ABO血型基因及亚型真核表达载体的构建及鉴定

目的构建人ABO血型A101、B101及其CisAB01、Ae105、B（A）04和Bw03亚型真核表达载体，为研究ABO血型基因及砸型基因的功能奠定基础。方法从已知ABO基因分型的标本中（A101，B101）提取总RNA，将其逆转录合成cDNA，经特异性引物扩增目的基因片段，将其定向连接到pcDNA3．1（＋）真核表达载体；采用定点突变PCR的方法构建CisAB01、Ael05、B（A）04和Bw03亚型真核表达载体，通过测序鉴定其序列正确。将ABO血型A101、B101及其CisAB01、Ael05、B（A）04和Bw03亚型真核表达载体分别转染Hela细胞系，通过免疫荧光和Western印迹检测各ABO基因在细胞中的表达。结果测序结果显示扩增到的A101及B101cDNA以正确序列和方式插入载体，CisAB01、Ael05、B（A）04和Bw03亚型真核表达载体的测序结果显示相应位点均成功突变；免疫荧光和Western印迹结果显示A101、B101及其CisAB0l、Ael05、B（A）04和Bw03亚型在Hela细胞中均有表达。结论成功构建了ABO血型基因及亚型基因真核表达载体，体外转染Hela细胞成功表达糖基转移酶，为后续研究奠定了基础。