ABI310遗传分析仪自动检测多重聚合酶链反应扩增短串联重复序列产物及数据分析的应用特征

背景:以往聚合酶链反应产物检测多采用EB染色、银染色等技术,由于肉眼观察容易产生误差,尤其对片段长度差距较小、谱带位置相距较近的电泳图谱分析更加困难。目的:通过ABI310遗传分析仪检测多重聚合酶链反应扩增短串联重复序列产物,评价其数据分析的准确性。设计、时间及地点:2003-09/2004-01在四川农业大学分子遗传实验室完成。材料:凉山半细毛羊20只,取耳组织。方法:采用多重重聚合酶链反应扩增凉山半细毛羊基因组上的Y染色体上SRY,MCM158,MAF45和X染色体上MILVET09,AE25序列后,进行ABI310遗传分析仪检测。主要观察指标:5个基因座的基因型和片断大小。结果:通过ABI310遗传分析仪检测准确获得5个基因座的全自动分型结果和片断大小。结论:ABI310遗传分析仪检测多重聚合酶链反应扩增短串联重复序列产物,得到的数据准确可靠。

基于毛细管电泳的TILLING实验技术的建立

CEL I内切酶特异识别并切断错配碱基,是建立TILLING实验技术平台的关键之一。本文从贵州省贵阳市当地种植的西芹中获得CEL I酶粗提物,利用一对具有已知单碱基差异的质粒作为底物验证所提CEL I酶粗提物的酶切活性,通过琼脂糖电泳和毛细管电泳对酶切产物进行检测,表明所获芹菜粗提物具有CEL I活性。本实验建立了适宜烟草TILLING实验的CEL I粗提物酶切体系:酶切温度42℃,酶切时间60 min,酶切反应总体积15μL,包括8μL PCR产物、4.5μL ddH2O、1.5μL酶切缓冲液(pH 7.5,500 mmol/L KCL,100 mmol/L Tris-Cl,15 mmol/L MgCl2)和1μL CEL I酶(稀释为原始粗提液0.05倍)。