嗜麦芽窄食单胞菌的耐药性与Ⅵ型分泌系统及外排泵的研究

目的 分析临床分离嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia,SMA)Ⅵ型分泌系统(type Ⅵ secretion system,T6SS)、外排泵基因SmeABC和SmeDEF的分布情况,探讨T6SS和携带外排泵基因与抗菌药物耐药的关系。方法收集2021年3月至2024年2月医院192株非重复SMA临床分离株,统计患者的一般临床资料。采用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法检测所有分离株的T6SS基因,外排泵SmeABC、SmeDEF基因。使用VITEK-2 Compact仪器及纸片扩散法对分离菌株进行鉴定和抗菌药物敏感试验。结果 192株SMA中,T6SS阳性菌株共计47株(24.48%),T6SS阳性菌株对头孢噻肟、头孢他啶、庆大霉素、阿米卡星、环丙沙星、左氧氟沙星、复方新诺明的耐药率明显高于T6SS阴性菌株(P<0.05),T6SS阳性组患者入住ICU及气管插管、胸腹引流管占比情况均高于T6SS阴性组(P<0.05)。外排泵基因检测结果显示,114株(59.38%)过表达SmeABC基因,且高表达组对头孢他啶和头孢噻肟的耐药率高于低表达组(P<0.05),106株(55.21%)过表达SmeDEF基因,高表达组对庆大霉素、阿米卡星、环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率均明显高于低表达组(P<0.05)。同时,T6SS阳性组SmeABC、SmeDEF的表达量相较于T6SS阴性组的表达量均明显升高,差异有统计学意义(P<0.001)。结论 T6SS阳性组的耐药率较高,在医院ICU、机械通气及插管的患者中检出率较高,SmeABC、SmeDEF的表达量显著高于T6SS阴性组,提示SmeABC、SmeDEF过表达可能与T6SS阳性菌株多重耐药性存在一定的相关性。

鲍曼不动杆菌主动外排系统AdeABC、AdeIJK与多重耐药相关性

了解本地区鲍曼不动杆菌主动外排系统的分布并探讨其在介导细菌多重耐药中的作用。方法琼脂二倍稀释法检测20种抗菌药物对鲍曼不动杆菌临床分离株的MIC;PCR扩增AdeABC-AdeRS、AdeUK两种RND主动外排系统的结构和调节基因。结果112株鲍曼不动杆菌临床分离株对亚胺培南/西司他丁和美罗培南耐药率分别为0.9%和1.8%,对大多数抗菌药物的耐药率均大于60%,但对多黏菌素B和米诺环素均敏感。75.9%的菌株同时检出adeABC-adeRS和adeIJK主动外排基因,6.3%仅检出adeIJK。同时检出adeABC-adeRS和adeIJK的菌株耐药率较高。结论本地区鲍曼不动杆菌临床分离株多重耐药情况严重。adeABC和adeIJK在鲍曼不动杆菌临床分离株有较高检出率。AdeABC主动外排系统在鲍曼不动杆菌多重耐药性的形成中起重要作用。

AdeABC外排泵系统与鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类药物耐药的关系

目的:探讨外排泵AdeABC系统与鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类药物耐药的关系。方法:采用美罗培南多步法体外诱导敏感鲍曼不动杆菌获得对碳青霉烯类药物耐药的菌株;采用E-test法定量检测诱导前后菌株的敏感性;羰基氰化物间氯苯腙(carbonylcyanide-m-chlorophenylhydrazone,CCCP)抑制试验筛查外排泵;PCR及测序分析诱导前后AdeABC系统的调控基因adeS,adeR及主要碳青霉烯酶基因的变化;荧光定量PCR检测诱导前后adeA,adeB,adeR和adeS基因m RNA的表达量。结果:亲代敏感菌株S25595和S7257的美罗培南最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)分别为0.38和0.25μg/m L,诱导后MIC均>32μg/m L;与亲代敏感株相比,诱导耐药株adeA,adeB,adeR和adeS基因的m RNA表达量上升2.45~9.44倍,但调控基因adeS和adeR没有基因突变或插入序列。结论:外排泵AdeABC系统高表达与鲍曼不动杆菌对美罗培南耐药密切相关,其表达水平升高不是由调控基因adeS和adeR序列中基因突变或插入序列引起,可能存在其他机制。

鲍曼不动杆菌主动外排系统和NDM-1基因分布特征及与耐药表型的关系

目的了解鲍曼不动杆菌主动外排系统(外排泵)基因和新德里金属β-内酰胺酶1(NDM-1)基因的分布情况,并分析其与细菌耐药表型的关系。方法采用琼脂二倍稀释法检测13种抗生素对81株鲍曼不动杆菌临床分离株的最低抑菌浓度(MICs),根据外排泵抑制剂PAβN处理前后MICs的变化判定外排泵表型。利用PCR扩增技术检测外排泵基因adeABC、adeIJK和adeFGH以及NDM-1基因blaNDM-1在临床分离株中的分布特征,根据外排泵基因的检出情况将临床分离株进行分组并比较耐药率。结果 81株鲍曼不动杆菌对临床常用的13种抗生素普遍耐药,43株(53%)外排泵表型试验阳性,对米诺环素的耐药率最低(30.9%),其次为亚胺培南,对其余抗生素的耐药率均超过60%,对头孢西丁和复方新诺明的耐药率较高,分别为97.5%和93.8%。在AdeABC外排泵基因阳性的菌株中,adeB、adeS和adeR的检出率分别为78%、78%和74%;在AdeIJK和AdeFGH外排泵基因中,adeJ、adeL、adeF、adeG和adeH的检出率均>90%;外排泵基因adeB、adeJ和adeG全部阳性的60株鲍曼不动杆菌的多重耐药最为严重,耐药基因阳性组的耐药率明显高于相对基因阴性组。32株鲍曼不动杆菌被检测出携带blaNDM-1基因。结论本地区鲍曼不动杆菌临床分离株多重耐药情况严重,存在blaNDM-1基因的克隆传播。AdeABC、AdeIJK和adeFGH外排泵基因在鲍曼不动杆菌临床分离株中的检出率较高。主动外排系统和NDM-1在鲍曼不动杆菌多重耐药性的形成中起重要作用。

细菌多药外排系统的研究进展

目前各种细菌的耐药性问题已引起了科学家们的广泛关注,细菌的多药外排系统是引起细菌多药耐药的主要原因之一.本文着重介绍了与多药耐药相关的两大类多药外排系统(ABC型多药外排系统和次级多药外排系统)各家族成员的结构特点、表达调控和底物范围,以及解决多药外排系统引起耐药性的几项措施.

外排AdeABC和AdeIJK系统与鲍曼不动杆菌耐药性的相关研究进展

鲍曼不动杆菌是医院感染及免疫缺陷者感染的重要致病菌之一。近年来,临床分离率逐年上升,耐药性日益严重,其耐药性与多种机制有关,其中主动外排AdeABC和AdeIJK系统的结构、功能及表达调节在多重耐药过程中起重要作用,也是研究的热点之一。

鲍曼不动杆菌耐药表型与外排泵基因表达水平的研究

目的探讨鲍曼不动杆菌临床分离株对常用抗菌药物的耐药性及与外排泵adeA基因表达水平之间的关系。方法琼脂二倍稀释法检测鲍曼不动杆菌临床分离株对17种常用抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC);PCR法扩增外排泵编码基因adeA;实时荧光定量RT-PCR(Real Time Fluorescent Quantitative RT-PCR)法检测adeA基因的mRNA表达水平。结果药敏结果显示86株鲍曼不动杆菌对多粘菌素B全部敏感(100%),其次是美罗培南(73.2%)、亚胺培南(70.9%)。耐药率最高的是庆大霉素(84.9%),其次为美罗西林(83.7%)和环丙沙星(79.1%)。55株菌为多重耐药株(64%),其中5株(5/86)对多粘菌素B外的所有抗菌药物耐药(5.8%)。adeA的检出阳性率为84.9%(73/86),Real Time RT-PCR结果显示多重耐药菌株adeA基因的mRNA相对表达量均高于敏感菌株,其中3株相对表达量为敏感菌株平均表达水平的30倍以上。结论鲍曼不动杆菌临床分离株耐药情况严重,其主动外排系统adeA基因表达增强在多重耐药性形成中起重要作用。

铜绿假单孢菌多药外排系统研究进展

铜绿假单孢菌是一种重要的院内感染条件致病菌 ,具有先天的和后天获得的多重高度耐药性 ,一旦感染 ,临床治疗十分困难。铜绿假单孢菌的耐药机理十分复杂 ,除常见耐药机制外 ,很重要的就是其拥有可以外排多种药物的主动外排系统 ,使抗菌药物很难发挥应有作用。本文将从近年铜绿假单孢菌中各类外排泵的研究情况 ,特别是其中最重要的外排系统“MexAB -OprM”的分子结构模型、膜定位、该基因的表达与调控等方面的研究进展做一综述。

鲍曼不动杆菌的多重耐药性与主动外排系统

鲍曼不动杆菌的多重耐药现象日益严重,给临床抗菌药物的应用带来威胁,其多重耐药机制复杂,其中主动外排是主要原因之一。该文系统综述易化子超家族、耐药结节分化超家族和多药及毒物外排家族的5种主动外排系统的结构,外排机制及调节通路,分析多重耐药与主动外排系统的关系,为新型抗菌药物的设计提供新思路。

甲型副伤寒沙门氏菌主动外排多重耐药基因与表达研究

目的调查临床分离甲型副伤寒沙门氏菌对常用抗生素的耐药情况与多重耐药主动外排基因acrB的检测、序列分析及其表达水平。方法用琼脂二倍稀释法测定7种抗生素对甲型副伤寒沙门氏菌的抗菌活性,以基因库序列为参考设计引物PCR扩增acrB、测序并用RT-PCR方法检测其表达。结果12株甲型副伤寒沙门氏菌对氧氟沙星、环丙沙星、头孢噻肟、哌拉西林、氯霉素、四环素、庆大霉素的耐药率除氯霉素为0外,其余均为8.33%。对三类不同种类抗菌药物多种耐药者1株。所有细菌均检测到多重耐药外排基因acrB,测序结果与参考沙门氏菌序列(No.AL627267)比较,有1处碱基差异。与大肠埃希氏菌(No.ECU00734)比较,碱基同源性为84.41%(70/449),提示其碱基序列同源性均极高。分别选取对两类抗菌药物耐药及敏感甲型副伤寒沙门氏菌各一株进行RT-PCR检测,结果两株细菌均检测到多重耐药外排基因acrB的表达。结论甲型副伤寒沙门氏菌对喹诺酮类、第三代头孢菌素类等药物耐药率低,但有多重耐药。甲型副伤寒沙门氏菌中均存在acrAB主动外排系统,与大肠埃希氏菌同源性高,可检测到其表达。主动外排机制可能是甲型副伤寒沙门氏菌形成多重耐药的主要原因之一。

伤寒沙门菌多重耐药主动外排系统基因检测与序列分析

目的 :以聚合酶链反应 (PCR)检测伤寒沙门菌敏感株 2 75及其第 2代诱导耐药菌OM 2、182acrB主动外排基因并分析序列。方法 :参考伤寒沙门菌基因库序列 (No .AL6 2 72 6 7)设计引物 ,对伤寒沙门菌 2 75、OM 2、182PCR扩增acrB基因 ,以证实acrAB外排系统的存在 ,并对 3株伤寒沙门菌扩增所得的acrB测序并分析其序列。结果 :伤寒沙门菌 2 75、OM 2、182PCR均扩增出 4 4 9bp的产物带 ,序列分析示伤寒沙门菌 2 75、OM 2仅 2处碱基与参考序列不同 (同源性 99.5 5 % ) ,推定编码的氨基酸相同 (同源性 10 0 % ) ,伤寒沙门菌 182除 2处碱基不同外 ,另有 2处存在碱基插入 ,因其序列已被打乱 ,无法进行氨基酸推测。结论 :伤寒沙门菌存在主动外排系统 ,是产生高水平耐药及多重耐药的基础。

淋病流行株外排系统与外膜通透性和多重耐药性的关系

探讨外排系统、外膜通透性与淋病流行株多重耐药性的关系。应用K-B法和琼脂稀释法从湛江地区分离出62株淋球菌多重耐药株。利用SDS-PAGE测定淋球菌外膜孔蛋白的表达;应用直接荧光法测定能量抑制剂加入前后淋球菌对抗生素的摄入和积累情况,比较耐药菌与敏感菌内膜泵蛋白表达的差异;利用煮沸法提取细菌DNA,PCR扩增mtrR基因,并对扩增产物测序,比较敏感株与多重耐药株的差异。结果5株多重耐药菌均有外膜孔蛋白表达的缺失或下降,同时伴有外排泵蛋白的表达;5株敏感淋球菌无mtrR的突变,10株多重耐药株均有mtrR基因的突变。表明外排系统、外膜通透性与淋病流行株的多重耐药性密切相关。

多重耐药鲍曼不动杆菌主动外排系统adeA的分布

目的探讨主动外排系统adeA与鲍曼不动杆菌多重耐药的关系。方法采用聚合酶链反应(PCR)筛选鲍曼不动杆菌的主动外排基因adeA,应用琼脂稀释法检测主动外排抑制剂碳酰氰间氯苯腙(CCCP)联合抗菌药物对多重耐药鲍曼不动杆菌生长的影响。结果收集的60株鲍曼不动杆菌临床分离株对亚胺培南、美罗培南耐药率分别80.0%和81.7%,对其它大多数抗菌药物的耐药率为90%以上;60株临床分离株检测出adeA主动外排基因52株,检出率为86.7%;CCCP可减少多重耐药鲍曼不动杆菌对抗菌药物的外排作用,增加抗生素对多重耐药鲍曼不动杆菌的抑制率。结论鲍曼不动杆菌是医院感染重要的多重耐药病原菌,adeA主动外排作用可能在本地区鲍曼不动杆菌多重耐药中发挥非常重要的作用。

MexXY-OprM主动外排系统在铜绿假单胞菌多重耐药机制中的作用

目的研究Mex XY-Opr M主动外排系统在铜绿假单胞菌(PA)多重耐药机制中的作用。方法挑选临床分离的PA多重耐药菌株26株、敏感菌株15株及标准质控菌株(ATCC27853),用RT-PCR方法扩增其内膜转运蛋白Mex Y的结构基因mex Y和内参基因16SrRNA片段,根据结构基因mex Y与16SrRNA扩增产物的电泳扫描比值,分析mex Y mRNA的表达水平,用以判断Mex XY-Opr M的表达情况。结果 26株多重耐药菌株对14种常用抗菌药物都耐药,耐药率为100.00%,15株敏感菌株对14种常用抗菌药物都敏感;标准质控菌株、敏感菌株和多重耐药菌株均检测出mex Y的mRNA基因,耐药菌株的mex Y mRNA水平高于敏感菌株(P<0.05)。结论 Mex XY-Opr M主动外排系统表达水平的增高在PA多重耐药中起到重要的作用。

主动外排系统与结核分枝杆菌耐药

目前结核分枝杆菌的耐药问题已引起研究人员的广泛关注,结核分枝杆菌的主动外排系统是引起细菌多药耐药的主要原因之一。本文主要介绍了与耐药相关的几类主动外排系统各家族成员的结构及生物学功能等,以及其抑制剂的研究进展。

淋病奈瑟菌多重传递耐药主动外排系统的研究进展

淋病奈瑟菌多重传递耐药系统属于细菌的主动外排系统,与淋球菌多重耐药的发生有密切关系。本文就该系统的组成、功能、基因调控及与淋球菌多重耐药间关系等方面的研究现状作一概述,并讨论对该系统进一步研究的意义。

主动外排系统与念珠菌的多重耐药

近年真菌感染大幅度增加 ,随着三唑类抗真菌药大剂量、长疗程使用 ,多重耐药株感染导致的治疗失败也呈增加趋势 ,对耐药念珠菌的研究发现 ,多重耐药与真菌细胞膜上主动外排泵的活化密切相关 ;与多重耐药相关的主动外排系统有ATP结合盒超家族 (cdr1与cdr2 )和主要易化因子超家族 (CaMDR和flu1) ,临床分离的敏感株和耐药株应用Southernblot及限制性核酸内切酶片段长度多态性分析表明 ,两者在基因型上无明显的差异 ,而Northernblot发现 ,两者在主动外排泵基因的mRNA上差异明显 ,表明耐药的发生是源于基因表达的异常而不是基因扩增所致 ,而启动子区上游 5 0 0bp的碱基序列分析 ,未发现能增加基因表达的突变 ,进一步的研究发现 ,基因表达的增加源于反式调节因子对启动子的激活。

外排泵ABC转运蛋白基因msbA和spab在幽门螺杆菌多重耐药中的重要作用

目的:探讨外排泵ABC转运蛋白基因msbA和spab在幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)多重耐药中的作用.方法:从临床上胃炎和消化性溃疡患者的胃黏膜标本分离H.pylori.采用琼脂二倍稀释法测定氨苄西林、头孢曲松、四环素、克拉霉素、氧氟沙星和呋喃唑酮对H.pylori的最小抑菌浓度(MIC).应用氯霉素对敏感株和标准菌株进行体外诱导多重耐药.采用RT-PCR的方法分别测定敏感株和多重耐药株中msbA和spab基因的相对表达量.分别构建msbA和spab的基因敲除株,分别测定敲除前后菌株对9种抗生素的敏感性.结果:诱导出包括标准菌株NCTC11637在内的5株多重耐药株.多重耐药株中msbA和spab基因的相对表达量明显高于敏感株(1.8200±0.5310,1.8340±0.2726vs0.8420±0.0789,P=0.018,0.015).成功构建了msbA和spab基因敲除株(H.pyloriMZ1006△msbA和H.pylori MZ1006△spab),两株基因敲除株对4种抗生素的敏感性相对于野生株分别有明显的增加.在临床分离的20株H.pylori中均检测出msbA和spab基因,未发现基因缺失株.结论:ABC转运蛋白msbA和spab基因在H.pylori多重耐药机制中起重要作用.

Mtr外排系统——淋球菌的多重耐药机制

淋球菌对脂溶性因子 (HAs)的耐受性主要是由于淋球菌有多传递耐药 (Mtr)外排系统的存在。淋球菌的Mtr基因系统包括Mtr调节基因 (MtrR)和MtrCDE基因复合物。MtrR基因的编码是一个转录抑制蛋白MtrR ,调节MtrCDE基因的转录。MtrCDE基因复合物则分别编码菌体膜蛋白MtrC ,MtrD ,MtrE ,组成的一个能量依赖型外排泵 ,能把HAS有效地排出细胞外。Mtr基因系统中任何基因的突变、丢失、缺失或其编码蛋白结构的改变 ,都会影响淋球菌对HAs的耐受性。

江西省多重耐药铜绿假单胞菌主动外排系统耐药与相关机制研究

铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa ，PA ）所涉及耐药机制相当复杂，包括抗生素灭活酶或修饰酶的生成、外膜低渗透性、外膜孔蛋白缺失、生物膜形成和主动外排等［1］。其中外排泵系统是 PA 主要的耐药机制。我们对 MexAB‐OprM 、MexCD‐OprJ 、MexEF‐OprN 、MexXY‐OprM4种主动外排系统在江西省地区南昌大学第一附属医院，九江市第一人民医院等几家医院多重耐药铜绿假单胞菌中高表达情况、可能调控机制进行研究，为临床治疗和药物开发提供思路和依据。