positions 587/588 and 585/586 of the AAV13 capsid,resulting in two distinct variants named AAV13-587-7m8 and AAV13-585-7m8,respectively.We found that AAV13-YF exhibited superior in vitro infectivity in HEK293T cells compared to AAV13,while AAV13-587-7m8 and AAV13-585-7m8 showed enhanced CNS infection capabilities in C57BL/6 mice,with AAV13-587-7m8 infection retaining a limited spread range.These modified AAV13 variants hold promising potential for applications in gene therapy and neuroscience research. 展开更多
关键词 Adeno-associated virus 13 aav13-YF aav13-587-7m8 aav13-585-7m8 transduction efficiency
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Dual-targeting AAV9P1-mediated neuronal reprogramming in a mouse model of traumatic brain injury 被引量:1
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作者 Jingzhou Liu Xin Xin +8 位作者 Jiejie Sun Yueyue Fan Xun Zhou Wei Gong Meiyan Yang Zhiping Li Yuli Wang Yang Yang Chunsheng Gao 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2024年第3期629-635,共7页
Traumatic brain injury results in neuronal loss and glial scar formation.Replenishing neurons and eliminating the consequences of glial scar formation are essential for treating traumatic brain injury.Neuronal reprogr... Traumatic brain injury results in neuronal loss and glial scar formation.Replenishing neurons and eliminating the consequences of glial scar formation are essential for treating traumatic brain injury.Neuronal reprogramming is a promising strategy to convert glial scars to neural tissue.However,previous studies have reported inconsistent results.In this study,an AAV9P1 vector incorporating an astrocyte-targeting P1 peptide and glial fibrillary acidic protein promoter was used to achieve dual-targeting of astrocytes and the glial scar while minimizing off-target effects.The results demonstrate that AAV9P1 provides high selectivity of astrocytes and reactive astrocytes.Moreover,neuronal reprogramming was induced by downregulating the polypyrimidine tract-binding protein 1 gene via systemic administration of AAV9P1 in a mouse model of traumatic brain injury.In summary,this approach provides an improved gene delivery vehicle to study neuronal programming and evidence of its applications for traumatic brain injury. 展开更多
关键词 aav9P1 ASTROCYTES astrocyte-to-neuron conversion GFAP promoter glial scar induced neurons neuronal reprogramming P1 peptide PTBP1 traumatic brain injury
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合成生物学在AAV基因治疗中的应用
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作者 武鑫 叶海峰 《新兴科学和技术趋势》 2024年第1期0025-0038,共14页
基因治疗在精准医学中崭露头角,对医疗和诊断产生深远影响。腺相关病毒(AAV)基因载体成为基因治 疗中领先的基因传递工具,其作为安全、免疫原性低、血清型多样、具有组织特异性的临床基因治疗载体,在体内具 有长期效果。然而,AAV 递送... 基因治疗在精准医学中崭露头角,对医疗和诊断产生深远影响。腺相关病毒(AAV)基因载体成为基因治 疗中领先的基因传递工具,其作为安全、免疫原性低、血清型多样、具有组织特异性的临床基因治疗载体,在体内具 有长期效果。然而,AAV 递送的基因过量表达可能引起毒性或副作用。因此,新一代合成生物学工程化的 AAV 载体正在崛起,合成生物学能够在细胞转导和基因表达的不同阶段对载体功能进行控制,精准调控目的基因表达。 本文将围绕基因环路的设计思路和方法,AAV 基因治疗的研究进展以及合成生物学在 AAV 基因治疗方面的研究 进展进行介绍。最后对合成生物学驱动的 AAV 基因治疗走向临床治疗的应用前景和挑战进行展望。合成生物学 驱动的 AAV 基因治疗在提供精准和个性化治疗方案方面展现出巨大潜力,有望扩大治疗范围并降低成本,但同时 面临免疫应答、靶向性、生产成本及伦理监管等关键挑战。 展开更多
关键词 合成生物学 腺相关病毒 aav 基因治疗 基因环路
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AAV2-PDE6B restores retinal structure and function in the retinal degeneration 10 mouse model of retinitis pigmentosa by promoting phototransduction and inhibiting apoptosis
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作者 Ruiqi Qiu Mingzhu Yang +5 位作者 Xiuxiu Jin Jingyang Liu Weiping Wang Xiaoli Zhang Jinfeng Han Bo Lei 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS 2025年第8期2408-2419,共12页
Retinitis pigmentosa is a group of inherited diseases that lead to retinal degeneration and photoreceptor cell death.However,there is no effective treatment for retinitis pigmentosa caused by PDE6B mutation.Adeno-asso... Retinitis pigmentosa is a group of inherited diseases that lead to retinal degeneration and photoreceptor cell death.However,there is no effective treatment for retinitis pigmentosa caused by PDE6B mutation.Adeno-associated virus(AAV)-mediated gene therapy is a promising strategy for treating retinitis pigmentosa.The aim of this study was to explore the molecular mechanisms by which AAV2-PDE6B rescues retinal function.To do this,we injected retinal degeneration 10(rd10)mice subretinally with AAV2-PDE6B and assessed the therapeutic effects on retinal function and structure using dark-and light-adapted electroretinogram,optical coherence tomography,and immunofluorescence.Data-independent acquisition-mass spectrometry-based proteomic analysis was conducted to investigate protein expression levels and pathway enrichment,and the results from this analysis were verified by real-time polymerase chain reaction and western blotting.AAV2-PDE6B injection significantly upregulated PDE6βexpression,preserved electroretinogram responses,and preserved outer nuclear layer thickness in rd10 mice.Differentially expressed proteins between wild-type and rd10 mice were closely related to visual perception,and treating rd10 mice with AAV2-PDE6B restored differentially expressed protein expression to levels similar to those seen in wild-type mice.Kyoto Encyclopedia of Genes and Genome analysis showed that the differentially expressed proteins whose expression was most significantly altered by AAV2-PDE6B injection were enriched in phototransduction pathways.Furthermore,the phototransductionrelated proteins Pde6α,Rom1,Rho,Aldh1a1,and Rbp1 exhibited opposite expression patterns in rd10 mice with or without AAV2-PDE6B treatment.Finally,Bax/Bcl-2,p-ERK/ERK,and p-c-Fos/c-Fos expression levels decreased in rd10 mice following AAV2-PDE6B treatment.Our data suggest that AAV2-PDE6B-mediated gene therapy promotes phototransduction and inhibits apoptosis by inhibiting the ERK signaling pathway and upregulating Bcl-2/Bax expression in retinitis pigmentosa. 展开更多
关键词 APOPTOSIS aav2-PDE6B ERK1/2 gene therapy PHOTOTRANSDUCTION PROTEOMICS rd10 retinitis pigmentosa
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眼科疾病AAV载体基因疗法技术发展新动向
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作者 奚静 《工业微生物》 CAS 2024年第1期200-202,共3页
提到“病毒”,相信大家对它的第一印象就是“致病”。文章介绍的腺相关病毒(AAV)非但不“致病”,还能协助“治病”,是基因治疗技术的关键载体。文章对AAV在眼科疾病治疗方面的技术发展动向、应用现状及技术瓶颈进行综述,对比国内外创新... 提到“病毒”,相信大家对它的第一印象就是“致病”。文章介绍的腺相关病毒(AAV)非但不“致病”,还能协助“治病”,是基因治疗技术的关键载体。文章对AAV在眼科疾病治疗方面的技术发展动向、应用现状及技术瓶颈进行综述,对比国内外创新主体的专利布局情况,以期对该技术领域的发展热点和国内外发展差距进行初步了解。 展开更多
关键词 腺相关病毒 aav 眼科疾病 基因疗法
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AAV基因治疗产品的免疫反应评估
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作者 何丹 夏艳 吴小兵 《中国医药导刊》 2024年第3期224-230,共7页
随着生命科学技术的进步,基因治疗因其特异性和精准性等优势已成为新药研发的重点领域。其中,腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)载体是一种应用前景广阔的体内基因治疗载体,也是基因治疗产品载体研究的热点。目前,全球范围内已有7... 随着生命科学技术的进步,基因治疗因其特异性和精准性等优势已成为新药研发的重点领域。其中,腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)载体是一种应用前景广阔的体内基因治疗载体,也是基因治疗产品载体研究的热点。目前,全球范围内已有7款AAV相关的基因治疗产品获批上市,并有多项临床试验正在进行。AAV载体的免疫原性较低,但部分人群体内存在针对AAV的预存免疫,其进入体内后也会诱导机体产生先天免疫反应,随后可能触发针对AAV衣壳和转基因产物的适应性免疫反应,从而影响药物的有效性和安全性。本综述旨在概述AAV基因治疗引起的免疫反应特征,并简要总结在临床前和临床研究中对AAV基因治疗免疫反应的评估,以期为AAV基因治疗药物评价提供参考。 展开更多
关键词 腺相关病毒载体 aav 基因治疗 免疫反应评估
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基因治疗药物AAV5-脂蛋白脂酶变异体临床前神经系统安全性评价
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作者 李芊芊 夏艳 +9 位作者 侯田田 王超 石茜茜 马雪梅 刘子洋 张颖丽 吴小兵 王三龙 刘国庆 耿兴超 《中国药物警戒》 2023年第1期34-39,共6页
目的通过评价AAV5-脂蛋白脂酶变异体(GC304)腺相关病毒注射液对C57BL/6N小鼠中枢神经系统的影响,以确定受试物可能关系到人的安全性问题。方法共使用40只小鼠,雌雄各半,分别单次尾静脉给予溶媒对照、1.0×10^(13)、5×10^(13)、... 目的通过评价AAV5-脂蛋白脂酶变异体(GC304)腺相关病毒注射液对C57BL/6N小鼠中枢神经系统的影响,以确定受试物可能关系到人的安全性问题。方法共使用40只小鼠,雌雄各半,分别单次尾静脉给予溶媒对照、1.0×10^(13)、5×10^(13)、1.5×10^(14)vg·kg^(-1)GC304腺相关病毒注射液,采用功能观测组合试验方法(FOB),分别在给药前和给药后1、4、24、48、96 h,7、14 d观察小鼠运动功能、感觉功能、自主活动等行为,评价受试物对小鼠中枢神经系统的影响,并在给药后第14天检测血清TG、白蛋白和总蛋白改变。结果本研究前期,采用荧光定量PCR方法检测小鼠脑中目的基因(LPL),其结果显示给予1.5×10^(14)vg·kg^(-1)GC3042周后,仍可在脑区内检测到目的基因(LPL)的拷贝数,基于上述数据开展了GC304行为学检测,其结果显示给予GC304后,可引起与药理作用相关的甘油三酯的明显降低,但在给药后2周内,GC304各剂量组动物笼内观察、手持观察、开放场观察、反射评价各指标均未见明显异常。结论GC304可进入脑区,且给药后14 d内,目的基因在脑区内仍有少量分布,但其不会诱导产生神经毒性,为临床用药提供了参考。 展开更多
关键词 基因治疗 aav5-脂蛋白脂酶变异体(GC304) 功能观测组合试验方法 LPL 神经毒性 安全性 小鼠
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基因治疗药物AAV5-脂蛋白脂酶变异体在小鼠体内的毒性研究 被引量:1
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作者 侯田田 马思思 +8 位作者 吴小兵 霍桂桃 潘东升 王超 夏艳 刘艺 周晓冰 刘国庆 耿兴超 《中国药物警戒》 2023年第1期19-26,共8页
目的评估基因治疗药物AAV5-脂蛋白脂酶变异体(GC304)在小鼠体内的毒性。方法(1)急性毒性研究中,40只C57BL/6N小鼠随机分为2组,分别为溶媒组和受试物组,单次尾静脉注射后,进行连续15 d临床症状观察、体重和摄食量测定,于第15天剖检。(2)... 目的评估基因治疗药物AAV5-脂蛋白脂酶变异体(GC304)在小鼠体内的毒性。方法(1)急性毒性研究中,40只C57BL/6N小鼠随机分为2组,分别为溶媒组和受试物组,单次尾静脉注射后,进行连续15 d临床症状观察、体重和摄食量测定,于第15天剖检。(2)长期毒性研究中,440只小鼠随机分为4组,分别设置溶媒组,受试物低剂量组(1×10^(13)vg·kg^(-1))、中剂量组(5×10^(13)vg·kg^(-1))和高剂量组(1.5×10^(14)vg·kg^(-1)),单次尾静脉注射后,对动物体重、摄食量、血液学、血清生化、免疫毒性及免疫原性等毒性指标进行测定。给药后4周和6个月时解剖,动物进行组织病理学检查,并在2、4周,3、6个月采用q PCR的方法检测GC304在动物各个脏器的分布和表达情况。结果(1)急性毒性研究中,动物临床症状、体重、摄食量未见异常,未见与GC304相关的大体病理学改变。(2)长期毒性研究中,动物临床症状、体重、摄食量、细胞因子和T淋巴细胞亚群未见与GC304相关的明显异常。GC304能够降低血浆中甘油三酯以及与抗药抗体相关的白蛋白/球蛋白比值下降,能够诱导抗AAV5结合抗体和中和抗体的产生,并持续至给药后6个月。给予GC304后,未检测到抗脂蛋白脂肪酶(LPL)抗体。组织病理学结果显示,小鼠给药后4周,注射部位出现与药物相关的炎性细胞浸润,至给药后6个月可见恢复。与药物相关的改变为脾脏生发中心活跃伴易染体巨噬细胞增多、腹股沟淋巴结生发中心活跃伴易染体巨噬细胞增多。qPCR检测结果显示,GC304在小鼠外周血及脏器广泛分布和表达,但在肝脏中分布和表达显著高于其他脏器。结论C57BL/6N小鼠单次静脉给予GC304后,主要在肝脏中表达和分布,并且动物耐受性良好,未见明显毒性反应,为该药物进入临床试验提供参考。 展开更多
关键词 基因治疗 aav5-脂蛋白脂酶变异体 毒性研究 小鼠
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基因治疗药物AAV5-脂蛋白脂酶变异体在食蟹猴体内的毒性研究 被引量:1
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作者 侯田田 夏艳 +10 位作者 潘东升 霍桂桃 马雪梅 刘子洋 孙立 刘艺 闫建奥 吴小兵 周晓冰 刘国庆 耿兴超 《中国药物警戒》 2023年第1期27-33,共7页
目的评估基因治疗药物AAV5-脂蛋白脂酶变异体(GC304)在食蟹猴体内的毒性。方法30只食蟹猴,分为溶媒对照组(静脉注射溶媒)、GC304低剂量组(3×10^(13)vg·kg^(-1))和高剂量组(1×10^(14)vg·kg^(-1))。试验期间,所有动... 目的评估基因治疗药物AAV5-脂蛋白脂酶变异体(GC304)在食蟹猴体内的毒性。方法30只食蟹猴,分为溶媒对照组(静脉注射溶媒)、GC304低剂量组(3×10^(13)vg·kg^(-1))和高剂量组(1×10^(14)vg·kg^(-1))。试验期间,所有动物进行临床症状和注射部位观察,每周进行摄食量和体重测定。在给药前后不同时间点进行免疫原性检测(包含抗AAV5结合抗体、中和抗体及抗LPL结合抗体)、血液学、血清生化、血凝和尿生化检查,并同时进行T淋巴细胞分型、细胞因子、心电、血压、体温和眼科检查。给药后4周和6个月解剖,动物进行大体观察、脏器称重和组织病理学检查,同时进行GC304的生物分布研究及表达产物测定,并在不同时间点对血液中目的基因DNA进行检测。结果受试物对食蟹猴临床症状、注射部位、体重、摄食量、眼睛各项指标、体温、血压、心电图、血凝、血清生化、T淋巴细胞分型、尿液、细胞因子、脏器重量等指标未见影响。高剂量组动物给药后4周血小板下降。与给予受试物相关的组织病理学改变为脾脏和腹股沟淋巴结生发中心活跃伴易染体巨噬细胞增多。低剂量和高剂量均可引起食蟹猴产生抗AAV5结合与中和抗体,给药后6个月2种抗体仍维持在较高的水平,但未见明显的剂量-效应关系。给予GC304后,未显著诱导食蟹猴产生抗LPL抗体。qPCR检测结果显示,受试物在食蟹猴外周血及脏器广泛分布和表达,但主要集中在肝脏。结论食蟹猴单次静脉给予GC304,动物耐受性良好,未见明显毒性反应,且主要在肝脏中分布和表达,为该药物进入临床试验提供参考。 展开更多
关键词 基因治疗 aav5-脂蛋白脂酶变异体(GC304) 食蟹猴 毒性研究
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AAV-CRISPR/Cas9介导的血友病A基因治疗研究进展
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作者 房帅 王刚 杨林花 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期1890-1893,共4页
血友病A是一种由凝血因子Ⅷ突变引起的X-连锁隐性出血性疾病。目前主要以外源凝血因子替代治疗为主。随着基因治疗的不断发展,为血友病A的治疗提供了新的研究方向。应用CRISPR-Cas9技术选择合适的靶位点,并通过相应的载体介导外源性B结... 血友病A是一种由凝血因子Ⅷ突变引起的X-连锁隐性出血性疾病。目前主要以外源凝血因子替代治疗为主。随着基因治疗的不断发展,为血友病A的治疗提供了新的研究方向。应用CRISPR-Cas9技术选择合适的靶位点,并通过相应的载体介导外源性B结构域删除的FⅧ变异体基因定向敲入和高效表达,达到治疗血友病A的目的。CRISPR-Cas9技术作为一种新兴的基因编辑工具,具有极大的高效性、安全性和有效性,已广泛用于血友病基因治疗研究。本文就现阶段血友病A基因治疗的载体选择、治疗基因的构建、基因编辑技术及表达靶位的选择进行综述。 展开更多
关键词 血友病A CRISPR-Cas9 基因治疗 aav载体 表达靶位
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Evaluation of trabecular meshwork-specific promoters in vitro and in vivo using scAAV2 vectors expressing C3 transferase 被引量:2
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作者 Jun-Kai Tan Ying Xiao +9 位作者 Guo Liu Long-Xiang Huang Wen-Hao Ma Yan Xia Xi-Zhen Wang Xian-Jun Zhu Su-Ping Cai Xiao-Bing Wu Yun Wang Xu-Yang Liu 《International Journal of Ophthalmology(English edition)》 SCIE CAS 2023年第8期1196-1209,共14页
AIM:To evaluate the potential of two trabecular meshwork(TM)-specific promoters,Chitinase 3-like 1(Ch3L1)and matrix gla protein(MGP),for improving specificity and safety in glaucoma gene therapy based on self-compleme... AIM:To evaluate the potential of two trabecular meshwork(TM)-specific promoters,Chitinase 3-like 1(Ch3L1)and matrix gla protein(MGP),for improving specificity and safety in glaucoma gene therapy based on self-complementary AAV2(scAAV2)vector technologies.METHODS:An scAAV2 vector with C3 transferase(C3)as the reporter gene(scAAV2-C3)was selected.The scAAV2-C3 vectors were driven by Ch3L1(scAAV2-Ch3L1-C3),MGP(scAAV2-MGP-C3),enhanced MGP(scAAV2-eMGP-C3)and cytomegalovirus(scAAV2-CMV-C3),respectively.The cultured primary human TM cells were treated with each vector at different multiplicities of infections.Changes in cell morphology were observed by phase contrast microscopy.Actin stress fibers and Rho GTPases/Rho-associated protein kinase pathway-related molecules were assessed by immunofluorescence staining,real-time quantitative polymerase chain reaction and Western blot.Each vector was injected intracamerally into the one eye of each rat at low and high doses respectively.In vivo green fluorescence was visualized by a Micron III Retinal Imaging Microscope.Intraocular pressure(IOP)was monitored using a rebound tonometer.Ocular responses were evaluated by slit-lamp microscopy.Ocular histopathology analysis was examined by hematoxylin and eosin staining.RESULTS:In TM cell culture studies,the vectormediated C3 expression induced morphologic changes,disruption of actin cytoskeleton and reduction of fibronectin expression in TM cells by inhibiting the Rho GTPases/Rhoassociated protein kinase signaling pathway.At the same dose,these changes were significant in TM cells treated with scAAV2-CMV-C3 or scAAV2-Ch3L1-C3,but not in cells treated with scAAV2-eMGP-C3 or scAAV2-MGP-C3.At lowinjected dose,the IOP was significantly decreased in the scAAV2-Ch3L1-C3-injected eyes but not in scAAV2-MGPC3-injected and scAAV2-eMGP-C3-injected eyes.At highinjected dose,significant IOP reduction was observed in the scAAV2-eMGP-C3-injected eyes but not in scAAV2-MGP-C3-injected eyes.Similar to scAAV2-CMV-C3,scAAV2-Ch3L1-C3 vector showed efficient transduction both in the TM and corneal endothelium.In anterior segment tissues of scAAV2-eMGP-C3-injected eyes,no obvious morphological changes were found except for the TM.Inflammation was absent.CONCLUSION:In scAAV2-transduced TM cells,the promoter-driven efficiency of Ch3L1 is close to that of cytomegalovirus,but obviously higher than that of MGP.In the anterior chamber of rat eye,the transgene expression pattern of scAAV2 vector is presumably affected by MGP promoter,but not by Ch3L1 promoter.These findings would provide a useful reference for improvement of specificity and safety in glaucoma gene therapy using scAAV2 vector. 展开更多
关键词 self-complementary aav2 chitinase 3-like 1 matrix gla protein trabecular meshwork C3 transferase
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眼部症状首发的AAV急性肾损伤1例中西医结合诊治报道并文献复习
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作者 文心妍 杜雨芃 林燕 《中国中西医结合肾病杂志》 2023年第4期360-361,共2页
抗中性粒细胞胞浆抗体(anti-neutrophil cytoplasmic antibodies,ANCA)相关性血管炎(ANCA-associated vasculitis,AAV)是一种由ANCA介导的系统性自身免疫性疾病,临床可分为肉芽肿性多血管炎(granulomatosis with polyangiitis,GPA)、显... 抗中性粒细胞胞浆抗体(anti-neutrophil cytoplasmic antibodies,ANCA)相关性血管炎(ANCA-associated vasculitis,AAV)是一种由ANCA介导的系统性自身免疫性疾病,临床可分为肉芽肿性多血管炎(granulomatosis with polyangiitis,GPA)、显微镜下型多血管炎(microscopic polyangiitis,MPA)和嗜酸性肉芽肿性多血管炎(eosinophilic granulomatosis with polyangiitis,EGPA)[1]。可导致多器官的组织损伤及功能障碍,肺、肾受累最为常见,眼部受累者较少,且以GPA居多[2]。 展开更多
关键词 急性肾损伤 抗中性粒细胞胞浆抗体 眼部症状 中西医结合诊治 aav ANCA 组织损伤 功能障碍
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AAV载体基因药物临床生物样本分析要点及挑战
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作者 余双庆 吴小兵 《中国医药导刊》 2023年第7期669-676,共8页
细胞和基因治疗已进入高速发展期,多种病毒和非病毒载体被应用于细胞和基因治疗领域。其中,腺相关病毒(adeno-associated virus, AAV)载体因其对治疗基因的高效转导率、持久的表达能力和良好的安全性等特点,在遗传病的体内基因治疗领域... 细胞和基因治疗已进入高速发展期,多种病毒和非病毒载体被应用于细胞和基因治疗领域。其中,腺相关病毒(adeno-associated virus, AAV)载体因其对治疗基因的高效转导率、持久的表达能力和良好的安全性等特点,在遗传病的体内基因治疗领域得到广泛应用。随着越来越多的AAV载体基因药物进入临床研究阶段,AAV载体药物的生物分析也越来越受关注,涉及药物代谢动力学(pharmacokinetics, PK)、药效学(pharmacodynamics, PD)、免疫原性、病毒脱落和基因整合监测等方面,目前均缺乏标准化的分析方法、标准品和对照品,在分析方法验证方案、接受标准等方面亦尚无统一规定。囿于AAV载体药物组成和作用机制的复杂性,无论是分析方法、结果解释,还是监管机构的建议和要求等方面均不同于传统小分子和蛋白药物。本研究结合AAV载体基因药物特点、监管机构建议和已发表的临床研究,概述AAV载体基因药物临床生物样本给药前、给药后分析工作要点及面临的挑战,以期为临床上AAV载体基因治疗药物的研究开发提供借鉴和参考。 展开更多
关键词 aav载体 基因治疗 生物分析 临床试验
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光控超小型CRISPR/Cas经AAV载体递送实现对人基因组的高效编辑 被引量:1
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作者 林钰莹 魏劲松 +1 位作者 林鑫华 赵冰 《复旦学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期198-207,216,共11页
CRISRP/Cas系统是目前广为使用的基因编辑工具,而腺相关病毒(AAV)也是目前最安全有效的基因治疗递送载体。为了实现AAV载体介导的CRISRP/Cas基因编辑,各种可装载于AAV载体的基因编辑工具也先后被报道。尽管如此,AAV载体介导的时空特异... CRISRP/Cas系统是目前广为使用的基因编辑工具,而腺相关病毒(AAV)也是目前最安全有效的基因治疗递送载体。为了实现AAV载体介导的CRISRP/Cas基因编辑,各种可装载于AAV载体的基因编辑工具也先后被报道。尽管如此,AAV载体介导的时空特异性基因编辑仍较难实现。为此我们结合光遗传学,将蓝光诱导表达系统、超小型CRISPR/Un1Cas12f1基因编辑系统以及AAV载体递送系统进行有机整合,开发出光控诱导表达的超小型基因编辑系统(AAV-PA-Cas12f1),并将其通过AAV递送至人源细胞HEK293T中。在无光条件下其表达背景极低,而经过蓝光诱导实现了对人基因组的高效基因编辑:以Intergene2为例,利用PCR产物-TA克隆结合单克隆测序分析得到该系统的实际编辑效率高达56%,编辑类型为碱基缺失或兼具碱基缺失与插入。此工具的开发为实现体内精准基因编辑奠定了基础,为解析更多生物学机制及探索疾病治疗策略提供了技术平台。 展开更多
关键词 腺相关病毒 Un1Cas12f1 光控蛋白 时空特异性基因编辑 精准基因治疗
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rAAV-hBMP2-GFP载体感染滴度测定方法的建立
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作者 王敏 程政 +2 位作者 姚天华 代泉 郭秀全 《临床医学工程》 2010年第10期12-14,共3页
目的建立携骨形态发生蛋白2基因的重组腺相关病毒载体(rAAV-hBMP2-GFP)感染滴度测定的方法,并制备高滴度的rAAV-hBMP2-GFP病毒液,为进一步实验hBMP2诱导大鼠牙槽骨骨缺损修复的基因治疗提供有利的工具。方法通过分析腺相关病毒-HT1080(A... 目的建立携骨形态发生蛋白2基因的重组腺相关病毒载体(rAAV-hBMP2-GFP)感染滴度测定的方法,并制备高滴度的rAAV-hBMP2-GFP病毒液,为进一步实验hBMP2诱导大鼠牙槽骨骨缺损修复的基因治疗提供有利的工具。方法通过分析腺相关病毒-HT1080(AAV-HT1080)细胞接种量、培养时间及病毒吸附时间等参数,建立应用荧光计数法测定rAAV-hBMP2-GFP病毒感染滴度的方法,并分析其精密性及检测病毒的稳定性。结果 AAV-HT1080细胞的最佳接种浓度、培养时间及病毒吸附时间分别为3×105个/孔、24h及48h,在此条件下收获的病毒液的感染滴度最高可达3.82×1011/ml,所建立的荧光计数检测方法精密性较好。制备的病毒液的平均感染滴度为3.60×1011/ml,4℃和37℃保存7d及反复冻融5次,稳定性良好。结论建立了rAAV-hBMP2-GFP感染滴度的测定方法,并制备了高滴度及滴度稳定的rAAV-hBMP2-GFP病毒液。 展开更多
关键词 raav-hBMP2-GFP aav-HT1080细胞 感染滴度 测定
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生物质谱技术在腺相关病毒(AAV)载体制剂质量控制中的应用
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作者 李孟效 李惠琳 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期682-694,共13页
腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)是一种基因治疗中常用的病毒载体。由于其安全性较高且能够靶向多种细胞,在临床前和临床研究中得到了较多的应用。不过在设计和生产的过程中,AAV载体有着诸多会影响其安全性和疗效的关键质量属... 腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)是一种基因治疗中常用的病毒载体。由于其安全性较高且能够靶向多种细胞,在临床前和临床研究中得到了较多的应用。不过在设计和生产的过程中,AAV载体有着诸多会影响其安全性和疗效的关键质量属性。生物质谱技术的发展和应用为生物大分子的研究提供了一个便捷的平台,尤其是在蛋白质序列、结构和相互作用方面。对于AAV载体而言,质谱技术可以实现衣壳蛋白比率、翻译后修饰、血清型、空衣壳比率的测定或表征,从而协助对AAV载体的质量控制。与现有方法相比,质谱技术具有样品需求量少、分析快速灵敏、适用于完整AAV载体的分析和质量分辨率高的优点,并且可以区分空衣壳、满衣壳和部分包封的衣壳。未来,通过将更加高效的蛋白质分离技术与质谱技术联用、开发新的信息处理软件平台和新的质谱检测方法,质谱技术有望在AAV载体的设计和生产中发挥更加重要的作用。 展开更多
关键词 腺相关病毒 质谱 质量控制 非变性质谱 电荷检测质谱
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AAV载体介导的视网膜基因转移实验研究 被引量:10
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作者 单清 张杰 +4 位作者 任华 王登龙 伊洪涛 吴小兵 钱焕文 《眼科新进展》 CAS 2001年第4期225-227,共3页
目的 以绿色荧光蛋白 (green fluorescent protein,GFP)作为标记基因 ,观察腺相关病毒 (AAV )载体介导视网膜基因转移作用 ,为视网膜疾病的基因治疗打下基础。方法 制备重组腺相关病毒 r AAV- gfp;将纯化的 r AAV- gfp病毒 10 μL (10... 目的 以绿色荧光蛋白 (green fluorescent protein,GFP)作为标记基因 ,观察腺相关病毒 (AAV )载体介导视网膜基因转移作用 ,为视网膜疾病的基因治疗打下基础。方法 制备重组腺相关病毒 r AAV- gfp;将纯化的 r AAV- gfp病毒 10 μL (10× 10 1 2 TU· L- 1 )分别注射于青紫兰灰兔及日本大耳白兔视网膜下 ,于一定时间内取眼球或用眼底照相机进行观察。结果 注射 r AAV- gfp后未见兔眼术后细菌感染及明显免疫反应 ,在荧光显微镜下观察 GFP表达情况 ,3周时可见明显的绿色荧光分布于 RPE细胞层 ,5、6周荧光强度比3周增强 ,荧光范围也有所扩大。直至 10周荧光范围进一步扩大 ,强度更强。眼底照相机观察显示 ,最早 4周观察到眼底 GFP表达 ,至 7个月 (观察仍在继续 )仍然维持在高水平。结论 视网膜下注射 r AAV- gfp病毒可在 RPE细胞内稳定表达报告基因 gfp;AAV载体可望用于视网膜疾病的基因治疗。 展开更多
关键词 视网膜 基因转移 腺相关病毒载体 绿色荧光蛋白 aav GFP
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阿尔茨海默病的AAV基因治疗研究进展
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作者 戴中华 张丽娜 +1 位作者 章嫣 吴小兵 《中国医药导刊》 2023年第7期677-686,共10页
阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease, AD)是导致痴呆最主要的疾病。据估计,2020年全球AD及相关痴呆患者有约5427万,其中超过1/4患者在我国。随着全球人口老龄化加快,AD患者数目快速增加,AD在给患者带来沉重疾病痛苦的同时,也将给家庭和... 阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease, AD)是导致痴呆最主要的疾病。据估计,2020年全球AD及相关痴呆患者有约5427万,其中超过1/4患者在我国。随着全球人口老龄化加快,AD患者数目快速增加,AD在给患者带来沉重疾病痛苦的同时,也将给家庭和社会带来沉重经济压力。当前,治疗AD的药物还只是着眼于缓解症状,并不影响疾病的进程。虽然最近临床试验数据表明,多个β-淀粉样蛋白(amyloid-beta, Aβ)抗体药物可以改善病理和减缓疾病进程,但其临床价值一直饱受争议。所以,研发出新的有效的AD治疗药物迫在眉睫。传统AD药物的研发失败率高达99.6%,使得科学家们不得不积极探寻新的AD疗法。腺相关病毒(adeno-associated virus, AAV)基因治疗是一种新兴的、强有力的治疗手段,在治疗其他神经退行性相关疾病上已取得较大成功,提示其在AD的治疗上极有可能取得突破。本研究在梳理当前国内外AD发病现状和风险因素的基础上,明确提出目前亟待新的AD治疗药物和治疗方法;通过介绍AAV基因治疗AD的优势和潜能,并基于Aβ级联反应假说、tau蛋白假说、神经营养因子假说、APOE假说、神经炎症假说,自噬-溶酶体障碍假说、线粒体功能障碍假说等各种假说机制,综述了AD的AAV基因治疗临床前和临床研究进展,并提出AAV基因治疗虽尚处早期阶段,其发展充满挑战,但终将可能为AD的治疗带来新希望和新突破。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 Β-淀粉样蛋白 神经退行性疾病 基因治疗 腺相关病毒
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人体肝脏靶向性新型AAV血清型载体的研发 被引量:1
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作者 宁秦洁 陈颖 +5 位作者 闫梦迪 胡泽岚 吴侠 杜增民 郑静 肖啸 《华东理工大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期404-410,共7页
通过DNA shuffling技术选择8种AAV(AAV1~AAV4,AAV6~AAV9)cap基因序列进行cap基因的DNA改组,获得AAV突变体基因库。将突变体基因库插入到含有AAV2Rep基因和ITR序列的质粒中,最终获得了大于107的独立克隆(具有全套AAV基因组序列)。通过转... 通过DNA shuffling技术选择8种AAV(AAV1~AAV4,AAV6~AAV9)cap基因序列进行cap基因的DNA改组,获得AAV突变体基因库。将突变体基因库插入到含有AAV2Rep基因和ITR序列的质粒中,最终获得了大于107的独立克隆(具有全套AAV基因组序列)。通过转化实验获得随机感染质粒文库(pIRC)。将所得质粒经过共转染HEK293细胞,72 h后收集纯化病毒,获得感染性AAV文库。利用野生型5型腺病毒(Wild Type Ad5,wt Ad5)辅助感染人肝癌Hep G2细胞,进行筛选后,最终在肝细胞中富集获得1种新型AAV血清载体AAVXL12。通过将携带GFP基因的不同AAV血清型载体感染Hep G2细胞,观察到不同程度的绿色荧光的表达,最终显示筛选到的AAV血清型载体AAVXL12介导的GFP基因表达效果最好,荧光强度最强。 展开更多
关键词 腺相关病毒(aav) 基因治疗 新型aav血清型 DNA shuffling 靶向 肝脏细胞
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腺相关病毒(AAV)载体研究进展 被引量:10
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作者 赵丽琴 席斌 彭华松 《生物技术进展》 2012年第2期110-115,共6页
基因治疗的载体在基因治疗过程中起着至关重要的作用,其中腺相关病毒(AAV)载体具有低致病性、对宿主免疫原性弱、长期稳定表达、广泛的细胞和组织亲嗜性等优点,是目前发展最热,也是最有希望的载体之一,已被广泛应用于临床研究。本文综... 基因治疗的载体在基因治疗过程中起着至关重要的作用,其中腺相关病毒(AAV)载体具有低致病性、对宿主免疫原性弱、长期稳定表达、广泛的细胞和组织亲嗜性等优点,是目前发展最热,也是最有希望的载体之一,已被广泛应用于临床研究。本文综述了腺相关病毒载体的研究进展,包括AAV的血清型、新型载体的开发、生产工艺及其放大及临床研究及讨论了AAV载体还存在的问题及可能的解决方案。随着腺相关病毒载体研究的进展,新的载体系统必将在基因治疗中发挥更重要的作用。 展开更多
关键词 腺相关病毒 aav 载体 基因治疗 血清型
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