胶质瘤耐药细胞系中11种ABC转运子的表达

目的:在胶质瘤的治疗中,亚硝基脲类药物如卡氮芥是常用的化疗药物。但由于耐药性的产生,患者预后通常不良。在耐药机制的研究中,ABC转运子家族因其具有将药物泵出细胞外的特性而备受关注。本研究旨在探讨胶质瘤细胞中卡氮芥耐药与11种ABC转运子的关系。方法:以SWOZ2细胞作为卡氮芥敏感的细胞系,以卡氮芥耐药的SWOZ1细胞作为原发性耐药细胞系,同时诱导出卡氮芥耐药的SWOZ2细胞系作为获得性耐药细胞系,通过CCK-8法测定细胞的生长曲线及卡氮芥对各细胞系的IC50和耐药指数,同时通过荧光定量PCR法检测耐药细胞与敏感细胞中11种ABC转运子mRNA表达的差异。结果:CCK-8法结果表明,与SWOZ2细胞相比,SWOZ1对卡氮芥的耐药性是SWOZ2的4.7倍,SWOZ2的卡氮芥耐药细胞系(命名为SWOZ2/B)对卡氯芥的耐药性是SWOZ2的6.5倍。采用相对定量的荧光定量PCR法检测1 1种ABC转运子在各细胞系中的表达,结果表明只有ABCG1在2株耐药细胞系中均表达上调,分别在SWOZ1中上调了4.1倍、在SWOZ2/B中上调了4.4倍。结论:ABCG1在脑胶质瘤细胞卡氯芥耐药中可能发挥重要作用。

部分ABC转运子与抗砷相关性的研究进展

ATP结合盒（ATP—binding cassette，ABC）转运蛋白超家族，是人类最大的转运蛋白基因家族，其编码产物为一组跨膜蛋白，即ABC转运蛋白，可以运载多种物质，介导药物的外排，已被证明能够在肿瘤细胞系中介导对多种抗肿瘤药物产生的耐药。砷剂治疗白血病的耐药性，同样与该家族某些成员（尤其是ABCA1、ABCB1、ABCC1、ABCC2）密切相关，作者就其具体相关性作以综述。

ABC转运蛋白在SPC-A1细胞系中SP细胞多药耐药机制的研究

目的:近期研究表明,肿瘤是由异质细胞构成的一个群体,肿瘤的形成及生长是由称为肿瘤干细胞的一小群细胞驱动的。由于肿瘤干细胞高表达ABC转运蛋白、通常处于静止期并具有高度的DNA修复能力及抗凋亡能力因而对传统的放化疗耐药。文中研究ABC转运蛋白与SPC-A1细胞系多药耐药及肿瘤干细胞之间的关系。方法:在实验前期构建多西他赛耐药细胞系SPC-A1/Docetaxel的基础上,比较了SPC-A1及SPC-A1/Docetaxel细胞系之间SP细胞的含量及其生物学特性、ABC转运蛋白的表达及其对多西他赛耐药性的影响。结果:SPC-A1及SPC-A1/Docetaxel细胞株中均存在SP细胞,SPC-A1/Docetaxel细胞株中的SP细胞比例高于SPC-A1细胞;耐药蛋白P-gp及乳腺癌耐药蛋白(BCRP)在SPC-A1/Docetaxel细胞株及SPC-A1/Docetaxel-SP细胞中均有明显的表达,而在SPC-A1细胞株的SP细胞中仅BCRP的表达增高;SPC-A1-SP细胞的增殖率、克隆形成能力及致瘤性均显著高于SPC-A1/Docetaxel-SP细胞;SPC-A1/Docetaxel细胞的耐药性可被维拉帕米逆转,而相同浓度的维拉帕米不能完全逆转SPC-A1-SP细胞的Docetaxel耐药。结论:耐药蛋白BCRP在分选人肺腺癌细胞株SPC-A1中具有肿瘤干细胞性质的SP细胞时起主要作用,由此分选的SPC-A1-SP细胞基本具备了肿瘤干细胞的特性,而且BCRP表达也是SPC-A1-SP细胞多西他赛耐药的一个主要因素。

ABCE1基因沉默对人肝癌SMMC-7721细胞增殖和迁移能力的影响

目的探讨ATP结合盒转运FE1ABCE1基因对细胞的生长、细胞周期及肿瘤迁移等方面的作用。方法设计及合成ABCE1的siRNA序列,Lipofectamine TM2000转染SMMC-7721细胞。通过RT-PCR、Western印迹检测ABCE1在干扰后的mRNA和蛋白的表达情况,通过流式细胞仪检测细胞周期。通过CCK-8增殖实验、划痕愈合实验、细胞侵袭实验评价沉默ABCE1基因对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、迁移以及侵袭能力的影响。结果 ABCE1 mRNA和蛋白表达,实验组较对照组和空白组显著降低(P<0.05)。实验组细胞的生长速度明显减慢,细胞周期被阻滞在G0/G1期,S期细胞数减少(P<0.05)。CCK-8增殖实验显示,与对照组和空白组相比,实验组MMC-7721细胞的增殖受到明显抑制(P<0.05)。划痕愈合实验显示,实验组迁移能力显著下降(P<0.05)。Transwell小室法示,实验组MMC-7721细胞的侵袭能力显著下降(P<0.05)。结论特异性干扰ABCE1基因表达可抑制人肝癌SMMC-7721细胞的迁移能力,并抑制肿瘤细胞增殖,因此,ABCE1的siRNA序列可能成为治疗肝癌的有效靶点。

家蚕新的卵色相关基因Bmwh2的克隆及组织表达与功能研究

腺苷三磷酸结合盒转运蛋白(ATP-binding cassette transporter,ABC转运蛋白)是古老而庞大的家族,广泛分布于从细菌到人类各种生物体中,主要利用ATP水解释放的能量实现多种底物的跨膜主动转运。通过RT-PCR扩增、克隆测序了家蚕ABC转运子Bmwh2完整的开放阅读框。用生物信息学方法分析发现,Bmwh2有14个外显子和13个内含子,编码689个氨基酸残基,分子质量77.38 kD,等电点8.42;Bmwh2含有1个核苷酸结合结构域和6个α螺旋构成的跨膜结构域,为半转运子,属于家蚕ABC转运子超家族G亚族成员。利用半定量RT-PCR方法分析Bmwh2在家蚕5龄第3天幼虫不同组织的表达水平,以精巢中的相对表达量最高。用合成的siRNA显微注射胚胎发育时期的蚕卵,对Bmwh2进行干涉研究,获得了白卵和嵌合体的干涉表型。根据实验结果,推测Bmwh2可能参与家蚕浆液膜色素前体的转运。

蛋白激酶Cβ抑制剂Enzastaurin逆转肿瘤多药耐药机制的研究

目的探讨蛋白激酶Cβ抑制剂Enzastaurin逆转多药耐药(MDR)的作用及机制。方法 Enzastaurin处理高表达ABCB1、ABCC1及ABCG2的MDR基因细胞株后,通过MTT法测定细胞毒作用,流式细胞仪测定阿霉素及罗丹明123在细胞内累积,Western blotting测定蛋白表达,应用半定量RT-PCR测定m RNA表达水平及采用化学发光法测定ATP酶活性。结果 Enzastaurin可逆转ABCB1介导MDR,对ABCC1及ABCG2介导MDR无逆转作用;Enzastaurin抑制ABCB1药物外排功能而逆转肿瘤MDR,但与ABCB1表达及阻断Akt及Erk1/2磷酸化无关;Enzastaurin通过抑制ATP酶激活而抑制ABCB1药物外排泵功能。结论 Enzastaurin在体外可通过抑制药物外排泵ATP酶活性逆转ABCB1介导MDR作用。

ABCG2基因:一个癌症治疗的新靶点及干细胞筛选的候选标志

ABCG2是ABC转运体家族的成员 ,由于ABCG2基因在某些癌细胞质膜上高表达 ,从而导致癌细胞将抗癌药物泵出细胞外而产生抗药性。通过进一步研究发现 ,人ABCG2的 4 82位上的氨基酸残基对底物的特异选择很重要 ,在对癌症患者治疗的时候选择不同的药物或者选择性加入针对不同ABCG2突变体的拮抗剂可能会起到更好的疗效。ABCG2在侧群细胞上的专一表达提示其可能成为成体多能干细胞阳性筛选的潜在标志物。