AAV2-BF转染小鼠对MLD内毒素攻击的抵抗作用

目的:通过观测BPI700-Fcγ1700嵌和基因导入小鼠,对最小致死量(MLD)内毒素攻击的抵抗作用,探讨抗感染基因治疗在临床感染高危人群中应用的可能性。方法:采用Dotblot、Westernblot、免疫组化、改良ELISA方法和内毒素/细胞因子检测试剂盒,检测目的基因产物在CHO细胞和小鼠骨骼肌细胞中的表达及血清中内毒素和促炎细胞因子含量变化。结果:(1)目的基因产物在CHO细胞和小鼠骨骼肌细胞中成功表达,在AAV2-BF导入组小鼠血清中可检测到目的基因产物;(2)在最小致死量内毒素攻击后,AAV2-BF导入组小鼠血清中内毒素和促炎细胞因子含量显著低于对照组小鼠;其存活率(40%)明显高于对照组小鼠(2·5%)。结论:AAV2-BF导入组小鼠对MLD内毒素攻击具有抵抗作用,提示抗感染基因治疗对临床G-菌败血症及其引发的内毒素中毒性休克具有较好防治作用。

rAAV2-BF增强两品系小鼠抗致死剂量细菌感染

目的通过观测rAAV2-BPI1-199-Fcγ1重组病毒(rAAV-BF)感染对不同品系小鼠的抗细菌感染保护作用。方法采用dot blot、Western blot、免疫组化、改良ELISA方法和内毒素检测试剂盒,检测重组BPI1-199-Fcγ1(rBF)蛋白在CHO细胞和小鼠骨骼肌细胞中的表达及血清中内毒素含量的变化;建立最小致死量(MLD)E.coli致死模型,检测rBF基因转染小鼠对MLDE.coli感染的抵抗作用。结果(1)rBF蛋白在CHO细胞和两品系小鼠骨骼肌细胞中成功表达,血清中rBF蛋白具有中和内毒素和杀伤E.coli的作用;(2)在MLDE.coli腹腔感染后,两品系小鼠rAAV-BF感染组存活率均显著高于空载体对照组小鼠;基因转染组小鼠血清内毒素含量明显低于空载体对照组;rAAV-BF感染与头孢呋辛钠联合应用具有协同抗菌作用,两品系小鼠存活率明显高于单纯rAAV-BF感染组。结论rAAV-BF感染组小鼠对致死性E.coli感染具有抵抗作用。

AAV2-BPI700-Fcγ1700重组病毒转染小鼠结肠上皮离子转运的改变机理

目的 应用Ⅱ型腺相关病毒-杀菌渗透增强蛋白嵌合基因（AAV2-BPI700-Fcγl700）转染的小鼠,给予感染最小致死剂量的大肠杆菌后,观察和探究结肠上皮电阻和离子转运的变化和机制.方法 应用腺相关病毒嵌合基因转染、短路电流记录、ELISA等方法测定小鼠结肠粘膜的离子转运信息.结果 基因转染小鼠与对照组相比,结肠上皮基础电阻和短路电流明显增加,在上皮的顶膜侧加入钠离子通道阻断剂阿米洛利后,则可以明显抑制增加的电流;应用上皮离子促分泌物5-HT后,可以明显增加结肠上皮的短路电流,这种短路电流可以被Cl-通道阻断剂DPC、Na＋-K＋-2Cl-共转运体抑制剂bumetanide明显抑制;并且5-HT作用结肠粘膜后,上皮cAMP的含量明显高于对照组.应用5-HT4受体拮抗剂GRI 13808加入到粘膜组织的基底侧进行预处理,可以明显抑制基因转染组5-HT诱导的cAMP增加,基因转染小鼠5-HT4受体免疫阳性明显高于对照组.结论 5-HT通过5-HT4受体诱导基因转染小鼠cAMP依赖性的Cl-离子转运增加,从而促进了肠道排毒反应.