拟南芥钙依赖蛋白激酶CPK11与ABA响应元件结合因子ABF4相互作用的研究

为研究钙依赖蛋白激酶CPK11参与ABA信号通路的方式,本文利用体外酵母双杂实验(Y2H)以及体内双分子荧光互补实验(BiFC)分析CPK11与ABA响应元件结合因子(ABA-responsive element binding factors, ABFs)ABF4之间的关系.酵母双杂交实验表明CPK11与ABF4存在体外相互作用,双分子荧光互补实验表明CPK11与ABF4存在体内相互作用.以上实验共同证明CPK11与ABF4存在直接相互作用.作为CPK11的同源蛋白CPK4与转录因子ABF4在植物体内也存在相互作用.以上实验表明CPK11及其同源蛋白CPK4可能通过与转录因子ABF4相互作用从而参与钙离子介导的ABA信号通路.

拟南芥bZIP1转录因子通过与ABRE元件结合调节ABA信号传导

ABA作为一种重要的植物激素和生长调节剂,介导了高等植物在营养生长阶段对各种外界环境的响应和适应。bZIP类转录因子可以通过ABA依赖途径和ABA非依赖途径调节植物的生长发育和对非生物胁迫的耐性。本研究通过AtbZIP1T-DNA插入突变的拟南芥植株ko-1(SALK_059343)和ko-2(SALK_069489C)在ABA处理后的表型实验,验证了AtbZIP1参与ABA依赖的信号传导通路。采用"三引物法",分别在DNA水平和RNA水平通过PCR和RT-PCR验证了AtbZIP1基因在拟南芥突变体中的沉默效果。定量分析数据表明,在种子萌发阶段,经过0.6μmolL–1ABA和0.8μmolL–1ABA处理后,AtbZIP1缺失突变体拟南芥植株萌发率和叶片展开/绿色率比野生型植株高,在幼苗生长阶段,经过50μmolL–1ABA处理后,AtbZIP1缺失突变体拟南芥植株根长比野生型植株长。为了确定AtbZIP1基因参与ABA信号传导是否依赖于ABRE元件,在大肠杆菌中表达了AtbZIP1HIS6融合蛋白,并设计了核心序列为CACGTG的ABRE元件。凝胶阻滞电泳结果表明AtbZIP1融合蛋白可以与ABRE元件特异性结合。半定量RT-PCR分析表明,AtbZIP1基因的缺失改变了下游的ABA响应基因的表达。该结果表明,AtbZIP1可以通过与ABRE元件结合调节植物对ABA处理的敏感性和下游ABA响应基因的表达,从而参与植物的ABA信号传导通路。

细胞质多聚腺苷酸化元件结合蛋白4、缺氧诱导因子-1在脑胶质瘤中的表达及对患者术后复发的预测作用

目的探讨细胞质多聚腺苷酸化元件结合蛋白4(CPEB4)、缺氧诱导因子-1(HIF-1)在脑胶质瘤中的表达及对患者术后复发的预测作用。方法收集149例脑胶质瘤患者的肿瘤组织及癌旁正常组织。比较肿瘤组织及癌旁正常组织中CPEB4、HIF-1的表达情况,术后对患者随访1年,记录复发情况,比较复发与未复发患者脑胶质瘤组织中CPEB4、HIF-1的表达情况,并分析脑胶质瘤患者术后复发的影响因素。结果脑胶质瘤组织中CPEB4、HIF-1阳性表达率均明显高于癌旁正常组织,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。术后复发患者脑胶质瘤组织中CPEB4、HIF-1阳性表达率均高于未复发患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。Logistic回归分析显示,肿瘤直径≥5 cm、CPEB4阳性表达、HIF-1阳性表达均为脑胶质瘤患者术后复发的独立危险因素(P﹤0.05)。结论CPEB4、HIF-1在脑胶质瘤组织中阳性表达率均明显增高,是脑胶质瘤患者术后复发的危险因素,临床可通过检测两种指标为脑胶质瘤患者的预后评估提供参考。

番茄2个ERF-B1亚族转录因子基因的克隆及其对生物和非生物胁迫响应

为进一步研究番茄ERF转录因子调控植物抗逆的分子机理,本研究以番茄浙杂-301为试验材料,分别克隆获得2个乙烯反应元件结合蛋白基因SlERF83和SlERF109,并对其进行序列及表达分析。结果表明,番茄SlERF83和SlERF109基因分别含有678 bp和669 bp的开放阅读框,编码225和222个氨基酸,各含有1个保守的AP2结构域,属于亲水性蛋白。进化分析表明,这2个ERF转录因子均属于AP2/ERF家族中ERF亚族的B1组。SlERF83和SlERF109三级结构都含有1个α-螺旋和3个β-折叠。酵母单杂交及β-半乳糖苷酶活性测定结果证明SlERF83转录因子可以与GCC-box结合。番茄2个ERF蛋白启动子含有多种逆境相关的顺式作用元件。采用荧光定量PCR检测SlERF83和SlERF109在非生物和生物胁迫下的表达,结果表明,高盐和干旱胁迫下,SlERF83和SlERF109基因的表达均被抑制;水杨酸处理能够诱导SlERF83和SlERF109基因的表达;茉莉酸甲酯处理下SlERF83表达水平提高,SlERF109表达量降低;番茄黄化曲叶病毒侵染下,SlERF83和SlERF109基因的表达均被抑制。SlERF83和SlERF109转录因子可能参与了番茄对生物及非生物胁迫的响应过程。本研究结果为进一步深入开展ERF转录因子调控番茄抗逆分子机制研究提供了一定的理论依据。

拟南芥钙依赖蛋白激酶CPK12与bZIP转录因子ABF4相互作用研究

为分析拟南芥钙依赖蛋白激酶CPK12在不同物种中序列的相似性,并研究CPK12与ABA信号通路的关系,本研究对不同物种CPK12氨基酸序列进行比较,以及通过体内和体外实验验证CPK12与ABF4之间是否存在直接相互作用关系.通过对拟南芥(Arabidopsis thaliana),油菜(Brassica napus)与荠菜(Capsella rubella)等物种的同源氨基酸序列进行比较,获得了它们的亲缘关系.利用酵母双杂交系统,将CPK12与ABF4共转酵母后,在四缺型培养基上能够正常生长,这说明CPK12与ABF4在体外有相互作用.同时,利用双分子荧光互补实验,CPK12与ABF4共转烟草后能够在激发光下观察到烟草细胞核中出现明显荧光信号,这说明CPK12与ABF4在植物体内也存在相互作用,为CPK12参与ABA信号途径提供了直接证据.

有氧运动及其联合饮食干预影响非酒精性脂肪肝患者血浆SREBP-1c、RBP4水平的研究

目的:探讨有氧运动、饮食控制对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患者血清SREBP-1c、RBP4水平的影响。方法:将NAFLD患者共53例随机分为对照组(C)、运动组(E)、饮食控制组(D)和运动+饮食控制组(ED);另有12例健康自愿者组成健康对照组(N)。E组运动处方干预,D组饮食干预,ED组运动联合饮食干预。实验前后分别检测身体形态(BMI;WHR)和血液生化指标(SREBP-1c;RBP4;TNF-a等)。结果:1WHR指数实验后E组、DE组较实验前显著下降(P<0.05);实验后DE组较C、E组显著下降(P<0.05)。2血浆TG及LDL/HDL实验后E组、DE组较实验前显著下降(P<0.05);实验后DE组血浆TG、E组和DE组LDL/HDL较C组显著降低(P<0.05)。3血浆FINS水平及HOMA-IR实验后E、DE组较实验前显著下降(P<0.05);实验后HOMA-IR指数E组和DE组较C组显著下降(P<0.05)。4E组RBP4、D组SREBP-1c和DE组TNF-α、RBP4、SREBP-1c血浆水平实验后较实验前显著下降(P<0.05);实验后E组SREBP-1c水平和DE组血浆RBP4、SREBP-1c水平较C组显著降低(P<0.05)。结论:116周有氧运动、饮食控制以及有氧运动联合饮食控制,NAFLD患者血浆SREBP-1c、RBP4、TNF-α水平分别呈不同程度降低,IR缓解,脂质代谢紊乱改善,有利于NAFLD转归。2有氧运动联合饮食控制对NAFLD的干预效果更佳。

内质网应激通路相关蛋白ATF4及CHOP在主动脉夹层中的表达以及意义

目的探讨主动脉夹层(AD)患者环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)和活性转录因子4(ATF4)的表达及其意义。方法选取2017年3月至2018年4月于武汉大学人民医院确诊为StanfordⅠ型夹层并行胸主动脉夹层全弓置换患者为AD组(n=13),另选取5例于武汉大学人民医院接受心脏移植的患者作为Donor组(此5例患者均无大血管疾病,其在心脏移植术中取下的主动脉血管可作为相对正常主动脉血管组织)。通过Masson染色、间苯二酚染色研究两组患者主动脉血管结构变化,通过TUNEL染色明确主动脉夹层发病后平滑肌细胞凋亡情况;通过RT-PCR及Western-blot分别在mRNA水平及蛋白水平检测ATF4及CHOP的变化情况。在动物实验方面,20只SD大鼠随机分为两组:Control组(n=10)及AD组(n=10)。Control组给予大鼠维持饲料,AD组给予含0.3%的β-异氨基丙腈酯(BAPN)的大鼠维持饲料进行主动脉夹层动物模型构建。动物模型构建成功后,取两组大鼠主动脉组织做石蜡包埋,标本切片后处理步骤及检测指标同人体标本。结果在人体标本中,Masson染色及间苯二酚染色发现,AD组患者主动脉血管标本胶原沉积较Donor组明显增多,弹力纤维断裂程度也更加严重;TUNEL凋亡染色发现,AD组患者主动脉血管组织较Donor组正常血管组织细胞凋亡明显增多,差异有统计学意义(P<0.01);RT-PCR及Western-blot实验发现,AD组患者主动脉血管ATF4、CHOP的表达在RNA水平及蛋白水平均较Donor组正常主动脉血管明显增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。在动物实验中,Masson染色发现,AD组大鼠主动脉血管较Control组胶原沉积明显增多;间苯二酚染色发现,AD组大鼠主动脉血管较Control组弹力纤维断裂程度明显加重,Control组基本无弹力纤维断裂;TUNEL凋亡染色发现,AD组大鼠主动脉血管较Control组细胞凋亡明显增多,差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR及Western-blot实验亦发现,AD组大鼠主动脉血管ATF4、CHOP的表达在RNA水平及蛋白水平均较Control组明显增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论CHOP和ATF4与内质网应激关系密切,CHOP及ATF4在人主动脉夹层标本及主动脉夹层动物模型标本中均显著升高,说明在主动脉夹层中内质网应激水平较高,这或许是主动脉血管平滑肌细胞发生凋亡的重要原因之一,进而在一定程度上参与主动脉夹层的发生发展。

转录因子CREB3L1在甲状腺癌组织中的表达及生物学意义

目的探讨转录因子环腺苷酸响应元件结合蛋白3-样1(CREB3L1)在甲状腺癌(THCA)组织中的表达及其临床意义。方法从GEO、ArrayExpress、SRA、TCGA等数据库检索下载CREB3L1 mRNA在THCA组织中的表达谱,应用Wilcoxon非参数检验检测CREB3L1 mRNA在THCA组织和正常甲状腺组织中表达水平的差异;计算CREB3L1表达值的标准化均数差(SMD)及汇总受试者工作特征(SROC)曲线下面积等指标,综合评估CREB3L1 mRNA在THCA组织中的表达水平及其对THCA的区分能力。用上述数据集批量获取CREB3L1在THCA组织中的相关过表达基因,应用CistromeDB预测CREB3L1转录靶基因,用clusterProfiler对CREB3L1在THCA组织中的相关过表达基因、CREB3L1转录靶标交集基因进行基因本体和京都基因与基因组百科全书功能注释。在THPA数据库中查看CREB3L1蛋白在THCA组织中的表达水平。结果与正常甲状腺组织比较,THCA组织中CREB3L1蛋白表达水平呈上调趋势。基于基因芯片、高通量测序数据集共纳入1175例THCA组织和791例正常甲状腺组织样本。CREB3L1 mRNA在THCA组织中呈高表达[SMD=0.11,95%可信区间(95%CI):0.01~0.20],集成SROC曲线下面积为0.62(95%CI:0.57~0.66)。CREB3L1蛋白在THCA组织中高表达患者5年生存率比低表达者低。交叉基因主要富集在细胞周期信号通路上,主要生物学功能为细胞器裂解。细胞分裂周期6蛋白(CDC6)与CREB3L1呈正相关。结论CREB3L1在THCA组织中高表达不利于患者的预后,有可能通过靶向基因CDC6参与了THCA的发生、发展。

陆地棉GhERF8基因的克隆与表达分析

乙烯响应元件结合因子(Ethylene-responsive element-binding factor,ERF)是植物中最大的转录因子家族之一。本研究以棉花叶片cDNA文库为基础,从陆地棉中棉所10号中克隆得到一个新的ERF基因,命名为GhERF8(GenBank:JN656957)。该基因编码265个氨基酸,蛋白序列中包含一个AP2保守结构域。采用荧光定量PCR(RT-PCR)的方法,对GhERF8基因在棉株不同生育时期叶片和不同组织中的表达水平进行了定量分析。结果表明,GhERF8基因在各组织中均有表达,但在成熟后期的叶片中表达量最高。GhERF8表达量与叶片衰老过程中叶绿素含量出现相反的变化趋势,推测GhERF8可能与叶片衰老有一定关系。在乙烯利和茉莉酸处理下GhERF8基因在叶片中上调表达,而在脱落酸处理下GhERF8表达量无显著变化,推测GhERF8可能处于乙烯和茉莉酸信号转导网络中,且表达途径为非ABA依赖途径。

细胞动粒蛋白Hec1启动子的结构及功能分析

细胞的分裂是一个严格调控,高度有序的过程.为了将复制后的染色体均匀、准确地传递给两个子细胞,细胞在分裂中后期受到纺锤体检验点的严格监控.Hec1定位于动粒,是纺锤体检验点调控的关键蛋白之一,它通过螺旋-螺旋结构域与其他动粒蛋白相互作用调节姐妹染色体的精确分离.为研究Hec1转录水平的调控机理,采用BLAST工具,从GenBank中搜索到了人Hec1基因上游的序列,并利用在线工具http://mbs.cbrc.jp/research/db/TFSEARCH.html提供的转录因子结合位点搜索引擎,对其5′启动子调节区段进行了分析.分析结果表明:在Hec1基因上游-200～-1序列内,存在E2F、ATF4和cAMP应答元件结合蛋白(CREB)等转录因子调控元件.在结构分析的基础上,提取HeLa细胞基因组DNA,用PCR方法克隆了Hec1基因启动子,并构建了多个含启动子不同区段的pGL3荧光素酶报告基因表达质粒.瞬时转染HeLa细胞后的结果表明,-70～-63以及-155～-144之间的启动子区对维持荧光素酶活性最为关键.凝胶迁移实验证明,这两个区段分别能够和转录因子CREB以及ATF4结合.随后,采用野生型的以及含有133位磷酸化位点突变的CREB转染HeLa细胞,通过荧光定量PCR实验发现,Hec1的表达水平分别出现明显上升和下降.该结果表明,Hec1表达的调控是通过CREB的活化来完成的.

植物硫酸盐转运体研究进展

硫元素是植物生长发育所必需的矿物质营养元素,主要参与光合作用、呼吸作用、氮固定、蛋白质和脂类合成等重要生理生化过程。植物通过硫酸盐转运体以硫酸根(SO_(4)^(2-))的形式从土壤中吸收硫酸盐。当硫酸盐被吸收进入根系细胞内部后,植物通过质外体和共质体两种养分的运输途径将其运输到根中维管束,进而加载到地上部。当外界硫素充足时,植物将吸收的过量硫储存在液泡中,一旦土壤中硫素缺乏时,液泡储存的硫会释放到细胞质中,进行再分配,以维持植物体内硫酸盐的平衡。到目前为止,硫酸盐转运体的研究主要集中在模式植物拟南芥,对其他植物中的研究还较少。硫缺乏会严重抑制植物的正常生长。在进化过程中植物形成了一整套应对缺硫的分子机制来增加硫的吸收、运输和利用,调节自身的生长发育,其中,硫酸盐转运蛋白在应对硫胁迫过程中起重要的作用。本文将重点阐述植物中硫酸盐从土壤吸收进根系、运输和再分配的分子机制,并对今后的植物硫素吸收转运的研究重点进行展望。

“双阴性”T细胞与系统性红斑狼疮

系统性红斑狼疮(SLE)是典型的自身免疫疾病,其发病率、死亡率都较高.炎性因子和自身抗体的产生与SLE发病机制密切相关.研究发现,SLE患者的外周血中TCRαβ^+CD3^+CD4^-CD8^-T细胞(简称“双阴性”T细胞,DN-T细胞)数量明显增多,且与SLE的活动相关,其起源和功能尚不清楚.越来越多的研究认为DN-T细胞中环磷酸腺苷响应元件调节因子α(CREMα)的过表达和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的激活是SLE病理生理中的关键因素.本文主要介绍DN-T细胞的起源、功能特性及在SLE的致病作用,以寻求治疗SLE的新途径.

乙型肝炎病毒Ⅹ蛋白对肝癌细胞细胞色素P4502El表达的调控及其作用机制

且的探讨乙型肝炎病毒X蛋白（HBx）抑制细胞色素P4502El（CYP2E1）表达的作用机制及其对肝细胞癌转移的影响。方法将CYP2E1启动子区域划分为10个不同长度的片段并分别克隆到质粒PGL3-Basic上，与HBx表达载体（pCMV-2B-FLAG-X）共转染于HepG2细胞中测定荧光素酶活性以确定HBx作用区域。凝胶电泳迁移率试验分析转录因子与DNA的结合；CCK-8检测细胞的增殖l细胞的侵袭测定采用Martrigel试验。增殖试验、侵袭试验数据比较用t检验，荧光素酶沿f生数据比较采用方差分析。结果通过对CYP2E1启动子的缺失分析，重组子P8（删除-483～-274bp后的P7部分）活性与P7比较明显增高，达216．69％（F=142．13，P=0．002），确定HBx作用区域位于P7（-483～-274bp），进而通过MatInspector分析该区域存有肝细胞核因子4α（HNF4α）与胆固醇调节元件结合蛋白-I（SREBP-1）两转录因子结合位点并对该两序列进行突变分析，将mut-HNF4α、mut-SREBP-1及mut-Duel重组质粒与或不与pCMV-2BFLAG-X蛋白表达载体转染HepG2细胞，测定荧光素酶活性，分别为8．6％、24．44％、147．24％，进一步证实转录因子HNF40α与sREBP-l参与HBx对CYP2E1的调控∽=112．24，P=0．001）；凝胶电泳迁移率试验结果显示转录因子HNF40α与SREBP-l是通过与CYP2E1启动子的结合而发挥作用；CCK-8结果显示转染pCMV-2B-FLAG-X蛋白的HepG2细胞的增殖吸光度值4为0．86土0．11，未转染组增殖吸光度值爿为O．73±0．09，两组比较，差异有统计学意义（t=5．62，尸=0．031）iHepG2细胞的侵袭能力也强于对照组，穿膜细胞数为（40．0土8．1）个，显著高于对照组穿膜细胞数（18．0土3．O）个（f=21．54，P=0．001）；加入P13K与JNK信号通路抑制剂Wortm11annin sP600125后可抑制HBx对CYP2E1mRNA与蛋白水平表达的促进作用及对细胞增殖、侵袭的促进作用，提示P13K与JNK信号通路参与该调控。结论HBx可能通过P13K与JNK信号通路激活转录因子HNF40α与SREBP-1，然后作用于CYP2E1启动子抑制CYP2E1的表达，进而促进肝癌的生长与侵袭。

1,25-二羟维生素D3对实验糖尿病大鼠模型肝脏中甘油三酯含量的影响及其机制探讨

目的 活性维生素D与2型糖尿病、高脂血症的发生发展密切相关,通过观察1,25-二羟维生素D3[1,25（OH）2D3]对实验糖尿病大鼠模型肝脏中过氧化物酶增殖物激活受体-α（PPAR-α）、肝细胞核因子-4α（HNF-4α）、胆固醇调节元件结合蛋白-1C（SREBP-1C）、载脂蛋白A5（apoA5）表达及甘油三酯含量的影响,探讨1,25（OH）2D3调控肝脏甘油三酯的机制.方法 取80只健康雄性Wistar大鼠,分成糖尿病组20只、1,25（OH）2D3干预组（VitD干预组）20只、PPAR-α抑制组20只和正常对照组20只.以随机数字表法,取各组大鼠各15只,心内取血检测生化指标,采用实时荧光定量PCR、Western印迹法分别对大鼠的肝脏组织中PPAR-α、HNF-4α、SREBP-1C、apoA5基因及蛋白表达水平进行检测,并用酶法检测肝脏组织中甘油三酯含量.结果 （1）糖尿病组肝脏中PPAR-α、HNF-4α、apoA5基因、蛋白表达较正常对照组显著降低（P＜0.05）,而SREBP-1C基因、蛋白表达及甘油三酯含量较正常对照组显著增加（P＜0.05）.（2）VitD干预组肝脏中PPAR-α、HNF-4α、apoA5基因及蛋白表达较糖尿病组明显增加（P＜0.05）,而SREBP-1C基因及蛋白、甘油三酯含量较糖尿病组明显减少（P＜0.05）.（3）VitD干预组肝脏中PPAR-α、HNF-4α、SREBP-1C、apoA5基因、蛋白表达、甘油三酯含量较正常对照组无显著性差异（P＞0.05）.（4）PPAR-α抑制组PPAR-α、HNF-4α、apoA5基因、蛋白表达较正常对照组显著降低（P＜0.05）,而SREBP-1C基因、蛋白表达、甘油三酯含量较正常对照组明显增加（P＜0.05）.（5） PPAR-α抑制组PPAR-α基因、蛋白表达较糖尿病组显著降低（P＜0.05）,而HNF-4α、apoA5、SREBP-1C基因、蛋白表达及甘油三酯含量与糖尿病组无显著性差异（P＜0.05）.（6） PPAR-α抑制组PPAR-α、HNF-4α、apoA5基因、蛋白表达较VitD干预组显著降低（P＜0.05）,而SREBP-1C基因、蛋白表达及甘油三酯含量较VitD干预组显著增加（P＜0.05）.结论 1,25（OH）2D3可能通过上调肝脏中PPAR-α、HNF-4α、apoA5表达,抑制SREBP-1C的表达,从而降低甘油三酯水平.

MPP^＋抑制PC12细胞BDNF表达

研究MPP+(1-methyl-4-phenylpyridinium)对PC12细胞的毒性作用及机制。采用MTT法检测细胞存活率,Western blotting检测蛋白变化及双荧光素酶报告基因系统检测转录因子活性。结果表明,MPP+能够显著抑制细胞存活率,且呈剂量依赖性;而且MPP+能够降低PC12细胞神经营养因子BDNF(brain-derived neurotrophic factor)的蛋白水平,并能够抑制ERK(extracellular signal-regulated proteinkinase)的磷酸化,而对CaMKⅡ活性无影响,同时能够显著抑制BDNF的转录因子CREB(cAMP response element binding protein)的磷酸化,并抑制其转录活性。因此MPP+可能通过抑制ERK活性而抑制其下游转录因子CREB的活性,最终导致BDNF的表达减弱。

电针不同刺激时长对自闭症大鼠BDNF-CREB信号通路的影响

目的:观察电针不同刺激时长对自闭症大鼠海马BDNF-CREB通路的影响,探讨电针响应的时效关系模式。方法:实验一将自闭症模型大鼠分成模型组、手针组、电针5sA组、电针10sA组、电针20sA组、电针60sA组,另选正常大鼠为空白组,每组6只。手针组留针30min;电针组按组别分别刺激5、10、20、60s,间歇2min再刺激,反复15次。实验二分为电针5sB组、电针10sB组、电针20sB组、电针60sB组,固定刺激总时长为240s,单次刺激分别为5、10、20、60s,间隔2min刺激,刺激次数分别为48、24、12、4次。干预前后进行行为学检测,Westernblot检测海马组织BDNF、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、CREB及p-CREB蛋白表达,免疫组化检测海马组织CREB、p-CREB蛋白表达。结果:干预后电针20sA、60sA组较模型组站立次数增加、刻板动作减少:电针20sB、60sB组较模型组活动路程,平均速度增加(P<0.05),站立次数增多(P<0.05),刻板动作减少(P<0.05)。与模型组比较,电针20sA、60sA组BDNF表达增加(P<0.01),Bcl-2表达减少(P<0.05);CREB、p-CREB表达增加(P<0.05,P<0.01);电针5sA组较20sA组CREB表达下降(P<0.05)。与模型组比较,电针10sB、20sB、60sB组Bcl-2表达减少(P<0.05,P<0.01);电针20sB、60sB组CREB、p-CREB表达增加(P<0.05,P<0.01)。结论:以20s为单位刺激时长(累计干预15次)起电针长强穴能改善自闭症大鼠异常行为以及BDNFCREB通路蛋白表达,引起针刺响应效应。无论累计干预15次还是累计干预240s,以20s为单位的刺激时长为起效的最短时间。