当归水提物对Caco-2细胞ABCB1蛋白功能调节效应的体外机制研究

目的探讨当归水提物及其活性成分阿魏酸(FA)对Caco-2细胞上的ABCB1蛋白摄取功能的影响。方法采用MTT法确定药物实验剂量,利用流式细胞术检测Caco-2细胞内ABCB1蛋白底物罗丹-明123(Rh-123)的荧光强度。结果由MTT法得到当归水提物和FA的浓度<100 mg.L-1时,细胞的存活率>90%;流式仪检测到中、高浓度的当归水提物和FA(10、100 mg.L-1)与Caco-2细胞孵育60 min后,分别能够使细胞内Rh-123的荧光强度减少27%、10%。结论当归水提物对ABCB1蛋白介导的Rh-123的外排有一定的诱导作用,并在一定范围内具有浓度依赖性,药物浓度越高,诱导作用越强。其活性成分FA对ABCB1蛋白只有轻微地诱导作用。

糖尿病大鼠P-糖蛋白编码基因Abcb1 mRNA的表达及其对口服恩诺沙星药动学的影响

试验旨在研究糖尿病大鼠肝脏、肾脏、空肠和回肠中P-糖蛋白编码基因Abcb1 mRNA的表达水平及其对口服恩诺沙星药动学的影响。通过链脲佐菌素(STZ)诱导建立清洁级雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠的糖尿病模型,采用实时荧光定量法检测并比较2组(健康组和糖尿病组)大鼠不同器官中Abcb1 mRNA的表达差异,采用高效液相色谱法(HPLC)进一步测定糖尿病大鼠口服恩诺沙星的血药浓度。结果表明,糖尿病大鼠肝脏和回肠中Abcb1a mRNA的表达量显著高于健康组(P<0.05),肾脏和空肠中Abcb1a mRNA的表达量虽有波动,但差异不显著(P>0.05)。健康大鼠各器官中Abcb1b mRNA的表达水平与糖尿病大鼠相比未见显著差异(P>0.05)。口服恩诺沙星的药动学结果表明,糖尿病组大鼠血液中恩诺沙星的峰浓度、0~12 h的药-时曲线下面积和表观分布容积与健康组大鼠相比,均发生显著变化(P<0.01、P<0.05、P<0.05),其他药动学参数虽有变化,但差异不显著(P>0.05)。推测,糖尿病会导致大鼠体内Abcb1a mRNA的表达量发生变化,进一步导致口服药物在大鼠体内药动学过程发生变化。

ABCB1基因多态性与难治性癫痫

近年来,难治性癫痫的病因与多药耐药基因以及多药耐药基因与抗癫痫治疗的因果关系越来越受到关注。P糖蛋白(P-glycopretein,P-gp)是由ATP结合盒B亚家族成员1转运蛋白基因(ATP-binding cassette subfamily B member 1 transporter gene,ABCB1)编码的产物。它不仅可以限制抗癫痫药物(antiepileptic drug,AED)的消化道吸收,而且可以在细胞和亚细胞水平调控药物在中枢神经系统的运输过程。除了生理和环境因素的影响,P-gp的功能和表达的变化可能主要取决于ABCB1基因的多态性,这是目前研究得最广泛、最深入的多药耐药机制。本文就目前ABCB1基因多态性与难治性癫痫的相关性研究进展作一综述。

氯硝柳胺逆转KBv200细胞对阿霉素耐药性的机制研究

目的:探讨氯硝柳胺对人口腔表皮癌多药耐药细胞株KBv200耐药的逆转作用及其机制。方法:采用MTT法评价氯硝柳胺对KBv200细胞药物敏感性的影响,流式细胞术检测氯硝柳胺对细胞内化疗药物阿霉素积累的影响,Annexin V-FITC/PI双染法测定细胞凋亡情况,Western blot分析氯硝柳胺对多药耐药蛋白ABCB1表达的调控。结果:无毒剂量的氯硝柳胺(5μmol/L)增加KBv200细胞对阿霉素的敏感性,并显著提高阿霉素在细胞中的积累。此外,氯硝柳胺联合阿霉素可促进细胞凋亡。氯硝柳胺作用后,多药耐药蛋白ABCB1的表达水平下降。结论:氯硝柳胺对KBv200细胞的阿霉素耐药性有逆转作用,其机制与下调ABCB1蛋白表达有关。

荜茇酰胺衍生物的合成及其抑制人K562白血病多柔比星耐药株的作用

目的:对天然产物荜茇酰胺(piperlongumine,PL)进行结构修饰,并探讨PL衍生物对人慢性髓系白血病细胞多柔比星耐药株K562/Adr的抑制作用。方法:以PL为先导结构,用含硫或含氮杂环替代其9位苯环结构,合成一系列PL衍生物,并通过HPLC法测定了衍生物在纯水中的溶解度;采用CCK-8法检测PL及其衍生物对K562和K562/Adr细胞的IC_(50);使用AutoDock Vina和CDOCKER程序将PL衍生物与多药耐药性蛋白ABCB1蛋白(PDB ID:6C0V)进行分子对接。结果:共设计合成7个PL衍生物,且引入含氮杂环的化合物的水溶性均高于PL。活性测试结果显示绝大部分衍生物表现出良好的抗K562和K562/Adr增殖活性,其中化合物11g相比PL提高约10倍;分子对接结果表明,与其他衍生物和对照药物相比,11g表现出对ABCB1蛋白更高的结合亲和力。结论:含有川芎嗪片段的PL衍生物11g具有较好的抗K562/Adr活性,值得进一步深入研究。

恩替诺特或西达本胺作用人乳腺癌耐多柔比星的MCF-7细胞的特征

组蛋白去乙酰化酶抑制剂西达本胺和恩替诺特均属苯酰胺类,已经批准在临床应用。鉴于耐药性是癌症化疗中的常见问题,本研究以耐多柔比星的人乳腺癌MCF-7细胞为模型,探讨两药的作用特征。CCK-8增殖实验显示:与敏感细胞相比,耐药细胞对该两药均具有一定的耐药性,尤其是对西达本胺更为明显。恩替诺特可增加顺铂的抑制作用。以罗丹明123滞留作为ATP结合盒转运蛋白1(ATP-binding cassette B1,ABCB1)耐药性的间接指示剂,检测到两药对耐药细胞的罗丹明123的滞留均不明显,说明这些药物不是ABCB1的外排底物。固定浓度的恩替诺特处理耐药细胞,可明显地引起ABCB1蛋白的表达增加。流式细胞术分析细胞周期发现:两药均引起细胞明显的G1期阻滞,轻微地增加G2/M期细胞的数量。细胞凋亡分析发现两药均可引起MCF-7敏感细胞变圆,出现凋亡样形态,凋亡指示蛋白PARP-1出现切割;但对MCF-7耐药细胞均没有诱导凋亡的作用。本研究结果表明:MCF-7耐药细胞对西达本胺或恩替诺特均具有一定的耐药性,抗细胞凋亡可能是其耐药特征之一。

三七总皂苷通过ERK/Akt通路改变HepG2/阿霉素细胞耐药性

目的:观察三七总皂苷对人肝癌阿霉素耐药细胞(HepG2/Adr)耐药性及细胞外调节蛋白激酶(ERK)/蛋白激酶B(Akt)通路主要蛋白表达的影响,从ERK/Akt通路探讨三七总皂苷逆转HepG2/Adr细胞耐药的可能作用机制。方法:利用噻唑蓝(MTT)比色法检测三七总皂苷对HepG2/Adr细胞增殖的影响,利用(100,50,25 mg·L^(-1))三七总皂苷分别与(20μmol·L^(-1))阿霉素联合处理HepG2/Adr细胞,同时设置空白组,采用高内涵筛选平台检测药物作用40 min,3 h,6 h阿霉素在HepG2/Adr细胞内的积累;采用蛋白免疫印迹法检测P-糖蛋白/多药耐药基因1/ATP家族所介导的ABC家族转运蛋白(P-gp/MDR1/ABCB1)等耐药相关蛋白及ERK/Akt信号通路主要蛋白表达量;激光共聚焦显微镜检测MDR1在细胞膜上分布的改变。结果:与人肝癌细胞HepG2比较,HepG2/Adr细胞MDR1表达量显著升高(P<0.01);与阿霉素组比较,三七总皂苷(25,50,100 mg·L^(-1))与阿霉素(20μmol·L^(-1))联合给药在体外对HepG2/Adr细胞的半数抑制浓度(IC50)显著降低(P<0.01),逆转倍数最高为10倍;与阿霉素组比较,联合给药组3,6 h可明显提高阿霉素在细胞内的积累(P<0.05),呈剂量依赖性;与空白组和阿霉素组比较,三七总皂苷(50,100 mg·L^(-1))与阿霉素(20μmol·L^(-1))联合给药组MDR1,ABC半转运蛋白(ABCG2),多药耐药相关蛋白1(MRP1),ERK,磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK),Akt,磷酸化蛋白激酶B(p-Akt),哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR),磷酸化mTOR(p-mTOR)的表达明显降低(P<0.05);与空白组比较,阿霉素组与三七总皂苷(25 mg·L^(-1))组MDR1在细胞膜上的分布差异无统计学意义;与空白组和阿霉素组比较,三七总皂苷(100,50 mg·L^(-1))组可明显减少MDR1在细胞膜上的分布(P<0.05)。结论:三七总皂苷可抑制ERK/Akt通路,降低MDR1的表达,明显提高阿霉素在HepG2/Adr细胞中的积累,可能是三七总皂苷逆转耐药的机制之一。