拟南芥ABF1及ABI5在不同处理下的表达模式分析

本文以7d龄哥伦比亚野生型拟南芥为研究对象,探究在不同NaCl、山梨醇、ABA、蔗糖处理下ABF1及ABI5的表达模式。qRT-PCR结果表明,与对照组相比,ABF1及ABI5的mRNA含量随NaCl浓度的增高逐渐降低,100mM及150mM NaCl处理下,ABF1的mRNA含量降至对照组的0.11和0.08倍,而ABI5的mRNA含量分别降至对照组的0.01和0.02倍;50mM的山梨醇处理下,ABF1及ABI5的mRNA含量增至对照组的3.7和1.32倍,100mM和150mM的山梨醇处理下,ABF1的mRNA含量分别增至3.32和1.72倍,ABI5的mRNA含量分别增至2.87和1.42倍;在50mM的蔗糖处理下,ABF1的mRNA含量降至对照组的0.91倍,此时ABI5的mRNA含量增至1.32倍,100mM和150mM的蔗糖处理下,ABF1的mRNA含量降至对照组0.57和0.15倍,ABI5的mRNA含量降至0.67和0.38倍。在10、30及50μM ABA处理下,ABF1的mRNA含量分别增至对照组的5.32、4.14及4.6倍,ABI5的mRNA含量分别增至8.53、7.2及11.5倍;在4℃和16℃处理下,ABF1的mRNA含量为对照组的0.86和3.02倍,而ABI5的mRNA含量为2.92和1.75倍。这些结果均表明ABF1及ABI5响应高盐、低温和ABA等过程。

儿童孤独症相关基因NRXN1β启动子功能分析

Neurexins是神经特异性突触蛋白,Neurexin1β结构的异常与孤独症密切相关。为分析孤独症相关基因NRXN1β最小启动子和调节基因转录的功能元件,本文构建了含NRXN1β基因上游调控区不同区域的荧光素酶报告基因质粒,转染HEK293细胞后,利用检测双荧光素酶报告基因的转录活性以确定NRXN1β基因最小启动子区,进而筛选出相应的显著增强或抑制报告基因活性的功能区;同时,为鉴定顺式作用元件,利用基因定点突变技术对基因功能区内和临近DNA序列进行连续的碱基突变;最后,采用转录因子预测工具对启动子功能区内的转录调控元件进行分析。结果首次发现NRXN1β最小启动子区位于?88^+156 bp,?88~?73 bp和+156^+149 bp可增强启动子活性,+229^+419 bp可抑制启动子活性,且?84~?63 bp为能够显著性增强启动子活性的顺式作用元件,该区域可能存在DBP(Albumin D-site-binding protein,DBP)和ABF1(Autonomously replicating sequence-binding factor 1,ABF1)两个转录因子结合位点。