BMP-2对人肝癌SMMC7721细胞MMP-2、MMP-9表达的影响

目的:探讨骨形态发生蛋白-2(BMP-2)对肝癌SMMC7721细胞基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9表达及分泌的影响。方法:分别采用半定量逆转录聚合酶链反应、Western blot及ELISA法检测BMP-2干预SMMC7721细胞后MMP-2、9mRNA、蛋白表达和浓度水平的变化。结果:BMP-2呈剂量和时间依赖性促进人肝癌SMMC7721细胞MMP-2、9mRNA、蛋白表达和分泌。结论:BMP-2可以上调MMP-2、9在肝癌SMMC7721细胞的表达水平,从而促进肝癌细胞的生长和侵袭能力。

紫杉醇对肝癌SMMC7721细胞凋亡的诱导作用及对相关基因表达的影响

目的:探讨紫杉醇对肝癌SMMC7721细胞凋亡的诱导作用及对bcl-2和bax基因的影响。方法:用浓度为5μg·ml^(-1)的紫杉醇处理肝癌SMMC7721细胞后,利用DNA琼脂糖凝胶电泳,TUNEL法检测其细胞凋亡;通过原位杂交法、免疫组化法,测定紫杉醇诱导肝癌SMMC7721细胞产生凋亡时,凋亡抑制基因bcl-2和凋亡促进基因bax的mRNA和蛋白表达。结果:紫杉醇作用一定时间后,SMMC7721细胞产生凋亡、bcl-2显著下降、bax表达显著增高。结论:紫杉醇通过调节细胞凋亡抑制基因bcl-2和细胞凋亡促进基因bax的作用,从而诱导肝癌SMMC7721细胞产生凋亡。

白英提取物诱导肝癌SMMC7721细胞凋亡过程中bax和bcl-2基因表达

目的探讨中药白英提取物对肝癌SMMC7721细胞中细胞凋亡相关基因的影响。方法用不同浓度的白英提取物处理肝癌SMMC7721细胞,利用TUNEL法检测其细胞凋亡;通过原位杂交法、免疫组化法,研究白英提取物诱导肝癌SMMC7721细胞产生凋亡时,凋亡促进基因bax和凋亡抑制基因bcl-2的mRNA和蛋白表达。结果 IPP图像分析表明,bax表达显著增高,bcl-2显著下降。结论白英提取物通过调节细胞凋亡促进基因和抑制基因,从而诱导肝癌SMMC7721细胞产生凋亡。

KPNA2基因沉默对人肝癌细胞株SMMC7721和Bel7404增殖和侵袭能力的影响

目的观察核转运蛋白基因α2(Karyopherinα-2,KPNA2)基因沉默对人肝癌细胞株SMMC7721和Bel7404增殖以及侵袭能力的影响。方法将KPNA2 siRNA干扰质粒用LipofectaminTM 2000方法瞬时转染人肝癌细胞株SMMC7721和Bel7404,转染后48 h应用蛋白质印迹法检测转染细胞中KPNA2蛋白表达。采用MTT法检测基因沉默细胞增殖能力,采用Transwell法检测基因沉默细胞侵袭能力。结果 SMMC7721细胞株对照组mRNA为1.02±0.13,高于siRNA转染组的0.37±0.07(t=10.78,P<0.01);肝癌Bel7404细胞株对照组mRNA为1.05±0.17,高于siRNA转染组的0.36±0.06(t=9.38,P<0.01)。肝癌SMMC7721细胞株对照组蛋白定量值为0.96±0.10,高于转染组的0.42±0.05(t=11.83,P<0.01);肝癌Bel7404细胞株对照组蛋白定量值为0.93±0.09,高于转染组的0.48±0.06(t=10.19,P<0.01)。SMMC7721和Bel7404细胞株在24、48和72 h时对照组增殖能力高于转染组,且差异有统计学意义(P<0.05)。SMMC7721细胞株对照组侵袭能力值为126.20±21.61,高于siRNA转染组的51.13±10.2(t=7.68,P<0.01);肝癌Bel7404细胞株对照组侵袭能力值为125.124±8.04,高于siRNA转染组的55.20±18.54(t=8.48,P<0.01)。结论KPNA2基因沉默可以调节人肝癌细胞株SMMC7721和Bel7404的增殖能力和侵袭能力。

IGF-1R基因通过调控BMP2表达影响SMMC7721细胞的增殖和凋亡

背景与目的:胰岛素生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)是一种重要的肽类激素,通过与其受体(IGF-1 receptor,IGF-1R)和胰岛素受体(insulin receptor,IR)结合并激活下游信号通路发挥生物学作用,骨形态发生蛋白(bone morphogenetic proteins,BMPs)因可促进多种肿瘤细胞的增殖和侵袭而日益成为肿瘤分子研究领域的热点。该研究通过RNA干扰(RNAi)技术沉默IGF-1R基因,探讨其对肝癌SMMC7721细胞中BMP2表达的影响以及对细胞增殖和凋亡的影响。方法:构建靶向IGF-1R基因的RNAi真核表达质粒,转染至肝癌SMMC7721细胞,用反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)和蛋白[质]印迹法(Western blot)检测IGF-1R和BMP2基因表达抑制效应,MTT实验检测IGF-1R基因沉默后细胞生长曲线,流式细胞术检测IGF-1R基因沉默后细胞凋亡情况。结果:成功构建靶向IGF-1R基因的真核表达质粒,IGF-1R-si RNA-1和IGF-1R-si RNA-2转染至肝癌SMMC7721细胞后,对IGF-1R基因的m RNA抑制效率分别达到68.9%和80.7%(P<0.05),对BMP2基因的m RNA抑制效率分别达到79.5%和83.3%(P<0.05),对IGF-1R蛋白表达抑制率分别为46.1%和62.1%,对BMP2蛋白表达抑制率分别为42.5%和60.9%(P<0.05)。根据MTT实验结果,绘制的生长曲线显示,IGF-1R基因沉默后SMMC7721细胞增殖速率明显低于对照组(P<0.05),细胞凋亡比例高于对照组(P<0.05)。结论:IGF-1R基因沉默表达能介导BMP2基因不同水平下调表达,抑制SMMC7721细胞增殖,并促进细胞发生凋亡。

树舌多糖GF对肝癌细胞E2F1基因表达及细胞增殖的抑制作用

目的:研究树舌多糖GF对肝癌SMMC7721细胞E2F1基因表达及细胞增殖抑制的影响。方法:不同浓度树舌多糖GF处理SMMC7721细胞后,采用MTT法检测SMMC7721细胞的增殖;用Real-timePCR和Western blot检测E2F1 mRNA及其蛋白表达。结果:2.5,10μg/mL树舌多糖GF对肝癌细胞SMMC7721的增殖抑制效果最为显著。树舌多糖干预SMMC7721细胞后,E2F1mRNA表达下调,E2F1蛋白表达减少。结论:树舌多糖GF可下调E2F1的表达从而抑制肝癌细胞增殖。

预知子籽对多种肝癌细胞恶性增殖的抑制作用研究

目的:观察预知子籽及其联合G418对SMMC7721、HEPG2、HuH7 3种肝癌细胞恶性增殖的抑制作用。方法:采用MTT法及倒置镜相显微镜技术,观察预知子籽75%乙醇提取物及联合细胞毒抗生素G418用药对3种肝癌细胞恶性增殖的抑制作用,及对细胞形态学影响的异同。结果:预知子籽乙醇提取物对SMMC7721、HEPG2及HuH73种肝癌细胞的恶性增殖均具有显著地抑制作用(P<0.01),及量效关系,其中剂量(1.88 mg生药/m L)与G418(0.45 mg/m L)半量联合用药对肝癌细胞恶性增殖的抑制作用具有明显地减量增效作用(P<0.01)。细胞形态学检查显示,预知子籽小剂量(1.25 mg生药/m L)用药后,SMMC7721、HEPG2及HuH7肝癌细胞内均出现空泡,诱导出严重的内质网应激;中剂量(1.88 mg生药/m L)用药后,内质网应激更为显著,尤以SMMC7721细胞最为突出;至大剂量(2.5 mg生药/m L),3种肝癌细胞均呈现固缩脱胞浆现象。与预知子籽中剂量与细胞毒抗生素G418各自半量联合用药后,所有肝癌细胞均见固缩脱胞浆现象,或凋亡、死亡,尚存活细胞内仍见内质网应激现象。结论:预知子籽乙醇提取物具有选择性地诱导不同肝癌细胞严重的内质网应激,并抑制其恶性增殖,与G418联合用药对肝癌细胞恶性增殖的抑制具有减量增效作用。

p[5HRE]AFPp-p53/PEI-Fe_3O_4磁性纳米颗粒联合磁流体热疗对肝癌细胞的抑制作用

目的:建立p[5HRE]AFPp-p53/PEI-Fe_3O_4磁性纳米颗粒靶向基因治疗和磁流体热疗系统用于肝癌的联合治疗,以提高治疗的安全性和有效性。方法:亚克隆基因重组法构建靶向肝癌的治疗基因p[5HRE]AFPp-p53,并用限制性内切酶凝胶电泳法检测重组质粒是否构建成功;用共沉淀法制备磁性纳米颗粒PEI-Fe_3O_4,利用透射电镜、粒径仪、傅里叶转换红外光谱仪等对PEI-Fe_3O_4进行表征检测。MTT法检测PEI-Fe_3O_4转染p[HRE]AFPp-p53至不同细胞系后的细胞增殖及磁流体热疗和基因治疗联合作用对肝癌细胞Hep G2的增值抑制作用。结果:成功制备载有靶向治疗基因的p[5HRE]AFPp-p53/PEI-Fe_3O_4磁性纳米颗粒,由其介导的基因治疗组与阴性及纳米颗粒对照组相比,明显抑制肝癌Hep G2(AFP阳性)细胞[(0.592±0.041)vs(1.052±0.031)、(1.012±0.021),P<0.01]和SMMC7721(AFP阴性)细胞(0.813±0.042)vs(1.073±0.032)、(1.182±0.052),P<0.01]的增殖活性,但对非肝癌细胞(L929和Lovo)增殖抑制作用无明显影响(P>0.05)。基因治疗和磁流体热疗联合组与单独使用热疗组及基因治疗组相比显著增加Hep G2细胞的增殖抑制率(76.11%vs 35.22%、42.92%,均P<0.01)。结论:p[5HRE]AFPp-p53/PEI-Fe_3O_4磁性纳米颗粒对肝癌细胞具有特异性杀伤作用,并且能与磁流体热疗产生协同效应,是一种选择性高、治疗效果好的肿瘤治疗方法。

pcDNA3.1(+)-ABCG2真核表达载体的构建与鉴定

目的构建人的ABCG2基因真核表达载体pcDNA3.1(+)-ABCG2,并在ABCG2阴性SMMC7721肝癌细胞中表达。方法以人的癌细胞为材料提取RNA,经反转录得到cDNA,利用PCR方法,根据人ABCG2基因62526032(NM_004827.2)序列信息设计引物,扩增ABCG2基因的CDS序列,将其克隆到pcDNA3.1+表达载体中。酶切及测序鉴定重组质粒正确后,脂质体介导转染至ABCG2阴性SMMC7721肝癌细胞中。采用Western blot法检测外源基因ABCG2的表达。结果PCR扩增片段大小与理论片段大小相符,酶切大小与理论大小相符,阳性的克隆测序鉴定正确,表明人ABCG2基因克隆及真核表达载体pcDNA3.1(+)-ABCG2构建成功。在蛋白水平,转染72h后的细胞中外源基因ABCG2表达均明显增加。结论成功构建重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-ABCG2,并在ABCG2阴性SMMC7721肝癌细胞中进行了表达。

大黄素对人肝癌SMMC7721细胞增殖的抑制作用

目的:研究大黄素对人肝癌SMMC7721细胞增殖的抑制作用。方法:以0(阴性对照)、25、37.5、50、62.5、75、87.5、100μmol/L大黄素溶液和100μmol/L 5-氟尿嘧啶(5-FU)培养SMMC7721细胞24、48、72 h,检测细胞光密度,计算增殖抑制率。以0(阴性对照)、25、50、75μmol/L大黄素溶液和100μmol/L 5-FU培养SMMC7721细胞48 h,检测细胞凋亡率、周期分布和细胞Bax、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)基因表达。结果:与阴性对照比较,25、37.5、50、62.5、75、87.5、100μmol/L大黄素溶液和100μmol/L 5-FU作用后细胞增殖抑制率升高,且与大黄素的浓度和作用时间呈正相关。与阴性对照比较,25、50、75μmol/L大黄素和100μmol/L 5-FU作用后细胞凋亡率升高、Bax基因表达增强、Bcl-2基因表达减弱,其中50、75μmol/L大黄素溶液和100μmol/L 5-FU能明显滞留细胞于G0/G1期(P<0.05或P<0.01)。结论:大黄素能抑制SMMC7721细胞增殖,促进其凋亡,阻止其生长。

树舌多糖GF对siRNA干扰沉默CDK2基因表达的辅助作用

目的:探讨树舌多糖GF辅助siRNA干扰沉默CDK2基因表达的作用。方法:本实验采用人肝癌细胞SMMC7721为研究对象,将中药树舌多糖GF2.5μg·mL-1与siRNA干扰序列191联合应用,采用Real-time PCR方法检测CDK2基因mRNA水平表达情况。结果:树舌多糖GF2.5μg·mL-1与191序列合用比单纯应用191序列抑制率提高3%。结论:树舌多糖GF2.5μg·mL-1与191序列合用比单纯应用191序列抑制率提高3%,表明树舌多糖GF对RNAi技术沉寂肝癌CDK2基因有一定的辅助作用。